梁華 蔣露 朱大海 周建偉 范鄧妹 張志勇

摘 要：? 植物核DNA含量（2C-值）與倍性水平是重要的植物學(xué)基本特征，是進(jìn)行種群進(jìn)化、物種分類和生態(tài)學(xué)等研究的有力證據(jù)。為確定中國(guó)吊鐘花屬（Enkianthus Lour.）各物種的核DNA含量與倍性水平并探究該屬植物在種間、種內(nèi)核DNA含量差異，該研究以6種中國(guó)吊鐘花屬植物共23個(gè)居群60個(gè)樣品為試驗(yàn)材料，以水稻品種‘日本晴’（Oryza sativa spp. japonica ‘Nipponbare’）為內(nèi)部參照，利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)該屬植物核DNA含量。進(jìn)而以二倍體植物齒緣吊鐘花（Enkianthus serrulatus）為倍性參照推測(cè)其他種的染色體倍性，并采用染色體壓片計(jì)數(shù)法驗(yàn)證倍性的準(zhǔn)確性。結(jié)果表明：（1）該屬植物核DNA含量介于1.77～5.62 pg之間。（2）吊鐘花組4個(gè)種——吊鐘花（E. quinqueflorus）、齒緣吊鐘花、晚花吊鐘花（E. serotinus）、臺(tái)灣吊鐘花（E. perulatus）均為二倍體（2n=2x=22）;總狀花序組2個(gè)種——燈籠樹（E. chinensis）和毛葉吊鐘花（E. deflexus）均存在四倍體和六倍體。（3）該屬二倍體植物核DNA含量在種間、種內(nèi)存在顯著性差異（P<0.05），四倍體和六倍體植物在種間和種內(nèi)均無顯著性差異（P>0.05）。該研究為吊鐘花屬系統(tǒng)發(fā)育、生物地理、引種馴化、遺傳育種等研究奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞： 吊鐘花屬， 多倍體， 基因組大小， 流式細(xì)胞術(shù)， 染色體壓片

中圖分類號(hào)：? Q943

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：? A

文章編號(hào)：? 1000-3142（2022）01-0058-10

收稿日期：? 2021-02-24

基金項(xiàng)目：? 國(guó)家自然科學(xué)基金（31660059， 31960049） [Supported by the National Natural Science Foundation of China（31660059， 31960049）]。

第一作者： 梁華（1996-），碩士研究生，主要從事植物系統(tǒng)與進(jìn)化研究，（E-mail）hualiang1556@126.com。

*通信作者：? 周建偉，講師，主要從事林木花卉遺傳育種研究，（E-mail）zhoujianwei@jxau.edu.cn。

Nuclear DNA content （2C-value） and ploidy level of

Enkianthus species （Ericaceae） from China

LIANG Hua 1，4， JIANG Lu1，4， ZHU Dahai2， ZHOU Jianwei3*，

FAN Dengmei4， ZHANG Zhiyong4

（ 1. College of Forestry， Jiangxi Agricultural University， Nanchang 330045， China; 2. Longxi-Hongkou National Natural Reserve，

Chengdu 611830， China; 3. Science and Technology Park， Jiangxi Agricultural University， Nanchang 330045， China; 4. Laboratory

of Subtropical Biodiversity， Jiangxi Agricultural University， Nanchang 330045， China ）

Abstract：? Plant nuclear DNA content （2C-value） and ploidy level are important botanical characteristics which are powerful evidences for studies on population evolution， biosystematics and ecology. In order to determine the nuclear DNA content and ploidy level of Enkianthus Lour. from China， and to explore the difference of nuclear DNA contents between interspecies and intraspecies， we collected 60 samples from 23 populations， representing all six species of Enkianthus in subtropical areas of China， as experimental materials. We used Oryza sativa spp. japonica variety ‘Nipponbare’ as an internal standard to determine their nuclear DNA contents by flow cytometry， and then the ploidy level was examined by referencing the 2C-value of a diploid species of E. serrulatus. In addition， the ploidy level was further verified by using traditional chromosome tableting technology. The results were as follows： （1） The mean nuclear DNA contents of Enkianthus species in China ranged from 1.77 to 5.62 pg. （2） Four species in Enkianthus sect. Enkianthus， E. quinqueflorus， E. serrulatus， E. serotinus and E. perulatus were diploid （2n=2x=22）， and two species in Enkianthus sect. Racemus， E. chinensis and E. deflexus were tetraploid or hexaploid. （3） For diploid species， the nuclear DNA contents showed significant differences between interspecies and intraspecies （P<0.05）， but there were no significant differences in tetraploid and hexaploid species （P>0.05）. The results of this study provides reference for the future researches on phylogenetics， biogeography， domestication and genetic breeding of Enkianthus.

