朱立勛，范佳利，郭志強(qiáng)，楊博慧，柴文婷，趙珊珊，孫慧瓊，呂晉慧，姜曉東，張春來(lái)

（1. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué) a. 農(nóng)學(xué)院；b. 林學(xué)院，太谷 030801；2. 國(guó)家功能雜糧技術(shù)創(chuàng)新中心，太谷 030801；3. 山西省旱作栽培與作物生態(tài)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，太谷 030801；4. 省部共建黃土高原特色作物高效生產(chǎn)協(xié)同創(chuàng)新中心，太谷 030801）

高粱［Sorghum bicolor（L.）Moench］屬禾谷類C4作物，產(chǎn)量高，抗逆性強(qiáng)，具有抗旱、耐澇、耐鹽堿的特性［1］，其植株各個(gè)部分都有潛在的利用價(jià)值，是重要的糧食作物、飼料作物以及生物燃料作物［2-3］。高粱全基因組測(cè)序的工作初步在2009年完成，并在最近得到完善，這使得從基因組水平來(lái)揭示高粱重要基因家族的功能得以實(shí)現(xiàn)［4-5］。

氯離子通道蛋白（chloride channel，ClC）存在于生物體細(xì)胞膜上，是一種隨處可見(jiàn)的陰離子通道，在植物的多種生理活動(dòng)中都必不可少。其在細(xì)胞膨壓調(diào)節(jié)、氣孔運(yùn)動(dòng)、激素信號(hào)識(shí)別與轉(zhuǎn)導(dǎo)、陰離子營(yíng)養(yǎng)運(yùn)輸、生長(zhǎng)調(diào)控、離子穩(wěn)態(tài)、鹽分和金屬脅迫抗性等方面發(fā)揮著非常重要的作用［6-7］。植物細(xì)胞內(nèi)所涉及的陰離子主要包括無(wú)機(jī)離子，如硝酸根離子（NO3-）、氯離子（Cl-）、硫酸根離子（SO42-）和磷酸根離子（PO43-）等，有機(jī)陰離子包括檸檬酸根離子、蘋果酸根或草酸根離子等。其中ClC蛋白家族受到人們的關(guān)注程度最高［8］。利用爪贍卵母細(xì)胞基因表達(dá)技術(shù)在石紋電鰩中分離得到了第1個(gè)ClC家族蛋白（ClC-0）［9］，新成員后續(xù)又在大腸桿菌、酵母、哺乳動(dòng)物和植物中陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)。

鹽脅迫危害植物的一種形式就是離子毒害，鹽堿土中的鹽分主要是由碳酸鹽、碳酸氨鹽、硫酸鹽、鹽酸鹽組成，部分地方還包含有硝酸鹽［10］。然而，鹽離子的毒害主要是由Na+和Cl-造成的。在離子脅迫下，Na+和Cl-在植物體內(nèi)不斷積累，當(dāng)積累到一定程度時(shí)將會(huì)干擾甚至破壞植物體內(nèi)的各種代謝途徑，這時(shí)Na＋和Cl-對(duì)植物本身就具有了毒害作用［11］。因此，探究植物在鹽脅迫下對(duì)Na+和Cl-脅迫的響應(yīng)，對(duì)植物細(xì)胞內(nèi)一些離子平衡調(diào)節(jié)基因的研究有著舉足輕重的作用［12］。人們?cè)谘芯恐参锏哪望}性時(shí)，也常常只關(guān)注Na+的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)，而對(duì)Cl-參與植物耐鹽機(jī)制方面鮮有報(bào)道。Cl-作為植物細(xì)胞重要的陰離子，不僅參與了鹽離子的平衡，也可能在細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育過(guò)程中提供了值得進(jìn)一步研究的內(nèi)在驅(qū)動(dòng)力。植物可以通過(guò)木質(zhì)部中柱細(xì)胞質(zhì)膜陰離子通道蛋白調(diào)控Cl-卸載至木質(zhì)部，影響地上部分Cl-含量［13-14］。減少Cl-會(huì)對(duì)植株生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生負(fù)面影響，但會(huì)對(duì)提高作物耐逆性產(chǎn)生重要的作用，Cl-主要是通過(guò)氯離子通道進(jìn)入植物體內(nèi)，因此對(duì)氯離子通道的研究將會(huì)提高作物耐逆性，進(jìn)而增加作物總產(chǎn)量［11］。在鹽脅迫下，對(duì)不同種類的高粱及其他種類植物體內(nèi)Cl-吸收、運(yùn)輸及其調(diào)控機(jī)制的研究即植物耐氯性的研究必然會(huì)是植物耐鹽性研究不可或缺的重要組成部分。

