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連翹苷調(diào)控LINC00342影響胃癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲及炎癥因子表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究

2022-03-12 08:55李紹智練維生
世界華人消化雜志 2022年4期
關(guān)鍵詞:培養(yǎng)液連翹克隆

李紹智,練維生

李紹智,浙江省玉環(huán)市第二人民醫(yī)院腫瘤科 浙江省玉環(huán)市 317605

練維生,浙江省腫瘤醫(yī)院介入治療科 浙江省杭州市 310005

0 引言

胃癌是常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,其進(jìn)展速度快,嚴(yán)重威脅患者生命健康.胃癌發(fā)病隱匿,早期診斷率較低,多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期.放化療是中晚期患者治療的常用手段,但胃癌對(duì)化療藥物耐藥性的產(chǎn)生常導(dǎo)致化療療效不佳.因此,需要尋找用于治療胃癌的新藥物.天然中草藥或其活性成分具有毒副作用小、作用靶點(diǎn)多、價(jià)格便宜等優(yōu)點(diǎn),是抗腫瘤藥物研究的熱點(diǎn)內(nèi)容.連翹苷是中藥連翹的主要活性成分之一,具有抗炎、抗氧化、抗衰老等功效.近年來(lái)研究顯示,連翹苷還具有一定的抗腫瘤作用.連翹苷可通過(guò)調(diào)控circ_0054537/miR-409-3p表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為;連翹苷可通過(guò)下調(diào)VEGF和上調(diào)endostatin的表達(dá)抑制肺癌腫瘤發(fā)展;連翹苷可通過(guò)抑制PI3K/Akt信號(hào)通路降低腎癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移和侵襲能力.但是,連翹苷對(duì)胃癌發(fā)生發(fā)展的影響和機(jī)制還未知.長(zhǎng)基因間非編碼RNA 00342(LINC00342)是一種長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA),其在非小細(xì)胞肺癌和結(jié)直腸癌等腫瘤中表達(dá)增加,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的惡性行為.然而,LINC00342對(duì)胃癌發(fā)生發(fā)展的影響還未知.本研究主要探究了連翹苷和LINC00342對(duì)胃癌HGC-27細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和炎癥因子表達(dá)的影響及連翹苷能否調(diào)控LINC00342發(fā)揮作用,報(bào)道如下.

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 臨床資料:51例胃癌組織及癌旁組織取自2018-10/2020-10于浙江省腫瘤醫(yī)院行手術(shù)治療的胃癌患者,液氮保存.男24例,女性18例,患者平均年齡(45.26±7.39)歲.納入標(biāo)準(zhǔn):首次確診.排除標(biāo)準(zhǔn):合并其他惡性腫瘤患者;心臟、腎等重要臟器功能障礙患者.研究符合《赫爾辛基宣言》原則.

1.1.2 細(xì)胞和試劑:HGC-27細(xì)胞系,中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù);連翹苷,純度≥98%,上??泼鸦瘜W(xué)科技有限公司;RPMI 1640培養(yǎng)液、BCA蛋白檢測(cè)試劑盒和CCK-8試劑盒,北京索萊寶;胎牛血清(fetal bovine serum,FBS),浙江天杭生物科技有限公司;Lipofectamine2000試劑盒,美國(guó)Invitrogen公司;RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和PCR試劑盒,大連寶生物;LINC00342小干擾RNA(si-LINC00342)和過(guò)表達(dá)載體(pcDNALINC00342)、小干擾RNA陰性對(duì)照(si-NC)、空載體(pcDNA)及PCR引物,上海生工;E-cadherin和N-cadherin抗體,中國(guó)Abcam公司.

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng):HGC-27細(xì)胞,用含10% FBS的RPMI 1640培養(yǎng)液置于CO培養(yǎng)箱中培養(yǎng)HGC-27細(xì)胞.當(dāng)細(xì)胞融合至90%時(shí),用0.25%胰蛋白酶消化,傳代培養(yǎng).