Key words： Enkianthus， polyploid， genome size， flow cytometry， chromosome tableting

DNA攜帶著生物體的遺傳信息，是生物體生存與繁衍的核心。DNA含量與生物體的細(xì)胞大小、代謝速率、葉片氣孔密度等都呈一定的相關(guān)性（Beaulieu et al.， 2007， 2008）。每個(gè)生物體的DNA含量通常恒定不變，為了更加形象地描述生物體的DNA含量，Swift（1950）提出“C-值”（C-value）一詞，特指生物配子體（染色體數(shù)目為n）細(xì)胞核中的DNA含量。C-值變化可顯示出植物基因組大小多樣性，目前，植物DNA C-值數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//cvalues.science.kew.org/）收集了被子植物、裸子植物、蕨類、苔蘚和藻類共計(jì)12 273種植物的C-值數(shù)據(jù)。由于細(xì)胞有絲分裂間期擁有兩套未復(fù)制基因組，故細(xì)胞核中具有2C DNA含量（2C-值）（Dolezel & Barto， 2005）。2C-值是描述生物多樣性的一個(gè)主要特征參量，在分子生物學(xué)、生物系統(tǒng)學(xué)、生態(tài)學(xué)和種群生物學(xué)等領(lǐng)域都具有重要意義（Bennett et al.， 2000; 倪麗萍和郭水良，2005; Kron et al.， 2007）。

核DNA含量的測(cè)定方法主要有化學(xué)分析法（chemical analysis）（Schmidt & Thannhauser， 1945）、復(fù)性動(dòng)力學(xué)法（reassociation kinetics）（Britten & Kohne， 1968）、孚爾根顯微分光光度測(cè)定法（Feulgen microspectrophotometry）（Feulgen & Rossenbeck， 1924; Deeley， 1955）、DNA圖像光密度法（DNA image densitometry）（Vilhar et al.， 2001）和流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry）（Galbraith et al.， 1983）。其中，流式細(xì)胞術(shù)因其操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)高效、結(jié)果精準(zhǔn)等優(yōu)勢(shì)，已成為核DNA含量測(cè)定的主流方法（Bennett & Leitch， 2011）。此外，對(duì)于估算染色體小、數(shù)目多以及難以獲取染色體壓片植物材料的倍性，流式細(xì)胞術(shù)有著廣大應(yīng)用前景（Bailey et al.， 2008）。

吊鐘花屬（Enkianthus Lour.）是杜鵑花科（Ericaceae）中的一個(gè)東亞特有小屬，約12種。我國(guó)吊鐘花屬植物種類較為豐富，共7種（Fang & Steven， 2005），分別是單花吊鐘花（E. pauciflorus）、吊鐘花（E. quinqueflorus）、齒緣吊鐘花（E. serrulatus）、晚花吊鐘花（E. serotinus ）、臺(tái)灣吊鐘花（E. perulatus ）、燈籠樹（E. chinensis）和毛葉吊鐘花（E. deflexus）。吊鐘花屬植物小巧玲瓏的鐘形花朵惹人憐愛，尤其是吊鐘花更是花中珍品，在廣州花市上享有盛譽(yù)（徐廷志， 1982）。吊鐘花屬植物擁有較大的倍性變化，1960年，Sax（1960）報(bào)道了日本吊鐘花屬植物存在二倍體（2n=22）和八倍體（2n=88）。但因其染色體較小，細(xì)胞學(xué)觀察較難，關(guān)于該屬的倍性研究一直沒有較大進(jìn)展。另外，吊鐘花屬植物還具有抗炎等藥用價(jià)值（Wang et al.， 2020）。吊鐘花屬植物具有較高的研究?jī)r(jià)值，目前該屬的相關(guān)研究多局限于分類與系統(tǒng)發(fā)育（徐廷志，1982;Anderberg， 1994; Tsutsumi & Hirayama， 2012）、栽培繁育（楊建芬等，2009; 潘文等，2010;李超等，2020）、化學(xué)成分（Ogawa et al.， 1970; Sakakibara et al.，1983; Wang et al.， 2014）等方面，而吊鐘花屬核DNA含量與倍性水平的基礎(chǔ)性研究卻嚴(yán)重缺失，這已經(jīng)阻礙了該類群系統(tǒng)發(fā)育、植物資源利用和遺傳育種等相關(guān)領(lǐng)域的研究。