本研究利用生物信息學(xué)的方法和相關(guān)軟件，對(duì)高粱的ClC基因家族進(jìn)行分析，旨在為探究ClC基因在高粱上的調(diào)控生長(zhǎng)發(fā)育和抵御逆境提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 基因檢索

利用EnsemblPlants數(shù)據(jù)庫(kù)（plants.ensembl.org/index.html）檢索到高粱ClC序列，在Phytozome（https://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html）和NCBI（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行Blast搜尋和比對(duì)，結(jié)合轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)，檢測(cè)到ClC家族，并獲得ClC家族在高粱中的基因序列、編碼序列（coding sequence，CDS）、蛋白質(zhì)序列；玉米（Zea mays）、水稻（Oryza sativaL.）、擬南芥（Arabidopsis thaliana）的ClC蛋白質(zhì)序列來(lái)自NCBI；大豆（Glycine max）的ClC蛋白質(zhì)序列來(lái)自Phytozome數(shù)據(jù)庫(kù)。

1.2 生物信息學(xué)分析方法

采用TBtools［15］軟件分析基因的結(jié)構(gòu)、染色體定位及熱圖的制作；采用ExPASY-ProtParam tool（http://web.expasy.org/protparam）對(duì)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)進(jìn)行分析；采用SignalP-5.0 Server（www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/）預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)是否含有信號(hào)肽；采用PSORT（psort1.hgc.jp/form.html）對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析預(yù)測(cè)。

采用SOPMA（https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=npsa_sopma.html）對(duì)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)，利用TBtools繪制高粱ClC基因家族保守基序圖。

將高粱ClC基因起始密碼子上游2 000 bp序列上傳至PlantCARE數(shù)據(jù)庫(kù)（http://bioinfor-matics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/），進(jìn)行啟動(dòng)子順式作用元件分析。利用MEGAX［16］軟件對(duì)序列進(jìn)行Clustal W［17］比對(duì)，然后再使用鄰接法（neighbor joining，NJ）構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。利用已發(fā)表的高粱Sb-ClCs基因表達(dá)Atalas數(shù)據(jù)［5，18］，在phytozome中獲取目的基因在高粱各個(gè)生育期、不同器官部位的表達(dá)量及同源蛋白，再利用TBtools軟件作出表達(dá)量的熱圖及進(jìn)化選擇分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 SbClCs基因家族基本信息

利用數(shù)據(jù)庫(kù)篩選到SbClCs基因10個(gè)（表1）。SbClCs家族的基因長(zhǎng)度為3 332～27 888 bp，分布在SBI-01、SBI-03、SBI-04、SBI-06、SBI-07、SBI-10共6條染色體上，基因定位圖（圖1）顯示，SbClCs基因家族的分布較為離散，主要集中在SBI-03、SBI-04、SBI-06染色體上，其余染色體上都只有一個(gè)。具體蛋白質(zhì)的編號(hào)如表1所示。