1.2.2 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率:將200 μL對(duì)數(shù)期HGC-27細(xì)胞(5.0×10個(gè)/mL)接種至96孔板中,培養(yǎng)4 h后,棄培養(yǎng)液,分別用含0、5、10、20 μmol/L連翹苷的培養(yǎng)液培養(yǎng),分別記為對(duì)照組、連翹苷低劑量組、連翹苷中劑量組、連翹苷高劑量組.培養(yǎng)24 h后,加10 μL CCK-8,孵育2 h,用酶標(biāo)儀(波長(zhǎng)450 nm)測(cè)光密度(optical density,OD)值.增殖抑制率(%)=(OD-OD)/OD×100 %.實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次.

1.2.3 克隆形成實(shí)驗(yàn):取2.5 mL對(duì)數(shù)期HGC-27細(xì)胞(5.0×10個(gè)/mL)接種至6孔板中,按上述1.2.2分組處理.每2 d更換一次,培養(yǎng)14 d.棄培養(yǎng)液,經(jīng)多聚甲醛固定、結(jié)晶紫染色后,顯微鏡觀察,統(tǒng)計(jì)克隆形成數(shù).實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次.

1.2.4 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲:取2.5 mL對(duì)數(shù)期HGC-27細(xì)胞(5.0×10個(gè)/mL)接種至6孔板中,按上述1.2.2分組處理.培養(yǎng)24 h后,收集細(xì)胞,并調(diào)整各組細(xì)胞濃度為2.5×10個(gè)/mL.侵襲實(shí)驗(yàn):將Transwell小室置于24孔板中,鋪Matrigel基質(zhì)膠,自然晾干.取100 μL各組細(xì)胞懸液加至上室,500 μL完全培養(yǎng)液加至下室.培養(yǎng)24 h后,棄培養(yǎng)液,用多聚甲醛固定、結(jié)晶紫染色會(huì)后,顯微鏡觀察,記數(shù).遷移實(shí)驗(yàn):除不鋪Matrigel基質(zhì)膠外,操作過(guò)程與侵襲實(shí)驗(yàn)相同.

1.2.5 蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)法檢測(cè)E-cadherin和N-cadherin蛋白表達(dá):取2.5 mL對(duì)數(shù)期HGC-27細(xì)胞(5.0×10個(gè)/mL)接種至6孔板中,按上述1.2.2分組處理.培養(yǎng)24 h后,用RIPA試劑提取細(xì)胞中總蛋白,BCA法檢測(cè)蛋白濃度.行10% SDS-PAGE電泳,將分離蛋白轉(zhuǎn)至PVDF膜,用5%脫脂奶粉封閉1 h.于4 ℃冰箱中分別用E-cadherin(1:500)、N-cadherin(1:500)、GAPDH(1:1000)一抗孵育過(guò)夜,洗膜后,再于山羊抗兔二抗(1:2000)中37 ℃孵育1 h.加顯影液,避光顯影,曝光拍照.

1.2.6 試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-6表達(dá):取2.5 mL對(duì)數(shù)期HGC-27細(xì)胞(5.0×10個(gè)/mL)接種至6孔板中,按上述1.2.2分組處理.培養(yǎng)24 h后,收集各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液.3500 r/min離心10 min后,分別利用TNF-α和IL-6試劑盒檢測(cè)上清液中其表達(dá)水平.

1.2.7 qRT-PCR檢測(cè)LINC00342表達(dá):(1)細(xì)胞接種和處理同1.2.5,培養(yǎng)24 h后,收集細(xì)胞,檢測(cè)細(xì)胞中LINC00342表達(dá);(2)在液氮保護(hù)下,研磨組織樣本,檢測(cè)組織樣本中LINC00342蛋白表達(dá).用RNA提取試劑盒提取細(xì)胞或組織中總RNA,逆轉(zhuǎn)錄后,行PCR擴(kuò)增.引物序列:LINC00342上游5’-CGTTCCAATGTGTTGGGT-3’,下游5’-TGGGAGGAGGTTGAGATG-3’;GAPDH上游5’-ACGGATTTGGTCGTATTGGGCG-3’,下游5’-CTCCTGGAAGATGGTGATGG-3’.2法計(jì)算LINC00342相對(duì)GAPDH的表達(dá)量.

