孫 靜，朱 博，李 宇，楊 麗，陳建波*，董 玲*

（1. 北京中醫(yī)藥大學 中藥學院，北京 102488；2. 北京中醫(yī)藥大學 生命科學學院，北京 102488）

黃芩為唇形科植物黃芩Scutellariae baicalensisGeorgi 的干燥根，味苦，性寒，目前臨床使用較多的有生黃芩、酒黃芩和黃芩炭[1]。其中黃芩炭炮制歷史悠久，在臨床中被廣泛應用于治療血熱出血、炎性疾病等[2]，其質(zhì)量控制也越來越受到人們的重視。

黃芩炭收載于多部地方性炮制規(guī)范，在炮制終點的判斷上以外觀描述為主[3-6]，同時在黃芩炭的質(zhì)量研究中多集中于炒制前后的飲片中黃酮類成分的含量變化[7-10]，但具體的炮制終點仍有待于進一步探索。通過現(xiàn)有資料發(fā)現(xiàn)黃芩炭浸膏成分的研究少有報道，而中藥湯劑是中醫(yī)治病中最常用的劑型，其質(zhì)量會直接影響藥效。同時考慮到黃芩炭中黃酮類成分自身的結(jié)構(gòu)特點使其水溶性較差，其在黃芩炭浸膏中的含量變化規(guī)律不完全等同于飲片?？梢娒鞔_黃芩炭飲片及浸膏中有效成分的轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)移規(guī)律對于黃芩炭的質(zhì)量控制與終點判斷是非常必要的。

因此，本研究擬通過改變炒制溫度和時間來制備不同炮制程度的黃芩炭飲片，尋找飲片與浸膏中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素的轉(zhuǎn)化規(guī)律及變化模式，探索四種成分從飲片到浸膏的轉(zhuǎn)移率大小，同時采用PCA 分析對其炮制程度綜合評價以更加全面地解讀其炮制過程，為建立能夠反應臨床藥效的黃芩炭炮制終點的判斷標準奠定基礎(chǔ)。

⑧試壓合格的管道應及時進行閥門井室安裝及溝槽回填，管溝分層填土并用蛙式打夯機夯實。因管線經(jīng)過地段多為山區(qū)，且管道布置曲線較多，為便于以后維修查找，管溝回填后及時埋設(shè)水道標。水道標為鋼筋混凝土制，沿管線間距100m埋設(shè)在管道正上方，并在管道轉(zhuǎn)彎、與道路交叉處設(shè)置。水道標埋入地下0.7 m，地面以上0.5m，水道標周圍填土應分層回填密實。

1 材料

1.1 儀器

MS-5 型炒貨機（常州邁斯機械有限公司）；HW.SY21-KP6 型智能恒溫水浴鍋（北京市長風儀器儀表公司）；LC-20AT 型高效液相色譜儀，SPD-20A型紫外檢測器，SIL-20A 型自動進樣器（日本島津公司）；BSA224S 型電子分析天平（德國賽多利斯科學儀器有限公司）；KH7200DB 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；BJ-800A 型多功能粉碎機（上海拜杰實業(yè)有限公司）；六號藥典篩。

1.2 試藥

黃芩苷（質(zhì)量分數(shù)：98%，批號：N15GB167969）、漢黃芩苷（質(zhì)量分數(shù)：98%，批號：P09J8F28374）、漢黃芩素（質(zhì)量分數(shù)：98%，批號：M02GB140399）、黃芩素（質(zhì)量分數(shù)：98%，批號：C06M11Y112461）均購自上海源葉生物科技有限公司；甲醇（色譜級，美國Thermo Fisher Scientific 公司）；分析純磷酸（批號：20170225，北京化工廠）；娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）。

詞匯是文本中最小的語義單位，文化負載詞（culture-loaded words)能最直接的反映民族的特有文化。所謂“文化負載詞”或“文化承載詞”就是“標志某種文化中特有事物的詞、詞組和習語，反映了特定民族在漫長的歷史進程中逐漸積累的、有別于其他民族的、獨特的活動方式”（廖七一，2002）。在總體結(jié)構(gòu)上，嶺南文化可分為自然物質(zhì)文化、社會生活文化和精神心理文化三個組成部分。（仲偉合、左巖，2015）包含飲食，服裝、交通等大量的物質(zhì)文化負載詞，如：云吞、叉燒、粿汁、鹵鴨、點心、大排檔等。傳統(tǒng)節(jié)日、春運、花市、族譜等社會文化負載詞。如碉樓、秦琴、粵劇等精神文化層面的負載詞。