圖1 SbClCs染色體定位Fig. 1 SbClCs chromosome location

表1 SbClCs基因家族基本信息Tab. 1 Basic information for the SbClCs gene family

2.2 SbClCs基因結(jié)構(gòu)分析

SbClCs基因結(jié)構(gòu)分析顯示（圖2），所有SbClCs含有上下游非編碼區(qū)域，其中SbClCc1和SbClCg1的下游非編碼序列較長(zhǎng)，SbClCc3和SbClCc2的上游非編碼序列較長(zhǎng)，其余基因的上下游非編碼序列均較短；CDS為編碼蛋白產(chǎn)物的序列，大部分的基因內(nèi)含子數(shù)量集中在6～9個(gè)之間，SbClCd的CDS數(shù)量最多高達(dá)23個(gè)，SbClCa的CDS數(shù)量很少只有4個(gè)；SbClCd內(nèi)含子較長(zhǎng)，由于外顯子與內(nèi)含子接頭區(qū)存在一段高度保守的一致序列，SbClCd相對(duì)其他SbClCs存在更多的高度保守序列數(shù)量。

圖2 SbClCs基因結(jié)構(gòu)Fig. 2 SbClCs gene structure

2.3 SbClCs蛋白質(zhì)理化性質(zhì)

由表2可知：SbClCs蛋白質(zhì)氨基酸數(shù)目在722～815個(gè)之間；分子量大小在77 411.37～88 505.91 Da之間；理論等電點(diǎn)在5.83～9.01之間，大部分蛋白質(zhì)等電點(diǎn)大于6；不穩(wěn)定系數(shù)分析表明，6個(gè)SbClCs蛋白為穩(wěn)定蛋白（instability index＜40），4個(gè)SbClCs蛋白為不穩(wěn)定蛋白；蛋白質(zhì)的流動(dòng)性是由脂溶系數(shù)的高低決定的，系數(shù)越高，流動(dòng)性越好，除了SbClCf1和SbClCf2蛋白，其余蛋白的脂溶系數(shù)均高于100，這表明SbClCs蛋白具有良好的流動(dòng)性；親水性平均值都大于0，表明SbClCs蛋白質(zhì)全部是疏水性蛋白。

表2 SbClCs蛋白質(zhì)理化性質(zhì)Tab. 2 The physical properties of SbClCs proteins

2.4 SbClCs蛋白質(zhì)信號(hào)肽及亞細(xì)胞定位分析

根據(jù)蛋白質(zhì)信號(hào)肽分布，SbClCd、SbClCf1、Sb-ClCa、SbClCe、SbClCf2、SbClCc1、SbClCc2、SbClCc3、SbClCg2這9個(gè)蛋白質(zhì)的信號(hào)肽分值（signal peptide score，S）均＞0.5，表明蛋白含信號(hào)肽，為分泌性蛋白；SbClCg1的蛋白信號(hào)肽剪切位點(diǎn)分值（cut score，C）、綜合剪切位點(diǎn)分值（synthetical cut score，Y）均＜0.5，表明蛋白都不含信號(hào)肽，不是分泌性蛋白。通過(guò)蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)（表3），在質(zhì)膜上定位到8個(gè)SbClCs蛋白，區(qū)間為60.0%～80.0%，在葉綠體類囊體膜上定位了2個(gè)SbClC蛋白，概率分別為97.4%和79.5%。

表3 SbClCs蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位Tab. 3 Subcellular location of SbClCs proteins

2.5 SbClCs蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)分析及蛋白結(jié)構(gòu)域分析

SbClCs蛋白家族的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要是由α-螺旋和無(wú)規(guī)則卷曲構(gòu)成，而延伸鏈和β-轉(zhuǎn)角所占比例較低（表4）。由此可以推測(cè)出，SbClCs蛋白的主要結(jié)構(gòu)元件為α-螺旋和無(wú)規(guī)則卷曲，而延伸鏈和β-轉(zhuǎn)角則零散的散布在整個(gè)蛋白質(zhì)中。