1.2.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和處理:取2.5 mL對(duì)數(shù)期HGC-27細(xì)胞(5.0×10個(gè)/m L)接種至6孔板中,培養(yǎng)24 h后,用Lipofectamine2000脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染si-LINC00342、si-NC、pcDNA-LINC00342、pcDNA至HGC-27細(xì)胞,轉(zhuǎn)染12 h后,更換為完全培養(yǎng)液.再培養(yǎng)24 h,qRT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中LINC00342表達(dá)驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果,方法同1.2.8.將轉(zhuǎn)染后的HGC-27細(xì)胞均接種至培養(yǎng)板中,培養(yǎng)4 h后,棄培養(yǎng)液,分組處理.其中轉(zhuǎn)染si-LINC00342、si-NC的HGC-27細(xì)胞均用不含連翹苷的培養(yǎng)液培養(yǎng),分別記為si-LINC00342組、si-NC組.轉(zhuǎn)染pcDNA-LINC00342、pcDNA的HGC-27細(xì)胞均用含20 μmol/L連翹苷的培養(yǎng)液培養(yǎng)分別記為連翹苷+pcDNA-LINC00342組、連翹苷+pcDNA組.培養(yǎng)24 h后,分別參照1.2.2-1.2.6檢測(cè)細(xì)胞細(xì)胞抑制率、克隆形成數(shù)、遷移和侵襲數(shù)、細(xì)胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表達(dá)及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-6表達(dá).

SPSS 22.0軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù).計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示,經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)后,兩組間比較行獨(dú)立樣本檢驗(yàn);多組間比較用單因素方差分析,組間兩兩比較用LSD-檢驗(yàn).以<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié)果

2.1 連翹苷對(duì)胃癌HGC-27細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及炎癥因子表達(dá)的影響 與對(duì)照組比較,胃癌HGC-27細(xì)胞經(jīng)不同劑量連翹苷作用后,細(xì)胞增殖抑制率升高(<0.05),細(xì)胞克隆數(shù)、遷移數(shù)和侵襲數(shù)及細(xì)胞中N-cadherin蛋白表達(dá)均降低(<0.05),E-cadherin蛋白表達(dá)升高(<0.05),細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-6表達(dá)降低(<0.05),且呈劑量依賴性.見(jiàn)圖1、表1及補(bǔ)充材料表1.

圖1 連翹苷對(duì)HGC-27細(xì)胞克隆、遷移和侵襲及E-cadherin和N-cadherin蛋白表達(dá)的影響. A:連翹苷對(duì)HGC-27細(xì)胞克隆的影響;B:連翹苷對(duì)HGC-27細(xì)胞遷移侵襲的影響;C:連翹苷對(duì)HGC-27細(xì)胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表達(dá)的影響.

表1 連翹苷對(duì)胃癌HGC-27細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及炎癥因子表達(dá)的影響(mean±SD,n=3)

2.2 連翹苷對(duì)胃癌HGC-27細(xì)胞中LINC00342表達(dá)的影響 與對(duì)照組比較,胃癌HGC-27細(xì)胞經(jīng)不同劑量連翹苷作用后,細(xì)胞中LINC00342表達(dá)降低(<0.05),且呈劑量依賴性.見(jiàn)表2.

表2 連翹苷對(duì)HGC-27中LINC00342表達(dá)的檢測(cè)(mean±SD,n=3)

2.3 LINC00342在胃癌組織中的表達(dá) 胃癌組織中LINC00342的表達(dá)量為2.39±0.40,顯著高于癌旁組織中LINC00342的表達(dá)量0.95±0.28 (=21.062,<0.05).

2.4 LINC00342轉(zhuǎn)染效果驗(yàn)證 轉(zhuǎn)染si-LINC0034的胃癌HGC-27細(xì)胞中LINC00342表達(dá)量為0.35±0.05,顯著低于轉(zhuǎn)染si-NC的HGC-27細(xì)胞中LINC00342表達(dá)量1.00±0.00 (=22.517,<0.05),說(shuō)明敲減LINC00342的HGC-27細(xì)胞構(gòu)建成功.轉(zhuǎn)染pcDNA-LINC0034的胃癌HGC-27細(xì)胞中LINC00342表達(dá)量為3.00±0.11,顯著高于轉(zhuǎn)染pcDNA的HGC-27細(xì)胞中LINC00342表達(dá)量1.00±0.00 (=31.492,<0.05),說(shuō)明過(guò)表達(dá)LINC00342的HGC-27細(xì)胞構(gòu)建成功.