1.3 飲片

黃芩片（批號：20210401），購于安徽九合堂國藥有限公司。經(jīng)北京中醫(yī)藥大學中藥學院王晶娟教授鑒定為唇形科黃芩屬植物黃芩Scutellaria baicalensisGeorgi 的干燥根的炮制品。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃芩炭飲片及浸膏的制備

2.2.4 方法學考察 （1） 線性關(guān)系考察 取“2.2.3”項下混合對照品溶液分別按一定的倍數(shù)稀釋為一系列不同質(zhì)量濃度的混合對照品溶液，采用0.22 μm微孔濾膜濾過后進樣測定，每次10.0 μL，檢測完畢后記錄各個待測物質(zhì)的色譜峰面積。以進樣質(zhì)量濃度為橫坐標（X，μg/mL），峰面積為縱坐標（Y），繪制各個成分的標準曲線，結(jié)果表明，4 個待測成分在一定濃度范圍內(nèi)峰面積與質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系，見表1。

圖1 不同炮制程度黃芩炭樣品Fig. 1 Scutellariae Radix Charcoalin different processing levels

浸膏的制備：取上述19 批樣品各50 g，加9 倍量水浸泡30 min，煮沸后計時30 min，過濾，濾渣再加入7 倍量水進行二次煎煮，煮沸后計時20 min，過濾，合并二次濾液，減壓濃縮至生藥濃度1 g/mL，凍干即得。同時稱量質(zhì)量計算出膏率，用以研究其轉(zhuǎn)移率大小及變化。

2.2 黃酮類成分含量測定

2.2.1 色 譜 條 件 Gemini C18色 譜 柱（ 4.6 mm×250 mm，5 μm），檢測波長：280 nm；流速：1 mL/min；進樣量：10μL；柱溫：30 ℃。以0.2%磷酸水溶液（A）-甲醇（B）為流動相，梯度洗脫：0 ～ 25 min，47%B；26 ～ 35 min，47%→60%B；36 ～ 45 min，60%→70%B；45 ～ 60 min，47%B。

歸屬感是指對人群的喜愛依戀等心理感受，如對住宅的位置、標識物等以及由此而產(chǎn)生的 自豪感和其他特有的感情。任何個人都離不開一定的團體或組織，人們 常常由于相同職業(yè)歸屬于一個單位，由于共同的居住地屬于某個地區(qū)，從“血緣 ”的家庭關(guān)系中擴展到“業(yè)緣 ”和“地緣 ”關(guān)系，這種“地緣 ”關(guān)系由此產(chǎn)生“遠親不如近鄰 ”、“落葉歸根”等 鄉(xiāng)土觀念.所以，人們偏愛具有親切感 、歸屬感而不感到陌生的生活空間。面對社會、工作、生活中的種種壓力，當回到家時從空間之中所得到溫暖，壓力的釋放以及輕松，有著“家”的感覺。當室內(nèi)的空間會帶給人一種舒適感，輕松感，釋放精神壓力時，便會有歸屬感。

由圖4 各成分載荷圖可知，黃芩素與漢黃芩素相聚集，表明其系數(shù)顯著正相關(guān)，再次證明了不同炮制程度的黃芩炭樣品中苷元類成分呈現(xiàn)相似的變化模式；黃芩苷與漢黃芩苷相聚集，表明其系數(shù)顯著正相關(guān)，驗證其糖苷類成分呈現(xiàn)相似變化模式。

2.2.3 供試品溶液的制備 取“2.1”項下原飲片、黃芩炭飲片的粉末，以及原飲片浸膏凍干粉、黃芩炭浸膏凍干粉0.30 g，精密稱定，加70%乙醇40 mL，加熱回流3 h，放冷，濾過，濾液置100 mL 容量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘渣，洗液濾入同一容量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取1 mL，置2 mL 容量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，過0.22 μm 微孔濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

飲片的制備：取同一批黃芩飲片18 份，每份300 g，置于炒貨機中，于150、180、210 °C 分別炒制10、20、30、40、50、60 min，另取300 g 黃芩飲片作為原飲片進行對比測定。以上實驗均在同一環(huán)境下當天制備，以避免外界因素的影響。最終得到共18 批黃芩炭及1 批黃芩飲片，見圖1，其中取一部分進行打粉，過六號藥典篩，用以檢測含量。

表1 19 批樣品中4 種成分的線性考察結(jié)果Tab. 1 Linear test results of 4 components in 19 batches of samples

