阮振靚，鄧欣祺，陳倩，王亞楠，趙道通，申冰清，王宇航，鄔瑞光*，王春國(guó)*（.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 0009；.北京中醫(yī)藥大學(xué)北京中醫(yī)藥研究院，北京 0009；.北京中醫(yī)藥大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，北京 0009）

五味子為木蘭科植物五味子

Schisandra chinensis

（Turcz.）Baill.的干燥成熟果實(shí)，習(xí)稱“北五味子”。具有收斂固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心之功效，用于久嗽虛喘，遺尿尿頻，久瀉不止，自汗盜汗，津傷口渴，心悸失眠等癥狀?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，五味子具有保護(hù)消化系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)的作用，同時(shí)能夠發(fā)揮調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的作用，在腎病、癌癥、咳嗽等疾病的治療方面具有廣泛的應(yīng)用前景。

迄今，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已對(duì)五味子科植物進(jìn)行了大量研究，共分離鑒定出約200 多個(gè)成分，其中150 多個(gè)為木脂素類，此類化合物多數(shù)具有聯(lián)苯環(huán)辛二烯型的基本骨架（如圖1 所示），其獨(dú)特的骨架和復(fù)雜的立體結(jié)構(gòu)導(dǎo)致聯(lián)苯環(huán)辛二烯型木脂素結(jié)構(gòu)多樣化，是五味子特有和主要的生物活性成分。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明北五味子中的聯(lián)苯環(huán)辛二烯類木脂素具有降酶保肝、抑菌、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒、增強(qiáng)免疫等生物功能。根據(jù)化合物的結(jié)構(gòu)和不同的裂解方式，聯(lián)苯環(huán)烯型木脂素可以分為環(huán)辛二烯環(huán)無含氧取代、C7 含羥基取代的、C8 含酰氧基取代的、6，7-二羥基取代及其酯類和十一元環(huán)內(nèi)酯類。

圖1 五味子聯(lián)苯環(huán)辛二烯型木脂素類成分的母核結(jié)構(gòu)Fig 1 Parent nucleus structure of dibenzocyclooctadiene lignans in Schisandra chinensis

液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）因其高通量和高靈敏度性能已被廣泛用于五味子木脂素類和有機(jī)酸類成分的研究，但其人工解譜耗時(shí)耗力，分子網(wǎng)絡(luò)技術(shù)（MN）不僅能快速對(duì)化合物進(jìn)行聚類和可視化差異分析，而且能通過比較未知化合物與已知化合物結(jié)構(gòu)的相似度，推測(cè)其可能的結(jié)構(gòu)類型，與質(zhì)譜等分析技術(shù)聯(lián)用會(huì)更快速、全面表征中藥復(fù)雜化學(xué)成分，目前該方法在中藥分析領(lǐng)域的應(yīng)用日益被重視。

目前對(duì)五味子聯(lián)苯環(huán)辛二烯型木脂素類不同亞型的質(zhì)譜裂解行為和結(jié)構(gòu)區(qū)分缺乏系統(tǒng)性和針對(duì)性研究，同時(shí)將液質(zhì)聯(lián)用和分子網(wǎng)絡(luò)技術(shù)相結(jié)合快速鑒定五味子聯(lián)苯環(huán)辛二烯類化學(xué)成分的方法鮮有報(bào)道。有鑒于此，本研究基于UHPLCQ-Exactive-Orbitrap MS/MS，采用反相色譜系統(tǒng)——Cortecs C+，同時(shí)結(jié)合全球天然產(chǎn)物社會(huì)分子網(wǎng)絡(luò)（GNPS）對(duì)五味子提取物進(jìn)行全面表征和主要成分聚類分析，相對(duì)理清五味子該類型化學(xué)成分物質(zhì)基礎(chǔ)，為五味子的物質(zhì)基礎(chǔ)研究和類似化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Q-Exactive Orbitrap 四極桿-靜電場(chǎng)軌道阱質(zhì)譜儀：配有熱噴霧離子源（HESI）、Xcalibur 4.1 化學(xué)工作站（美國(guó)Thermo Scientific 公司）；Vanquish超高效液相色譜系統(tǒng)（DAD 檢測(cè)器，美國(guó)Thermo Scientific 公司）。Millipore Synergy UV 型超純水機(jī)（美國(guó)Millipore 公司）；Sartorious BT 25S 型萬(wàn)分之一電子分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；超聲波清洗器（北京中晟名科技有限公司，100 W）。