2.5 敲減LINC00342對(duì)胃癌HGC-27細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及炎癥因子表達(dá)的影響 si-LINC0034組胃癌HGC-27細(xì)胞增殖抑制率、E-cadherin蛋白表達(dá)均高于si-NC組(<0.05),細(xì)胞克隆數(shù)、遷移數(shù)和侵襲數(shù)、細(xì)胞中N-cadherin蛋白表達(dá)及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-6表達(dá)均低于si-NC組(<0.05).見(jiàn)圖2、表3.

圖2 敲減LINC00342對(duì)HGC-27細(xì)胞克隆、遷移、侵襲及E-cadherin和N-cadherin蛋白表達(dá)的影響.A:敲減LINC00342對(duì)HGC-27細(xì)胞克隆的影響;B:敲減LINC00342對(duì)HGC-27細(xì)胞遷移侵襲的影響;C:敲減LINC00342對(duì)HGC-27細(xì)胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表達(dá)的影響.

表3 敲減LINC00342對(duì)HGC-27細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及炎癥因子表達(dá)的影響(mean±SD,n=3)

2.6 過(guò)表達(dá)LINC00342逆轉(zhuǎn)連翹苷對(duì)胃癌HGC-27細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及炎癥因子表達(dá)的影響 連翹苷+pcDNA-LINC00342組胃癌HGC-27細(xì)胞增殖抑制率、E-cadherin蛋白表達(dá)均高于連翹苷組(<0.05),細(xì)胞克隆數(shù)、遷移數(shù)和侵襲數(shù)、細(xì)胞中N-cadherin蛋白表達(dá)及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-6表達(dá)均低于連翹苷組(<0.05).見(jiàn)圖3、表4.

圖3 過(guò)表達(dá)LINC00342逆轉(zhuǎn)連翹苷對(duì)HGC-27細(xì)胞克隆、遷移、侵襲及E-cadherin和N-cadherin蛋白表達(dá)的影響.A:過(guò)表達(dá)LINC00342逆轉(zhuǎn)連翹苷對(duì)HGC-27細(xì)胞克隆的影響;B:過(guò)表達(dá)LINC00342逆轉(zhuǎn)連翹苷對(duì)HGC-27細(xì)胞遷移侵襲的影響;C:過(guò)表達(dá)LINC00342逆轉(zhuǎn)連翹苷對(duì)HGC-27細(xì)胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表達(dá)的影響.

表4 過(guò)表達(dá)LINC00342逆轉(zhuǎn)連翹苷對(duì)HGC-27細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及炎癥因子表達(dá)的影響(mean±SD,n=3)

3 討論

近年來(lái),天然中草藥或其活性成分在腫瘤治療中表現(xiàn)出良好優(yōu)勢(shì),是抗腫瘤藥物研究的熱點(diǎn)對(duì)象.研究已表明,多種草藥或其活性成分具有抗胃癌作用.例如,白江江等研究顯示,冬凌草甲素抑制胃癌細(xì)胞增殖并增強(qiáng)胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物西妥昔單的敏感性,其作用機(jī)制與抑制細(xì)胞中EGFR/STAT3通路有關(guān).楊振方等研究顯示,牛蒡子苷元可通過(guò)下調(diào)SETDB1的表達(dá)抑制胃癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為.洪星輝等研究顯示,重樓總皂苷可通過(guò)調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制胃癌細(xì)胞遷移和侵襲.