表4 SbClCs蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)分析Tab. 4 Analysis of the secondary structure of SbClCs protein unit: %

domain是在較大的蛋白質(zhì)分子中形成的某些在空間上可以辨別的結(jié)構(gòu)，往往是球狀壓縮區(qū)或纖維狀壓縮區(qū)，它們既是結(jié)構(gòu)單位，又是功能單位。對(duì)高粱SbClC蛋白的氨基酸序列進(jìn)行結(jié)構(gòu)域分析（圖3），結(jié)果發(fā)現(xiàn)：高粱ClC蛋白共包含5種保守結(jié)構(gòu)域，CBS pair voltage gated ClC uk bac存在于9個(gè)SbClCs蛋白序列中，Voltage gated ClC存在于3個(gè)Sb-ClCs蛋白序列中，CBS pair SF superfamily僅存在于SbClCc1和SbClCg1中，ClC 6 like存在于5個(gè)SbClCs蛋白序列中，而Voltage gated ClC superfamily則存在于剩余的2個(gè)SbClCs蛋白序列中。明顯可以看出，ClC蛋白家族的保守基序排列位置大致相同。因此domain是相對(duì)保守的結(jié)構(gòu)域，ClC蛋白家族成員也相對(duì)保守。高粱ClC基因功能與蛋白質(zhì)的功能可能與domain的保守性有關(guān)。而這些保守結(jié)構(gòu)域的存在，為ClC蛋白在Cl-轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中提供了極大的保障，具有重要意義。

圖3 高粱ClC蛋白結(jié)構(gòu)域Fig. 3 Sorghum ClC protein domain

2.6 SbClCs基因啟動(dòng)子分析

通過(guò)分析高粱SbClCs基因家族啟動(dòng)子區(qū)的順式作用元件了解其潛藏的功能（圖4）?？梢詫?0個(gè)高粱SbClCs基因家族啟動(dòng)子區(qū)順式作用元件分為兩類：一類與植物的生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)，另一類與逆境響應(yīng)相關(guān)。脫落酸響應(yīng)元件（abscisic acid response element，ABRE）在8個(gè)SbClC基因啟動(dòng)子區(qū)域都有發(fā)現(xiàn)，其中在SbClCc3中多達(dá)8個(gè)，ABRE在非生物脅迫和ABA（abscisic acid）誘導(dǎo)基因的預(yù)測(cè)耐鹽性的機(jī)制中發(fā)揮了重要作用。當(dāng)植物暴露于非生物的脅迫時(shí)，轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)可以識(shí)別ABRE，從而減輕環(huán)境的影響。在這10個(gè)高粱ClC基因中，不少都存在光響應(yīng)元件（Sp1，G-box）；SbClCf1、Sb-ClCg1、SbClCg2的基因啟動(dòng)子區(qū)存在生長(zhǎng)素響應(yīng)元件（TCA-element）；除SbClCg1、SbClCe、SbClCc3基因外，其他基因的啟動(dòng)子區(qū)均存在干旱誘導(dǎo)相關(guān)MYB結(jié)合位點(diǎn)（MBS），MBS元件與植物的高溫、干熱風(fēng)脅迫有密切關(guān)系。ClC家族中還存在與耐低溫相關(guān)的順式作用元件LTR（long terminal repeat），這與植物的抗寒有關(guān)。ClC基因家族都表現(xiàn)出了抗旱、抗寒和抗鹽性，這與ClC的氯離子通道蛋白的功能相符。

圖4 高粱SbClCs基因啟動(dòng)子順式作用調(diào)控元件核心序列及功能Fig. 4 Core sequences and functions of the cis-acting regulatory elements of the SbClCs gene promoters in sorghum

2.7 玉米、高粱、水稻、擬南芥、大豆ClC基因的系統(tǒng)發(fā)育分析

對(duì)SbClCs基因家族聚類圖（圖5）的分析表明，SbClCs基因進(jìn)化樹的變異值為0.10，在高粱各基因之間存在較好的同源性，所有的SbClCs基因之間的親緣關(guān)系很近，可信度在98%以上。對(duì)高粱、擬南芥、大豆、玉米和水稻ClC基因家族進(jìn)行聚類分析（圖6）,不同顏色范圍代表不同亞族，結(jié)果表明：SbClC基因家族可分為7類，即7個(gè)亞族，SbClCc3與OSNPB_020558100、SbClCc2與OSClC-1、SbClCc1與OSNPB_010876100、SbClCg2與Zm00001d002091、SbClCg1和OSNPB_080300300、SbClCa和Zm00001d046919、SbClCf1和Zm00001d017868、SbClCf2和OSNPB_080499200、SbClCe和Zm00001d043721、Sb-ClCd和Zm00001d033597互為直系同源基因，說(shuō)明高粱與玉米、水稻的ClC基因在進(jìn)化過(guò)程中同源關(guān)系更近；在進(jìn)化樹中，單子葉植物（玉米、高粱、水稻）與雙子葉植物（擬南芥、大豆）出現(xiàn)明顯的分化，說(shuō)明ClC基因在進(jìn)化過(guò)程中出現(xiàn)單雙子葉的分化。