1.2 試藥

五味子購(gòu)于北京康泰民生藥房，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院鄔瑞光副教授鑒定為木蘭科植物五味子

Schisandra chinensis

（Turcz.）Baill.干燥成熟果實(shí)； 五味子甲素（批號(hào)：R12O08F45508，純度≥98%）、五味子乙素（批號(hào)：P24F12F139925，純度≥98%）、五味子醇甲（批號(hào)：Y30N10H104712，純度≥98%）對(duì)照品（上海源葉生物科技有限公司）；0.22 μm 微孔濾膜（天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；甲酸、甲醇、乙腈等（質(zhì)譜純，美國(guó)Fisher 公司）。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱：UHPLC CORTECS C+色譜柱（4.6 mm×150 mm，2.7 μm）；流動(dòng)相：0.1% 甲酸水溶液（A），乙腈溶液（B），梯度洗脫條件：0 ～3 min（5%B），3 ～45 min（5%～75%B），45 ～45.1 min（75%～5%B），45.1～50 min（5%B）；流速：0.3 mL·min；進(jìn)樣量：2 μL；柱溫：35℃。

2.2 質(zhì)譜條件

正離子模式：HESI-Ⅱ離子源，離子源溫度350℃，噴霧電壓3.5 kV，S-Lens RF 電壓60 V，毛細(xì)管溫度300℃，鞘氣和輔助氣均為高純氮?dú)猓兌龋?9.99%），鞘氣流速35 arb，輔助氣流速流速10 arb；負(fù)離子檢出模式：HESI-Ⅱ離子源，離子源溫度350℃，電離源電壓3.2 kV，S-Lens RF電壓60 V，鞘氣和輔助氣均為高純氮?dú)猓兌龋?9.99%），鞘氣流速35 arb，輔助氣流速10 arb。

掃描模式：一級(jí)全掃描（

m/z

120 ～1800）與數(shù)據(jù)依賴性二級(jí)質(zhì)譜掃描ddMS；分辨率：70 000（Full Scan），17 500（MS/MS）；碰撞模式：高能量碰撞解離（HCD），碰撞能量：NCE30，Stepped NCE50%。

2.3 對(duì)照品溶液制備

精密稱取五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲適量，加甲醇溶解配制成1 mL 溶液中含有20 μg 五味子甲素、41 μg 五味子乙素以及100 μg五味子醇甲的混合對(duì)照品溶液。

2.4 樣品溶液制備

取五味子藥材粉末（過三號(hào)篩）2 g，用70%甲醇定容于50 mL 量瓶?jī)?nèi)，超聲提取40 min。取適量過0.22 μm 微孔濾膜，置液相進(jìn)樣小瓶，待測(cè)。

2.5 分子網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建方法

使用MsConvert 軟件將原始的LC-MS/MS 數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為mzXML 格式，并上傳至GNPS 生成分子網(wǎng)絡(luò)，余弦分?jǐn)?shù)閾值設(shè)置為0.7，最小匹配碎片離子為6，topK 設(shè)置為10，母離子和子離子質(zhì)量偏差為0.02 Da，最后運(yùn)用Cytoscape 軟件使分析結(jié)果可視化。分子網(wǎng)絡(luò)圖中可直觀顯示提取液中所有未知化合物與標(biāo)準(zhǔn)化合物之間的結(jié)構(gòu)相似度，其中每一個(gè)節(jié)點(diǎn)表示一個(gè)化合物，結(jié)構(gòu)類似的化合物分子會(huì)在一個(gè)分子網(wǎng)絡(luò)中聚集成簇；節(jié)點(diǎn)的顏色表示不同的來源；節(jié)點(diǎn)與節(jié)點(diǎn)之間的連線表示化合物之間的相關(guān)性。

2.6 質(zhì)譜分析

質(zhì)譜數(shù)據(jù)通過Thermo Xcalibur 4.1 軟件處理分析，對(duì)于有對(duì)照品的化合物，與對(duì)照品圖譜中各已知成分的相對(duì)保留時(shí)間、準(zhǔn)分子離子等比對(duì)，再依據(jù)各對(duì)照品二級(jí)碎片離子信息進(jìn)一步確認(rèn)。對(duì)于無對(duì)照品的化合物，初步進(jìn)行推測(cè)，再結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道、數(shù)據(jù)庫(kù)中相同或類似成分的MS碎片離子進(jìn)行對(duì)比分析，保證對(duì)無對(duì)照品成分的準(zhǔn)確鑒定。