進一步將黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素的含量檢測結(jié)果導入SIMCA 14.1 軟件進行分析。主成分分析結(jié)果顯示主成分1（PC1）與主成分2（PC2）累積方差貢獻率為98.7%，表明PC1 和PC2 可以解釋說明98.7%的原始信息。19 批黃芩炭質(zhì)量具有明顯差異，可大致分為A、B、C 類，結(jié)合外觀及化學含量可以認為分別對應“炮制不及”“炮制適中”“炭化過度”，見圖3。

（3） 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液［180℃（30 min）的黃芩炭飲片］，分別于制備后0、2、4、6、12、24 h 內(nèi)進樣測定，記錄各待測物質(zhì)的色譜峰面積，計算RSD。結(jié)果顯示，4 個待測物質(zhì)在24 h 內(nèi)色譜峰面積的RSD 分別是0.73%、0.12%、0.23%、1.50%，均小于2.00%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

（4）重復性試驗 取同一批次［180℃（30 min）］黃芩炭飲片粉末0.30 g，共6 份，精密稱定，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液。結(jié)果顯示，6 份供試品溶液中4 個待測物質(zhì)的RSD 值分別為1.18%、1.47%、3.02%、1.86%，表明該方法重復性較好。

（5）加樣回收率試驗 取同一批已知含量的［180℃（30 min）］黃芩炭飲片粉末0.15 g 共12 份，分別吸取低、中、高濃度對照品溶液適量（使得其質(zhì)量分數(shù)分別相當于原黃芩樣品中的50%、100%、150%），根據(jù)測得量和加入量計算各成分的加樣回收率和RSD，平均加樣回收率分別為 103.22%、99.03%、99.59%、95.89%，RSD 分別為 2.18%、3.33%、1.66%、3.67%，表明方法的準確性較好，見表2。

采集氣體樣品的同時，用數(shù)字溫度計（Model 2455，Yokogawa，Japan）記錄氣溫、箱溫和土溫，用直尺記錄田面水層厚度，用 DMP-2數(shù)字式氧化還原電位計測定土壤Eh。每隔8~14天采集1次土樣。土樣用2 mol·L-1 KCl溶液浸提（土水質(zhì)量比為1∶5），由 Skalar流動分析儀（Skalar，Netherlands）測定浸提液中NO3ˉ-N和NH4+-N濃度。水稻收獲時，按試驗小區(qū)分別收割、脫粒、晾曬、適當篩除秕粒后稱重，計算水稻產(chǎn)量。

2.3 MTHFR C677T、MTHFR A1298C和MTRR A66G位點等位基因分布情況 湖口縣漢族女性MTHFR C677T、A1298C和MTRR A66G等位基因分布與其他地區(qū)的差異基本與相應的基因型分布差異一致，其中MTHFR C677T位點T等位基因的頻率整體上呈現(xiàn)隨緯度降低而降低的趨勢，MTHFR A1298C位點C等位基因的頻率則整體上呈現(xiàn)相反的趨勢。見表4。

表2 4 種成分的加樣回收率考察結(jié)果Tab. 2 Results of recovery of 4 components in 19 batches of samples

2.3.1 黃芩炭飲片中黃酮類成分轉(zhuǎn)化規(guī)律分析將19 批不同炮制程度黃芩炭飲片的含量測定結(jié)果進行作圖對比分析，見圖2?？梢悦鞔_黃芩炭在炮制過程中黃芩素、漢黃芩素含量呈先上升后下降的變化模式，黃芩苷、漢黃芩苷在炒制時間短時有輕微上升趨勢，但整體呈單向遞減的變化模式。當飲片炒制條件為150°C（50 min）、180°C（30 min）、210°C（20 min）時，黃芩素、漢黃芩素含量達到最高，其后開始下降，存在拐點現(xiàn)象，表明在炮制過程中糖苷類成分向相應苷元類成分發(fā)生了轉(zhuǎn)化。

表3 黃芩炭樣品中黃酮類成分含量測定結(jié)果Tab. 3 Contents of flavonoids in Scutellariae Radix Carbonisatum

表4 黃芩炭浸膏中黃酮類成分含量測定結(jié)果Tab. 4 Content determination of Scutellariae Radix Charcoal extracts

2.3 基于PCA 對黃芩炭中黃酮類成分含量轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)移率分析