圖 5 SbClCs基因家族聚類圖Fig. 5 Clustering of SbClCs gene family

圖6 高粱、玉米、擬南芥、大豆、水稻ClC基因家族的系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig. 6 Phylogenetic tree of ClC gene family in Sorghum bicolor (L.), Zea mays L., Arabidopsis, Glycine max, Oryza sativa L.

2.8 SbClCs基因表達(dá)

使用TBtools將高粱表達(dá)數(shù)據(jù)構(gòu)建成表達(dá)量熱圖，將其進(jìn)行縱向標(biāo)準(zhǔn)化（圖7），可知SbClCs基因的表達(dá)具有時(shí)空專一性?？梢郧逦乜吹絊bClCd、SbClCf1、SbClCc1、SbClCe、SbClCg1這5個(gè)基因在高粱的整個(gè)生育時(shí)期的表達(dá)都很低；而SbClCc3則在高粱的整個(gè)生育時(shí)期的表達(dá)都很高；SbClCa、Sb-ClCf2、SbClCc2、SbClCc3在高粱的個(gè)別生育時(shí)期或某些部位的表達(dá)水平較高，其中SbClCa從幼葉開(kāi)始一直到葉片上部花序都有著較高的表達(dá)量，Sb-ClCf2則是在籽粒成熟和莖下節(jié)間這兩個(gè)生育時(shí)期有較高的表達(dá)，SbClCc3在整個(gè)高粱的生育時(shí)期都有著不錯(cuò)的表達(dá)量，尤其是在高粱根部的全部生育時(shí)期表達(dá)都較高。在根部鹽脅迫下SbClCc3基因表達(dá)表現(xiàn)出明顯的上調(diào)，SbClCf2、SbClCa、SbClCf1則表現(xiàn)出輕微上調(diào)，其余基因表達(dá)沒(méi)變化或下調(diào)。

圖7 SbClCs基因家族表達(dá)熱圖Fig. 7 Heat map for expression of SbClCs gene family

由于SbClCs為高粱氯離子通道蛋白，根部是主要吸收土壤中氯離子的部位，葉片則是主要進(jìn)行光合作用的器官，推測(cè)SbClCc3、SbClCa基因?qū)τ诟吡坏哪望}脅迫和抗逆性起著重要的作用。

2.9 高粱ClC基因家族進(jìn)化選擇分析

在遺傳學(xué)中用非同義突變率（non-synonymous mutation rate，ka）與同義突變率（synonymous mutation rate，ks）的比值作為這個(gè)蛋白質(zhì)編碼基因是否有選擇壓力作用的標(biāo)準(zhǔn)。如果ka/ks遠(yuǎn)大于1，則存在正選擇效應(yīng)；如果ka/ks=1，則認(rèn)為存在中性選擇；如果ka/ks遠(yuǎn)小于1，則存在純化選擇作用。通過(guò)對(duì)高粱ClC同源蛋白基因?qū)Φ倪M(jìn)化選擇壓力分析，得出ClC蛋白編碼區(qū)基因的ka/ks遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于1，說(shuō)明ClC蛋白質(zhì)編碼基因受純化選擇作用。