3 結(jié)果與討論

本研究采用UHPLC Q-Exactive Orbitrap MS/MS結(jié)合分子網(wǎng)絡(luò)技術(shù)共推測(cè)鑒定出31 種聯(lián)苯環(huán)辛二烯型木脂素類化學(xué)成分，其中在正離子模式下檢測(cè)到的13 種聯(lián)苯環(huán)辛二烯型木脂素成分為在五味子中首次鑒定。以下是對(duì)照品具體裂解途徑分析和基于分子網(wǎng)絡(luò)技術(shù)對(duì)未知成分的鑒定和聚類分析。

3.1 對(duì)照品的質(zhì)譜裂解行為

聯(lián)苯環(huán)烯型木脂素是中藥五味子最主要的特征性成分，其中五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲是五味子中非常重要的活性成分。本文首先研究上述3 個(gè)對(duì)照品的質(zhì)譜裂解行為，總結(jié)其裂解規(guī)律，為其他聯(lián)苯環(huán)辛二烯型木脂素類成分的推測(cè)和鑒定提供理論依據(jù)。

3.1.1 環(huán)辛二烯環(huán)無含氧取代的聯(lián)苯環(huán)烯型木脂素質(zhì)譜裂解規(guī)律 五味子甲素和五味子乙素同屬環(huán)辛二烯環(huán)無含氧取代的聯(lián)苯環(huán)烯型木脂素類型，其區(qū)別在于C12 位的甲氧基和羥基環(huán)化的差別。對(duì)其質(zhì)譜裂解行為研究發(fā)現(xiàn)，在HCD 碰撞裂解下，兩個(gè)化合物均出現(xiàn)相同或相似的碎片離子

m/z

401，402，386，316，331，330，301，300 等，說明五味子甲素在碎裂過程中首先會(huì)形成五味子乙素結(jié)構(gòu)的中間碎片。該類化合物另一碎裂特征是圍繞環(huán)辛二烯環(huán)的跨環(huán)碎裂，其碎裂為C6-C7 和C8-C9 鍵斷裂、并重排氫形成穩(wěn)定的六元芳環(huán)結(jié)構(gòu)，如五味子甲素主要形成

m/z

330，316，301 等碎片，其中

m/z

316 為基峰；而五味子乙素則以

m/z

300 為基峰。具體的質(zhì)譜裂解行為見圖2 和圖3。

圖2 五味子甲素MS/MS 圖和質(zhì)譜裂解途徑Fig 2 MS/MS spectrum and fragmentation pathway of schisandrin A

圖3 五味子乙素MS/MS 圖和質(zhì)譜裂解途徑Fig 3 MS/MS spectrum and fragmentation pathway of schisandrin B

3.1.2 環(huán)辛二烯環(huán)C7 含羥基取代的聯(lián)苯環(huán)烯型木脂素質(zhì)譜裂解規(guī)律 五味子醇甲是環(huán)辛二烯環(huán)C7 含羥基取代的聯(lián)苯環(huán)烯型木脂素類化合物，由于C7 位羥基易發(fā)生中性丟失一分子HO 形成較為穩(wěn)定的環(huán)辛三烯環(huán)結(jié)構(gòu)，較五味子甲素、五味子乙素等環(huán)辛二烯環(huán)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，因此基峰為

m/z

384，369 等完整環(huán)辛二烯環(huán)結(jié)構(gòu)，而非C6-C7 和C8-C9 鍵斷裂、重排氫后的六元芳環(huán)結(jié)構(gòu)，如

m/z

346，328 等。其具體的質(zhì)譜裂解行為見圖4。

圖4 五味子醇甲MS/MS 圖和質(zhì)譜裂解途徑Fig 4 MS/MS spectrum and fragmentation pathway of schisandrin

綜上，聯(lián)苯環(huán)烯型木脂素由于母核中多甲氧基的存在，會(huì)中性丟失1 個(gè)或多個(gè)中性甲基或殘基。環(huán)辛二烯環(huán)無含氧取代的化合物的主要碎裂特點(diǎn)是C6-C7 和C8-C9 位置的跨環(huán)斷裂、并重排氫形成穩(wěn)定的六元芳環(huán)為基峰，而環(huán)辛二烯環(huán)C7 含羥基取代化合物基峰則為C7 位羥基中性丟失一分子HO 形成穩(wěn)定的環(huán)辛三烯環(huán)結(jié)構(gòu)。