2.2.5 黃芩炭及浸膏中黃酮類成分的含量測定按照“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，進行HPLC測定分析，其飲片含量檢測數(shù)據(jù)見表3，以浸膏凍干粉的質(zhì)量與黃芩炭樣品的投藥量之比為出膏率，其大小及含量見表4。在以往黃芩炭研究中發(fā)現(xiàn)黃酮類成分含量單位大多用質(zhì)量分數(shù)、百分含量等表示，為了更直觀地觀察和比較四種黃酮類成分的轉(zhuǎn)化規(guī)律，故將含量單位換算成摩爾質(zhì)量分數(shù)進行分析。從測定結(jié)果可知，炮制程度不同，糖苷到苷元的轉(zhuǎn)化程度不同。

圖2 黃芩炭飲片中黃酮類成分變化趨勢圖Fig. 2 Trend diagram of flavonoids composition in Scutellariae Radix Charcoal

（2）精密度試驗 取同一混合對照品溶液，連續(xù)進樣6 次，每次10.0μL，記錄各待測成分的色譜峰面積。結(jié)果顯示，4 個待測物質(zhì)峰面積的RSD為0.12%、0.17%、0.13%、0.11%，均小于0.50%，表明儀器的精密度良好。

圖3 黃芩炭樣品主成分得分圖Fig. 3 Plot of principal component scores of Scutellariae Radix Charcoal

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素對照品適量，置于25 mL容量瓶中，加入甲醇溶解，搖勻，配制成質(zhì)量濃度分別為0.434 4 mg/mL、0.513 2 mg/mL、0.298 0 mg/mL、0.451 2 mg/mL 的混合對照品溶液，備用。

應掌握小若蟲高峰期，每百叢蟲量達1500頭以上時施藥防治。藥時應注意先從田的四周開始，由外向內(nèi)，實行圍殲。噴藥要均勻周到，注意把藥液噴在稻株中、下部。使用撲虱靈可濕性粉劑20克-25克，或25%優(yōu)樂得可濕性粉劑20克-25克，或20%葉蟬散乳油150毫升，任選一種，對水75千克-100千克常規(guī)噴霧，或?qū)λ?千克-7.5千克低量噴霧。

圖4 黃芩炭樣品主成分載荷圖Fig. 4 Principal component loading diagram of Scutellariae Radix Charcoal

2.3.2 黃芩炭浸膏中黃酮類成分轉(zhuǎn)化規(guī)律分析 19批黃芩炭浸膏中黃酮類成分含量的變化趨勢見圖5。從含量大小可知其轉(zhuǎn)化規(guī)律不完全等同于飲片，即浸膏中苷類成分整體高于飲片中含量，苷元類成分整體低于飲片中成分，因此其糖苷與苷元的比例不相同。

圖5 黃芩炭浸膏中黃酮類成分變化趨勢圖Fig. 5 Trend diagram of flavonoids composition in Scutellariae Radix Charcoal extracts

同樣以四種黃酮類成分含量進行主成分分析，見圖6、圖7。主成分分析結(jié)果表明PC1 和PC2 可以解釋說明99.8%的原始信息。圖6 黃芩炭浸膏的得分圖表明不同黃芩炭浸膏的黃酮類成分也同樣具有明顯差異，可大致分為A、B、C 三類，且由圖7 可知，浸膏中苷元類成分變化規(guī)律一致，苷類成分變化一致。其中150°C（40 min）的飲片樣品屬于A 類，對應浸膏分類為B 類，180°C（40 min）的樣品相比于飲片得分圖中位置也發(fā)生改變，均可能是由于煎煮過程中有效成分的轉(zhuǎn)移變化導致的[11]。

在對養(yǎng)路機械進行點檢管理時期，管理人員的專業(yè)能力對養(yǎng)路機械的檢測效果有決定作用。因此，在對養(yǎng)路機械進行點檢時，應聘請經(jīng)驗豐富的點檢管理人員實施具體的點檢管理工作，并對專業(yè)水平有待提高的人員進行能力培訓，促進工作人員樹立較強的管理意識，進而推動養(yǎng)路機械的點檢管理工作水平的提升。

圖6 黃芩炭浸膏主成分得分圖Fig. 6 Plot of principal component scores of Scutellariae Radix Charcoal extracts

圖7 黃芩炭樣品主成分載荷圖Fig. 7 Principal component loading diagram of Scutellariae Radix Charcoal extracts

綜上所述，利用PCA 可以將不同炮制程度的黃芩炭飲片及浸膏進行綜合評價，同時明確糖苷、苷元的轉(zhuǎn)化規(guī)律及變化模式，為今后炮制機制的研究提供依據(jù)。