針對(duì)中國(guó)吊鐘花屬植物總共有幾種倍性，同一物種是否存在多種倍性，相同倍性的物種核DNA含量是否存在差異，同一物種在不同分布區(qū)的核DNA含量是否存在差異等問題。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)國(guó)內(nèi)吊鐘花屬6個(gè)物種的核DNA含量與倍性水平，用傳統(tǒng)的壓片觀察計(jì)數(shù)染色體數(shù)量以驗(yàn)證倍性，并計(jì)算該屬植物基因組大小，探討植物核DNA含量在種間、種內(nèi)的差異和地理環(huán)境的關(guān)系，以及不同倍性植物之間可能存在的親緣關(guān)系。本研究可填補(bǔ)中國(guó)吊鐘花屬植物核DNA含量與倍性研究的空白，并為吊鐘花屬植物資源利用、多倍化、系統(tǒng)發(fā)育、引種馴化、遺傳育種和基因組學(xué)等方面的研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

野外采集來自中國(guó)10個(gè)?。ㄗ灾螀^(qū)）27個(gè)縣的吊鐘花屬植物的活體植株和/或種子材料，其中收集了6個(gè)種23個(gè)居群的活體植株60株，6個(gè)種8個(gè)居群的種子（表1），憑證標(biāo)本保存于江西農(nóng)業(yè)大學(xué)亞熱帶生物多樣性實(shí)驗(yàn)室（LSTB-JXAU）。將6種吊鐘花屬植物種子，在恒溫20 ℃人工氣候箱內(nèi)催芽，取其幼嫩根尖用于染色體壓片試驗(yàn)?；铙w植株則移栽于江西農(nóng)業(yè)大學(xué)生態(tài)園中，其幼嫩葉片用于流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。根據(jù)前人研究（Dolezel et al.， 2007），本文選用水稻品種‘日本晴’（Oryza sativa spp.japonica ‘Nipponbare’）（Sasaki & Burr， 2000）作為2C-值的標(biāo)準(zhǔn)參照。水稻催芽后栽培于人工氣候培養(yǎng)箱中，待其長(zhǎng)葉后使用。使用二倍體齒緣吊鐘花（E. serrulatus）作為倍性參照。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 染色體壓片計(jì)數(shù) 待種子露出0.5～1 cm胚根時(shí)，取健壯個(gè)體5～8個(gè)，放入4 ℃預(yù)冷的2.0 mL離心管中，加入0.6 mL 4 ℃預(yù)冷的超純水，放入冰水混合物中預(yù)處理6 h。預(yù)處理材料用超純水沖洗數(shù)次，轉(zhuǎn)移至現(xiàn)配卡諾I固定液（冰乙酸∶無水乙醇=1∶3），放入4 ℃冰箱中固定4 h。固定材料水洗數(shù)次，放入提前預(yù)熱至60 ℃的1 mol·L-1鹽酸溶液中，解離8 min左右。解離材料水洗數(shù)次，取根尖于潔凈的載玻片上，取其分生區(qū)（距根冠2～5 mm之間，顏色為乳白色部分），加1滴改良苯酚品紅染色液，染色10 min后制片。使用奧特光學(xué)BK 6000顯微鏡檢，選擇染色體形態(tài)清晰、分散性好的細(xì)胞，使用OPTPro 3000顯微圖像分析處理軟件添加標(biāo)尺并進(jìn)行拍攝。選擇30個(gè)以上分裂像較好的中期細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)染色體數(shù)目。

1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)法 參考Dolezel等（2007）的方法，取1 cm×1 cm 左右待測(cè)葉片組織放入60 mm培養(yǎng)皿中，滴加1 mL WPB解離液（200 mmol·L-1 Tris; 4 mmol·L-1 MgCl2·6H2O; 2 mmol·L-1 Na2EDTA·2H2O; 86 mmol·L-1 NaCl; 10 mmol·L-1焦亞硫酸鈉; 1% PVP-10; 1% （v/v） Tritonx-100，PH 7.5），使用鋒利的刀片垂直運(yùn)刀，迅速切碎樣品，不可沿培養(yǎng)皿底部刮擦刀片，以防細(xì)胞核破裂，整個(gè)過程，材料須浸沒在解離液里，以便更好地游離細(xì)胞核（葉林江等， 2015）。后向培養(yǎng)皿中加入1 mL DAPI染料（Sysmex公司），冰上避光孵育10 min，期間輕輕搖勻2～3次，再用400目尼龍網(wǎng)過濾，得到染色后的細(xì)胞核懸液。使用德國(guó)Sysmex公司的CyFlow Cube 6流式細(xì)胞儀，采用UVLED光激發(fā)，每個(gè)樣品以水稻為標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)參，每次檢測(cè)至少收集10 000個(gè)細(xì)胞，每個(gè)樣品進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn)，同一居群取所有個(gè)體的平均值。