3.2 基于MS/MS 關(guān)聯(lián)的分子網(wǎng)絡(luò)分析五味子成分類別

在對(duì)五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲對(duì)照品質(zhì)譜裂解規(guī)律總結(jié)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步運(yùn)用基于MS/MS 關(guān)聯(lián)的分子網(wǎng)絡(luò)鑒定五味子化學(xué)成分。分別使用五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲對(duì)照品作為“種子”節(jié)點(diǎn)，被標(biāo)記為粉紅色?；贛S/MS 碎片模式的相似性，發(fā)現(xiàn)五味子中化學(xué)成分分別以“種子”節(jié)點(diǎn)被聚為兩類，其中以“種子”節(jié)點(diǎn)五味子甲素和五味子乙素為主要簇類別的可能為環(huán)辛二烯環(huán)無含氧取代的化合物，而以“種子”節(jié)點(diǎn)五味子醇甲為主要簇類別的可能為環(huán)辛二烯環(huán)C7含羥基取代的化合物。進(jìn)一步通過MS/MS 碎片及與“種子節(jié)點(diǎn)”的質(zhì)量差異進(jìn)行注釋，與“種子”節(jié)點(diǎn)相關(guān)且被鑒定的成分的被標(biāo)記為綠色（見圖5）。

圖5 正離子模式下五味子提取物MS/MS 關(guān)聯(lián)的分子網(wǎng)絡(luò)圖Fig 5 Molecular network of MS/MS correlation of Schisandra chinensis extract in positive ion mode

將鑒定的成分進(jìn)一步作為“種子”進(jìn)行其他未知成分的鑒定和推測(cè)，最終在五味子中共鑒定到木脂素類化合物31 種（如表1 和圖6 所示）。這些木脂素類化合物大多數(shù)為正離子模式所鑒定，戈米辛D 及戈米辛H 通過負(fù)離子模式實(shí)現(xiàn)鑒定。所鑒定的化合物出峰時(shí)間均在30 min 以后，推測(cè)原因?yàn)?，該類成分是低極性的脂溶性化合物，30 min 之前的峰大多為五味子中的有機(jī)酸、烯烴類成分。下面具體闡釋化合物鑒定的過程。

表1 UHPLC Q-Exactive Orbitrap MS 鑒別五味子提取物中化學(xué)成分
Tab 1 Identification of compounds in extract based on UHPLC Q-Exactive Orbitrap MS

編號(hào)電離模式間/min分子式理論分子量保留時(shí)實(shí)測(cè)分子量質(zhì)量誤差碎片離子信息（豐度比/%）鑒定化合物1＋ 33.410 C23H30O7418.1989 418.19920.59 332.1248（89.54）；370.1770（100）；401.1955（32.46） 戈米辛S 2*＋ 35.590 C23H30O7418.1988 418.19920.81 300.0975（0.59）；332.1236（3.85）；370.1766（100）；401.1955（23.28）；402.1982（3.62）；419.1956（2.90）戈米辛S 同分異構(gòu)體1 3*＋ 41.450 C23H30O7418.1988 418.19920.94 201.0909（100）；338.1457（7.16）；370.1731（9.91）；401.1898（3.34）；419.2383（3.02）戈米辛S 同分異構(gòu)體2 4*＋ 43.670 C23H30O7418.1988 418.19920.80 316.1289（33.87）；332.1250（69.95）；370.1772（67.57）；401.1975（8.27）；419.1848（100）戈米辛S 同分異構(gòu)體3 5＋ 32.796 C24H32O8448.2095 448.20970.44 342.1457（100）；358.1402（30.34）；373.1641（43.64） 戈米辛Q 6＋ 40.024 C22H28O6388.1881 388.18861.18 227.0700（54.70）；231.1006（1.37）；287.0911（100）；288.0981（44.56）；301.1062（12.71）；357.1688（17.16）戈米辛J 7*＋ 49.804 C22H28O6388.1882 388.18861.06 91.0547（19.95）；371.1851（100）；388.3934（19.90）；332.1037（1.02）；389.3966（9.38）戈米辛J 同分異構(gòu)體8＋ 37.660 C22H26O6386.1725 386.17291.21 299.0913（53.15）；323.1274（71.28）；331.1169（21.56）；355.1535（100）；387.1790（20.33）（＋）-戈米辛M1 9＋ 39.010 C22H26O6386.1725 386.17291.16 299.0906（36.59）；331.1158（21.50）；355.1531（100）；387.1725（37.49）（＋）-戈米辛M2 10*＋ 40.250 C22H26O6386.1724 386.17291.29 299.0905（39.25）；331.1263（31.13）；355.1534（100）；387.1786（19.40）（＋）-戈米辛M同分異構(gòu)體1 11*＋ 40.730 C22H26O6386.1724 386.17291.29 299.0913（26.35）；310.1555（100）；331.1589（6.48）；355.1470（30.06）；387.1793（15.76）（＋）-戈米辛M同分異構(gòu)體2