連翹是我國(guó)傳統(tǒng)常用中草藥,有清熱解毒、消腫散結(jié)等功效.作為連翹的主要活性成分,連翹苷對(duì)胃癌發(fā)生發(fā)展的影響還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道.胃癌細(xì)胞過(guò)度增殖促進(jìn)胃癌發(fā)生發(fā)展,而胃癌細(xì)胞遷移和侵襲則是胃癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的主要原因.本研究結(jié)果顯示,胃癌HGC-27細(xì)胞經(jīng)不同劑量連翹苷作用后,細(xì)胞增殖抑制率明顯升高,克隆數(shù)、遷移數(shù)、侵襲數(shù)均明顯降低,說(shuō)明連翹苷抑制了胃癌HGC-27細(xì)胞增殖、遷移和侵襲,提示其可能通過(guò)抑制胃癌細(xì)胞的惡性行為來(lái)發(fā)揮抗胃癌作用.上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在腫瘤的發(fā)生發(fā)生中起重要作用,腫瘤細(xì)胞在經(jīng)歷此過(guò)程后,細(xì)胞間粘附作用降低,遷移和侵襲性增強(qiáng).EMT過(guò)程中伴隨多種分子標(biāo)志物的改變,如上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)降低,而間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin表達(dá)升高.本研究結(jié)果顯示,連翹苷促進(jìn)了胃癌HGC-27細(xì)胞中E-cadherin蛋白表達(dá),而抑制了N-cadherin蛋白表達(dá),且呈劑量依賴性,提示其可能通過(guò)抑制EMT過(guò)程降低胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力.

胃癌的發(fā)生發(fā)展與慢性炎癥密切相關(guān).TNF-α和IL-6是促炎細(xì)胞因子,對(duì)胃癌發(fā)展具有促進(jìn)作用.TNF-α可通過(guò)與其受體結(jié)合激活多種信號(hào)通路,調(diào)控細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)及免疫.IL-6是一種多功能細(xì)胞因子,參與調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡和免疫防御等過(guò)程.研究顯示,胃癌患者血清中TNF-α和IL-6的表達(dá)明顯上調(diào),聯(lián)合檢測(cè)血清TNF-α和IL-6有助于胃癌預(yù)后判斷;IL-6可通過(guò)活化STAT3促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖活性及順鉑抗性.本研究結(jié)果顯示,連翹苷降低了胃癌HGC-27細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-6表達(dá),提示連翹苷發(fā)揮抗胃癌作用也可

能與其抑制炎癥環(huán)境有關(guān).

中藥作用途徑及作用靶點(diǎn)較為廣泛,這也是其具有較好抗腫瘤作用的原因之一.lncRNA是一類長(zhǎng)鏈非編碼RNA,在真核生物中廣泛存在.研究顯示,腫瘤中存在大量異常表達(dá)的lncRNA,這些lncRNA參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為,可作為腫瘤治療的分子靶點(diǎn).研究已表明,LINC00511、LINC00265和LINC00649等多種lncRNA在胃癌中表達(dá)增加,促進(jìn)胃癌的發(fā)展進(jìn)程;LINC00982和HAND2-AS1等lncRNA在胃癌中表達(dá)降低,作為抑癌基因影響胃癌發(fā)生發(fā)展.此外,lncRNA還參與調(diào)控腫瘤炎癥微環(huán)境.例如,Liu等研究顯示,lncRNA MSC-AS1在胃癌中表達(dá)上調(diào),其可促進(jìn)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞周期進(jìn)程及分泌炎癥介質(zhì)IL-1β、IL-6和TNF-α,促進(jìn)胃癌的發(fā)展進(jìn)程.本研究結(jié)果顯示,LINC00342在胃癌腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織,提示其可能也促進(jìn)胃癌的發(fā)展進(jìn)程;通過(guò)敲減胃癌細(xì)胞中LINC00342的表達(dá)發(fā)現(xiàn),敲減LINC00342可有效阻礙胃癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲,并抑制胃癌細(xì)胞分泌TNF-α和IL-6,提示LINC00342有可能成為胃癌治療的分子靶點(diǎn).此外,本研究還顯示,連翹苷可呈劑量依賴性抑制胃癌細(xì)胞中LINC00342的表達(dá),而過(guò)表達(dá)LINC00342逆轉(zhuǎn)了連翹苷對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲及炎癥因子TNF-α和IL-6表達(dá)的影響,提示連翹苷發(fā)揮抗胃癌作用也可能通過(guò)與其下調(diào)細(xì)胞中LINC00342的表達(dá)有關(guān).