1.3 數(shù)據(jù)分析

使用軟件FlowJo 7.6進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)采集和分析，樣品平均峰值的變異系數(shù)（coefficient of variation，CV=標(biāo)準(zhǔn)差/平均值× 100%）大于5%的結(jié)果予以舍棄。樣品細(xì)胞核DNA含量 （2C-值） 計(jì)算公式為樣品2C-值（DNA pg或Mbp）=（樣品平均峰值/標(biāo)樣平均峰值）×標(biāo)樣的2C-值（Dolezl et al.， 2007），并根據(jù)1 pg DNA=978 Mb（Dolezl et al.， 2003），計(jì)算該屬植物基因組大小。用二倍體齒緣吊鐘花做參照，推測(cè)該屬其他物種的倍性水平，計(jì)算公式為樣品倍性（整數(shù)）=（樣品G1平均峰值/標(biāo)樣G1平均峰值）×標(biāo)樣倍性（Dolezl et al.， 2007）。使用SPSS 22.0對(duì)核DNA含量（2C-值）數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性統(tǒng)計(jì)分析，并使用OriginPro 9.0軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 核DNA含量（2C-值）與基因組大小

樣品平均峰值的變異系數(shù)（CV）均保持在5%以內(nèi)（圖1），通過進(jìn)一步計(jì)算，得到6種吊鐘花屬植物的2C-值及基因組大小。六倍體毛葉吊鐘花核DNA含量（2C-值）最大，平均值為5.62 pg;最小的是吊鐘花，平均值為1.77 pg。六倍體毛葉吊鐘花基因組大小最大，平均值為2 747.02 Mbp;最小的是吊鐘花，平均值為866.19 Mbp（表2）。

2.2 倍性水平的確定

染色體壓片結(jié)果顯示，吊鐘花組的齒緣吊鐘花、晚花吊鐘花、臺(tái)灣吊鐘花、吊鐘花的染色體數(shù)目為22條，均為二倍體，總狀花序組的毛葉吊鐘花和燈籠樹的染色體數(shù)目為44和66條，均存在四倍體與六倍體（圖2），流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的倍性結(jié)果與之一致（表2）。

2.3 吊鐘花屬種間與種內(nèi)核DNA含量（2C-值）差異

將吊鐘花屬植物核DNA含量數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，二倍體4個(gè)種的核DNA含量之間有顯著差異（P<0.05），其中，吊鐘花核DNA含量顯著低于其他二倍體物種，而臺(tái)灣吊鐘花核DNA含量顯著高于其他二倍體物種。然而，相同倍性的燈籠樹和毛葉吊鐘花核DNA含量無顯著差異（P>0.05）（表2）。選取樣本量較多的齒緣吊鐘花、燈籠樹和毛葉吊鐘花，對(duì)其種內(nèi)不同居群間的核DNA含量進(jìn)行了單因素方差分析，發(fā)現(xiàn)二倍體齒緣吊鐘花不同居群之間存在顯著性差異（圖3）（P<0.05），而多倍體物種燈籠樹和毛葉吊鐘花在相同倍性的情況下，不同居群之間的核DNA含量無顯著性差異（圖3）（P>0.05）。