續(xù)表1

注（Note）：對(duì)照品（reference substance）；首次檢定（first identification）。

編號(hào)電離模式間/min分子式理論分子量保留時(shí)實(shí)測(cè)分子量質(zhì)量誤差碎片離子信息（豐度比/%）鑒定化合物12*＋ 48.770 C22H26O6386.1724 386.17291.29 171.0799（55.46）；227.0699（21.23）；285.0750（100）；299.0896（14）；355.1536（16.47）；387.1799（20.29）（＋）-戈米辛M同分異構(gòu)體3 13＋ 39.503 C22H24O7400.1517 400.15221.21 165.0546（100）；341.1016（34.90）；370.1784（48.40）；383.1476（9.27）；401.1963（17.17）戈米辛 R 14＋ 44.360 C24H30O7430.1988 430.19920.80 341.1378（45.04）；356.1615（100）；372.1561（49.26）；387.1796（28.80）methylisogomisin O 15*＋ 43.850 C24H30O7430.1989 430.19920.66 356.1614（100）；358.1401（15.19）；372.1562（46.63）；387.1796（28.49）methylisogomisin同分異構(gòu)體16＋ 47.164 C23H26O7414.1673 414.16791.23 340.1301（100）；342.1089（53.28）；371.1484（1.90）；373.1274（29.73）neoisostegane 17*＋ 44.840 C23H26O7414.1673 414.16791.23 340.1301（100）；342.1084（56.23）；371.1485（62.33）；373.1274（34.99）neoisostegane 同分異構(gòu)體1 18*＋ 45.200 C23H26O7414.1673 414.16791.23 340.1301（100）；341.1374（75.99）；356.1248（78.05）；371.1485（61.78）；373.1276（48.80）neoisostegane 同分異構(gòu)體2 19*＋ 45.624 C23H26O7414.1673 414.16791.23 340.1302（100）；341.1367（77.54）；356.1243（72.30）；371.1478（59.95）neoisostegane 同分異構(gòu)體3 20*＋ 46.320 C23H26O7414.1673 414.16791.23 340.1296（100）；342.1085（60.87）；371.1479（64.97）；373.1268（28.36）neoisostegane 同分異構(gòu)體4 21*＋ 47.961 C23H26O7414.1673 414.16791.23 340.1296（100）；343.1165（58.17）；366.1452（64.92）；385.1633（54.18）neoisostegane 同分異構(gòu)體5 22＋ 43.743 C28H36O8500.2402 500.24101.69 83.0497（84.55）；318.1093（2.08）；332.1249（75.81）；370.1770（100）propinquanin F 23＋ 41.189 C27H34O8486.2250 486.22540.81 83.0496（100）；219.1017（35.21）；295.1324（23.77）；313.1067（32.67）；355.1534（50.03）24＋ 35.023 C22H24O6384.1570 384.15730.85 191.1060（2.29）；219.1015（23.90）；247.0963（100）；339.1588（76.93）；385.1598（5.62）schisantherin F五味子素 C 25＋ 44.107 C22H24O6384.1570 384.15730.83 312.0987（25.20）；316.0938（100）；329.1012（20.32）；355.1533（84.20）；385.1613（32.89）五味子素 C 同分異構(gòu)體1 26＋ 47.173 C22H24O6384.1570 384.15730.83 313.1050（34.81）；328.1295（61.71）；329.1337（7.14）；354.1446（28.77）；385.1630（100）五味子素 C 同分異構(gòu)體2 27－ 36.238 C28H34O10530.2156 530.21520.74 209.1168（100）；435.2162（69.98）；453.2265（40.38） 戈米辛 D 28－ 40.820 C23H30O7418.1841 418.18351.39 181.0858（5.79）；309.1481（34.87）；310.1556（60.24）；369.1692（100）；387.1798（20.15）戈米辛 H 29#＋ 41.570 C24H32O6416.2193 416.21991.45 316.1294（100）；301.1060（29.02）；347.1478（21.82）；402.2023（24.70）五味子甲素30#＋ 43.770 C23H28O6400.1880 400.18861.53 300.0980（100）；301.1047（46.03）五味子乙素31#＋ 38.460 C24H32O7432.2139 432.21482.15 346.1405（65.02）；369.1691（66.18）；384.1925（100）；342.1454（35.09）五味子醇甲