4 結(jié)論

綜上,一定劑量的連翹苷對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲及炎癥因子表達(dá)具有明顯的抑制作用,其作用機(jī)制可能與下調(diào)細(xì)胞中LINC00342的表達(dá)有關(guān),具有治療胃癌的潛在價(jià)值.LINC00342可發(fā)揮微小RNA(miRNA)分子海綿作用調(diào)控miRNA靶基因的表達(dá),進(jìn)而發(fā)揮生物學(xué)作用,本研究中尚未對(duì)LINC00342結(jié)合的miRNA及下游靶基因進(jìn)行探究,這將是加下來(lái)要進(jìn)行的研究工作;同時(shí),尚需進(jìn)一步通過(guò)裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)在體內(nèi)驗(yàn)證連翹苷的抗胃癌作用.

胃癌發(fā)病機(jī)制尚未闡明,且缺乏有效的治療方法.作為重要連翹的主要活成成分,連翹苷對(duì)肝癌、肺癌和腎癌等腫瘤細(xì)胞的惡性行為具有顯著抑制作用,表現(xiàn)出一定的抗腫瘤作用,但其能否抑制胃癌細(xì)胞的惡性行為還未知.長(zhǎng)基因間非編碼RNA 00342(LINC00342)是促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌和結(jié)直腸癌發(fā)展的lncRNA,可作為非小細(xì)胞肺癌和結(jié)直腸癌治療的分子靶點(diǎn).但連翹苷能否通過(guò)調(diào)控LINC00342來(lái)影響胃癌的發(fā)生發(fā)展也還未知.

本研究旨在探究連翹苷對(duì)胃癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及炎癥因子表達(dá)的影響及其能否通過(guò)調(diào)控LINC00342發(fā)揮作用,以期為其用于胃癌的治療提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù).

本研究的主要目標(biāo)是觀察連翹苷能否影響胃癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲及炎癥因子TNF-α和IL-6的表達(dá),同時(shí)觀察其能否通過(guò)調(diào)控LINC00342發(fā)揮作用,初步了解連翹苷對(duì)胃癌發(fā)生發(fā)展的影響和機(jī)制.

將不同劑量(5、10、20 μmol/L)的連翹苷作用于胃癌HGC-27細(xì)胞,CCK-8法和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖,Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲,蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)E-cadherin和N-cadherin蛋白表達(dá),試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-6表達(dá),qRT-PCR檢測(cè)LINC00342表達(dá).同時(shí)敲減HGC-27細(xì)胞中LINC00342的表達(dá),觀察敲減LINC00342對(duì)HGC-27細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及炎癥因子TNF-α和IL-6表達(dá)的影響.此外,通過(guò)恢復(fù)實(shí)驗(yàn)觀察過(guò)表達(dá)LINC00342能否逆轉(zhuǎn)連翹苷對(duì)HGC-27細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及炎癥因子TNF-α和IL-6表達(dá)的影響.

本研究達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo),結(jié)果表明連翹苷對(duì)胃癌HGC-27細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及炎癥因子TNF-α和IL-6的表達(dá)具有抑制作用;敲減LINC00342對(duì)胃癌HGC-27細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及炎癥因子TNF-α和IL-6的表達(dá)也具有抑制作用.同時(shí),連翹苷抑制了HGC-27細(xì)胞中LINC00342的表達(dá),過(guò)表達(dá)LINC00342逆轉(zhuǎn)了連翹苷對(duì)HGC-27細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及炎癥因子TNF-α和IL-6表達(dá)的影響.

本研究發(fā)現(xiàn)連翹苷可抑制胃癌HGC-27細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及炎癥因子TNF-α和IL-6的表達(dá),其作用機(jī)制可能與下調(diào)細(xì)胞中LINC00342的表達(dá)有關(guān).

本研究初步發(fā)現(xiàn)連翹苷具有抗胃癌的潛在價(jià)值,但尚需進(jìn)一步在體內(nèi)驗(yàn)證.同時(shí),LINC00342下游調(diào)控的基因或通路也有待探究.接下來(lái),將通過(guò)建立裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn),在體內(nèi)觀察連翹苷對(duì)胃癌發(fā)生發(fā)展的影響,并對(duì)LINC00342下游調(diào)控的基因或通路進(jìn)行預(yù)測(cè)和驗(yàn)證,更加全面了解連翹苷的抗胃癌作用和機(jī)制,為胃癌治療藥物的研發(fā)提供新途徑.

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