3 討論與結(jié)論

自然界中不同類群之間植物核DNA含量差異較大（Chen et al.， 2010），杜鵑花科各類群之間核DNA含量亦是如此。根據(jù)植物DNA C-值數(shù)據(jù)庫(kù)的記錄，目前，杜鵑花科已報(bào)道12屬25種植物核DNA含量（2C-值），核DNA含量最小的是密花歐石南（Erica multiflora），為0.96 pg（Pellicer et al.， 2010），最大的是水晶蘭（Monotropa uniflora），為59.80 pg（Bai et al.， 2012）。吊鐘花屬植物核DNA含量為1.77～5.62 pg，屬于杜鵑花科植物內(nèi)核DNA含量偏小的類群。在同屬相同倍性的植物間也存在顯著差異，如越桔屬（Vaccinium）（Costich et al.， 1993）、棗屬（Ziziphus）（吳麗萍等，2013）、草莓屬（Fragaria）（陳丙義等，2015）等。本研究中四個(gè)二倍體植物間存在顯著性差異，且吊鐘花和齒緣吊鐘花核DNA含量顯著低于晚花吊鐘花和臺(tái)灣吊鐘花（P<0.05）。核DNA含量差異大，說明物種間生態(tài)位分離大，生態(tài)適應(yīng)性多樣化（李國(guó)旗等，1999）。在同一科（或?qū)伲﹥?nèi)相同生活型的相關(guān)物種間，核DNA含量越低，其生長(zhǎng)發(fā)育速率越快，所要求的世代時(shí)間變短，能適應(yīng)條件惡劣的環(huán)境，所以其分布范圍廣（倪麗萍等，2005;郭水良等，2008）。查閱文獻(xiàn)加上多年野外調(diào)查，我們發(fā)現(xiàn)吊鐘花和齒緣吊鐘花的確要比晚花吊鐘花和臺(tái)灣吊鐘花的分布范圍廣（徐廷志，1982），說明吊鐘花和齒緣吊鐘花擁有更強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)能力。對(duì)于分布范圍較小且環(huán)境適應(yīng)能力較弱的晚花吊鐘花和臺(tái)灣吊鐘花可以考慮采用遷地保護(hù)，收集種子等策略保護(hù)這一稀缺植物資源。

一定程度上，同種植物為了保證遺傳的穩(wěn)定性，核DNA含量是保持恒定的，如木豆（Cajanus cajan） （Greilhuber & Obermayer， 1998）、小麥（Triticum aestivum）（Wetzel et al.， 1999）、Seleria albicans（Lysák et al.， 2000）等。本研究中多倍體植物燈籠樹和毛葉吊鐘花在相同倍性的情況下，種間和種內(nèi)均無顯著性差異（P>0.05），擁有較為穩(wěn)定的遺傳體系，并未因物種和地理環(huán)境等因素的不同而產(chǎn)生較大差異。但是，在自然界中依舊存在不少例外，早在1966年，Evans等（1966）發(fā)現(xiàn)不同環(huán)境下的亞麻（Linum usitatissimum）核DNA含量存在16%的差異。在玉米（Zea mays）（Laurie & Bennett， 1985）、黑麥草（Lolium perenne）（Sugiyama et al.， 2002）、葫蘆（Lagenaria siceraria）（Achigan et al.， 2008）等植物中也有類似報(bào)道，這些差異可能是由不同環(huán)境的氣候地理?xiàng)l件、生境、種群密度和生長(zhǎng)發(fā)育階段等因素所導(dǎo)致（郭水良等， 2011）。本研究二倍體齒緣吊鐘花核DNA含量除了貴州赤水與湖南新寧的居群之間都沒有顯著差異，其他居群之間都存在顯著性差異。比較這四個(gè)居群的氣候地理?xiàng)l件可以發(fā)現(xiàn)，僅有貴州赤水與湖南新寧的居群分布環(huán)境屬于典型的丹霞地貌，因?yàn)榈は嫉孛驳耐寥辣Ｋ芰^差，所以生長(zhǎng)在該地域的植物都有較強(qiáng)的抗旱能力（張貴志， 2012）。而江西永修的居群瀕臨鄱陽(yáng)湖，鄱陽(yáng)湖由于復(fù)雜的地形和水陸地表性質(zhì)不均勻性，影響湖區(qū)的中小尺度對(duì)流天氣系統(tǒng)的發(fā)生、發(fā)展和消亡，對(duì)植物生長(zhǎng)的氣候環(huán)境影響很大（傅敏寧， 2013）。至于湖北利川的居群，處于中亞熱帶與北亞熱帶的過渡地帶，山嶺重疊，溪谷縱橫，相對(duì)高差和氣候變化較大，山地氣候明顯。不同的地理環(huán)境條件對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育影響極大，這可能也是齒緣吊鐘花不同居群植物核DNA含量存在差異的原因。