2.3.3 黃酮類成分從飲片到浸膏的轉(zhuǎn)移率分析為了明確四種成分的轉(zhuǎn)移情況，對其轉(zhuǎn)移率進行計算并分析，見圖8。其中，轉(zhuǎn)移率（%）=（浸膏中各黃酮類成分含量×出膏率）/飲片中各黃酮類成分含量[12-13]。由圖8 可知，炮制程度會明顯影響黃芩炭中有效成分的轉(zhuǎn)移率，即隨著炮制程度的增加，浸膏中四種成分的轉(zhuǎn)移率均呈下降趨勢，同時也說明了炮制程度越深，四種成分從飲片中越不容易煎煮出來。

圖8 黃芩炭飲片-浸膏四種黃酮類成分轉(zhuǎn)移率變化圖Fig. 8 Transformation and transfer of flavonoids in Scutellariae Radix Charcoal

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)黃芩炭化過度會明顯降低浸膏的出膏率即有效物質(zhì)總量。課題組前期通過測定不同炮制程度的黃芩炭飲片中醇溶性浸出物的含量，發(fā)現(xiàn)在同一炮制溫度下，其浸出物含量隨炮制時間的增加而逐漸下降，且當180°C 炮制40 ～ 60 min 以及210°C 炮制30 ～ 60 min 時，其浸出物的含量均下降至10%以下。由于浸膏是經(jīng)過多次煎煮得到的，其出膏率大小取決于浸膏質(zhì)量，進而受炮制程度的影響。這也揭示了不同炮制程度的黃芩炭浸膏中四種黃酮類物質(zhì)的總量是逐漸降低的，再次證明了黃芩炭在上述炮制溫度與時間下已炮制過度。因此本研究所用的炮制品同時包含了炮制不及、炮制適中、炭化過度三個程度，以更加全面地闡釋黃芩炭的炮制過程以及完整合理性。

一般認為中藥經(jīng)炒制后利于有效成分的溶出，但是本研究發(fā)現(xiàn)隨著炮制程度增加，黃芩炭中四種有效成分的轉(zhuǎn)移率均降低。根據(jù)相關(guān)文獻，推測黃酮類成分轉(zhuǎn)移率下降的可能原因包括：（1）黃芩在高溫炒制過程中黃酮苷的糖苷鍵斷裂生成相應的黃酮苷元與α-D-吡喃葡萄糖醛酸，α-D-吡喃葡萄糖醛酸及其進一步的水解產(chǎn)物、鞣質(zhì)類等分解出的沒食子酸等小分子有機酸使水溶液pH 值降低，而黃芩苷、黃芩素等在酸性條件下溶解度變低[14]；（2）萬鵬等[15]研究表明靈芝多糖可以促進黃芩苷在水中的溶解，隨著黃芩炭炮制程度的加深，淀粉、纖維素、半纖維素等多糖類成分逐步分解，可能導致黃酮類成分溶解度降低、轉(zhuǎn)移率降低；（3）黃芩炭炮制程度增加時，形成的焦炭結(jié)構(gòu)[16]吸附力提高，進而影響黃酮類成分的溶出和轉(zhuǎn)移率。這表明雖然黃芩炭浸膏中糖苷與苷元類成分的變化趨勢與飲片類似，但是溶解度與轉(zhuǎn)移率的變化使黃芩炭浸膏中苷元類成分的含量拐點可能不同于黃芩炭飲片。

吸收是發(fā)揮藥效的前提，中藥湯劑雖以液體形式使用, 但其中成分也多數(shù)通過吸收而進入機體發(fā)揮療效，現(xiàn)有基礎(chǔ)認為黃酮苷元類比糖苷類更容易吸收[17-18]，因此初步推測黃芩素、漢黃芩素等苷元類成分含量增加可以加快藥效物質(zhì)吸收，進而影響藥效，提示藥動學參數(shù)可以成為黃芩炭的質(zhì)控指標之一，但仍需進一步進行動物水平的藥效實驗加以驗證與完善。

觀察組急性闌尾炎合并糖尿病患者并發(fā)癥發(fā)生率2.22%較對照組低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表1。

4 結(jié)論

本研究明確了炮制程度對黃芩炭四種黃酮類成分之間轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)移的影響規(guī)律，證明了黃芩的炒炭過程中主要是糖苷鍵的斷裂即糖苷轉(zhuǎn)化為苷元，同時指出成分轉(zhuǎn)移率隨炮制程度的加深逐漸下降。因此綜合飲片及浸膏含量可知苷元含量拐點處達到最大轉(zhuǎn)化，且成分的轉(zhuǎn)移率相對較高，初步認為拐點處條件是黃芩炭的炮制終點，為其質(zhì)量控制、炮制機理的研究以及臨床應用提供一定的理論參考。