3 討論

高粱是一種用途廣泛的經(jīng)濟(jì)作物，在全國(guó)都有廣泛種植，種植地主要集中在東北地區(qū)。高粱的抗逆性很強(qiáng)，可以在鹽堿地、旱地、貧瘠的土地上種植。鹽脅迫主要是由高濃度的NaCl導(dǎo)致高粱葉片氣孔閉合，從而引起光合速率降低。王寶山等［19］發(fā)現(xiàn)，NaCl脅迫下高粱生長(zhǎng)抑制最嚴(yán)重的器官是生長(zhǎng)葉的葉鞘，其次是生長(zhǎng)葉葉片，成熟葉葉片最輕。NaCl產(chǎn)生離子毒害的主要離子就是Na+和Cl-，在許多作物如大豆、煙草、馬鈴薯等作物中，其根部本身對(duì)Na+具有較強(qiáng)的抑制作用，因此在作物中往往是Cl-先一步積累到對(duì)植物產(chǎn)生毒害的程度［11］。ClC是植物體內(nèi)的氯離子通道蛋白，對(duì)植物的耐鹽性起到很大的作用。但它在植物的體內(nèi)也不只會(huì)起到轉(zhuǎn)運(yùn)Cl-的作用，還在調(diào)節(jié)植物氣孔運(yùn)動(dòng)、維持電位平衡、質(zhì)子梯度、物質(zhì)運(yùn)輸?shù)确矫嫫鸬街匾淖饔茫?0］。擬南芥作為首個(gè)全基因組測(cè)序的模式植物，預(yù)測(cè)有7個(gè)ClC基因。大豆中有12個(gè)ClC基因，玉米中有8個(gè)ClC基因，水稻中有10個(gè)ClC基因。本研究結(jié)果顯示，高粱全基因組內(nèi)鑒定出的SbClC基因共10個(gè)，不均勻地分布在6條染色體上，但也無(wú)明顯近距離復(fù)制。這說(shuō)明SbClC基因家族在高粱上得到擴(kuò)張，很可能與其高抗鹽脅迫和氮高效基因型有關(guān)。

SbClCs蛋白質(zhì)均為疏水性蛋白，具有良好的流動(dòng)性，大部分蛋白質(zhì)等電點(diǎn)大于6；共有9個(gè)ClC蛋白含信號(hào)肽，為分泌性蛋白；8個(gè)蛋白定位在質(zhì)膜上，區(qū)間為60.0%～80.0%，另外2個(gè)蛋白定位在葉綠體類囊體膜上；都含有跨膜結(jié)構(gòu)域、Voltage_gated和CBS等結(jié)構(gòu)域。對(duì)啟動(dòng)子順式作用元件的分析結(jié)果顯示，SbClCs基因很可能參與抗旱、耐鹽過(guò)程。

表5 高粱ClC基因進(jìn)化選擇參數(shù)Tab. 5 Evolutionary selection parameters of sorghum ClC Gene

系統(tǒng)進(jìn)化樹分析結(jié)果表明，SbClCs蛋白家族分為5個(gè)亞家族，高粱與玉米、水稻的ClC蛋白質(zhì)在進(jìn)化上同源關(guān)系更近。從表達(dá)熱圖上可以分析得出，SbClCs基因表達(dá)具有較強(qiáng)的時(shí)空特異性，尤其SbClCa在葉片上從幼葉到葉片上部花序都有著較高的表達(dá)量。由于SbClCs為高粱氯離子通道蛋白，根部是主要吸收土壤中氯離子的部位，葉片則是進(jìn)行光合作用的器官，故可推測(cè)SbClCc3、SbClCa基因?qū)τ诟吡坏哪望}脅迫和抗逆性起著重要的作用。ClC蛋白家族成員相對(duì)比較保守，還受純化選擇作用，這與其他作物上的研究結(jié)果一致。Wege等［6］和Tsay等［21］的研究均表明AtCLCa可轉(zhuǎn)運(yùn)硝態(tài)氮。

本研究從全基因組水平上對(duì)SbClCs基因家族進(jìn)行了鑒定，并對(duì)其基因結(jié)構(gòu)、系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系、表達(dá)分析等方面進(jìn)行分析，對(duì)其基因和蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行了預(yù)測(cè)，為深入研究其功能、建立高粱分子標(biāo)記和輔助育種奠定了基礎(chǔ)。