我們基于流式細(xì)胞術(shù)，以二倍體齒緣吊鐘花為倍性參照，推測(cè)出了吊鐘花屬其他5個(gè)種的倍性水平。值得注意的是，燈籠樹和毛葉吊鐘花四倍體個(gè)體存在非整倍性問題，四倍體物種的核DNA含量約為二倍體齒緣吊鐘花核DNA含量的2.2倍，臺(tái)灣吊鐘花的2.0倍。其原因可能是（1） 倍性參照的選擇，不同二倍體物種核DNA含量存在顯著性差異，以不同二倍體種為參照，所推測(cè)目標(biāo)種的核DNA含量比值也有差異（Wang et al， 2009）;（2）四倍體物種可能來源于核DNA含量較大的物種雜交（Yokoya et al.， 2000）。所以，研究吊鐘花屬四倍體物種起源進(jìn)化時(shí)，應(yīng)該重點(diǎn)關(guān)注二倍體物種中核DNA含量較大的臺(tái)灣吊鐘花和晚花吊鐘花。此外，我們還發(fā)現(xiàn)吊鐘花屬六倍體植物的核DNA含量小于四倍體核DNA含量的1.5倍，小于二倍體晚花吊鐘花和臺(tái)灣吊鐘花核DNA含量的3倍。Bonos等（2002）發(fā)現(xiàn)剪股穎屬（Agrostis）六倍體植物核DNA含量小于二倍體核DNA含量的3倍，Jian等（2014）也發(fā)現(xiàn)了在薔薇屬（Rosa）四倍體植物核DNA含量小于二倍體核DNA含量的2倍。這些差異可能是物種之間基因組本質(zhì)差異，也可能是由高倍性的植物加倍形成過程中舍棄一些重復(fù)的DNA片段所導(dǎo)致（Bonos et al.， 2002）。

另外， 吊鐘花屬吊鐘花組除了分布在中國(guó)的四個(gè)物種為二倍體，還有分布在日本的Enkianthus perulatus也為二倍體（Sax， 1960），總狀花序組的燈籠樹和毛葉吊鐘花均存在四倍體與六倍體，分布在日本的E. campanulatus為八倍體，該組暫未發(fā)現(xiàn)二倍體物種，說明該屬這兩個(gè)組在倍性水平上有較大區(qū)別。該屬這兩個(gè)組的劃分不僅在宏觀形態(tài)（徐廷志， 1982）、微觀花粉（程子白和賴小榮， 1988）、分子標(biāo)記（Tsutsumi & Hirayama， 2012）和化學(xué)成分（陳孝泉等， 1986）上得到支持，現(xiàn)在還在核DNA含量與物種倍性上也印證了以上劃分的合理性。但是，關(guān)于吊鐘花屬核DNA含量與倍性水平研究還不完善，比如分布在中國(guó)的單花吊鐘花（E. pauciflorus）以及分布在日本的E. sikokianus、E. cernuus、E. nudipes皆因材料獲取困難而沒有得到充分研究。此外，本研究中有3個(gè)物種的5個(gè)居群E7、E8、E9、E12、E18樣品量較少，鑒于一個(gè)樣品量較少的居群植物核DNA含量可能無法代表單個(gè)物種的核DNA含量，所以本研究采用了多個(gè)居群去衡量單個(gè)物種的核DNA含量，可以更好地反映單個(gè)物種的核DNA含量（Bai et al.， 2012; Pellicer et al.， 2012）。

吊鐘花屬植物染色體大小為1～2 μm，屬于小染色體（Lima-De-Faria A， 1980），難以進(jìn)行核型分析。該屬植物流式細(xì)胞術(shù)倍性推測(cè)結(jié)果與染色體壓片結(jié)果一致，說明流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果可靠，可以用于該屬植物大規(guī)模倍性測(cè)定，這將極大提高植物倍性檢測(cè)的效率。本研究首次報(bào)道了吊鐘花、齒緣吊鐘花、晚花吊鐘花、燈籠樹、毛葉吊鐘花共5個(gè)種的核DNA含量（2C-值）、基因組大小和倍性水平，以及臺(tái)灣吊鐘花的核DNA含量（2C-值）和基因組大小。吊鐘花屬內(nèi)存在2x、4x、6x、8x，甚至同一個(gè)物種內(nèi)都存在多個(gè)倍性，由此可見，該屬多倍化現(xiàn)象非常普遍。至于該屬植物不同多倍體如何形成，不同倍性物種之間的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系如何，倍性變異在吊鐘花屬植物生態(tài)分化、物種形成中具有何種作用。這些有意義的問題尚未解決，但本研究為這些問題的解決奠定了重要的研究基礎(chǔ)。

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（責(zé)任編輯 李 莉）

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