圖6 五味子提取物在正離子模式下的總離子流圖Fig 6 Total ion chromatogram of Schisandra chinensis extract in positive ion mode

3.2.1 環(huán)辛二烯環(huán)無含氧取代的聯(lián)苯環(huán)烯型木脂素鑒定 峰8 精確分子量為

m/z

386.1729，推測(cè)其元素組成為CHO（質(zhì)量誤差1.21）。在MS/MS 出現(xiàn)

m/z

355，331，323，299 等碎片離子（見圖7）。其中碎片離子

m/z

331 和299 分別與碎片離子

m/z

387 和355 相差56 Da，其碎裂行為符合環(huán)辛二烯環(huán)丟失CH碎片離子形成穩(wěn)定六元環(huán)結(jié)構(gòu)的裂解規(guī)律。由此推測(cè)該化合物是環(huán)辛二烯環(huán)無含氧取代的聯(lián)苯環(huán)烯型木脂素類化合物，而峰8 的精確分子量相較于五味子乙素相差一個(gè)亞甲基官能團(tuán)，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，推測(cè)化合物8 為（＋）-戈米辛M1。

圖7 峰8（戈米辛M1）的MS/MS 圖Fig 7 MS/MS diagram of peak 8（gomisin M1）

同理，根據(jù)高分辨質(zhì)譜精確分子量（質(zhì)量誤差≤5）的提取離子色譜（XIC）以及數(shù)據(jù)依賴性掃描的多級(jí)質(zhì)譜（MS/MS）發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照品五味子甲素（CHO）和五味子乙素（CHO）具有相似碎裂特征的化合物還有9 個(gè)，分別為峰6、7、9、10、11、12、24、25、26。這些化合物在MS/MS 質(zhì)譜圖中，其碎片離子差均出現(xiàn)?56 Da（環(huán)辛二烯環(huán)的跨環(huán)碎裂丟失CH）的碎片特征。由此推斷這9 個(gè)化合物均為環(huán)辛二烯環(huán)無含氧取代的聯(lián)苯環(huán)烯型木脂素。結(jié)合文獻(xiàn)，根據(jù)保留時(shí)間和MS/MS 碎片分別鑒定這些化合物結(jié)構(gòu)為戈米辛J 及其同分異構(gòu)體、（＋）-戈米辛M2 及戈米辛M 同分異構(gòu)體1/2/3、五味子素C 及五味子素C 同分異構(gòu)體1/2，而7、10、11、12 號(hào)化合物為該植物首次鑒定。

3.2.2 環(huán)辛二烯環(huán)C7 含羥基取代的聯(lián)苯環(huán)烯型木脂素鑒定 峰1 精確分子量為

m/z

418.1992，推測(cè)其元素組成為CHO（質(zhì)量誤差0.59）。在MS/MS 碎片中發(fā)現(xiàn)[M ＋H-HO]峰（

m/z

401）較為顯著（見圖8），與對(duì)照品五味子醇甲（CHO）的質(zhì)譜裂解規(guī)律類似，推測(cè)可能為環(huán)辛二烯環(huán)C7 位羥基中性丟失一分子HO 形成穩(wěn)定的環(huán)辛三烯環(huán)結(jié)構(gòu)。另外，峰1 從精確分子量較于五味子醇甲相差一個(gè)亞甲基官能團(tuán)，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，推測(cè)化合物1 號(hào)為戈米辛S。

圖8 峰1（戈米辛S）的MS/MS 圖Fig 8 MS/MS diagram of peak 1（gomisin S）

同理，根據(jù)高分辨質(zhì)譜精確分子量（質(zhì)量誤差≤5）的提取離子色譜（XIC）以及數(shù)據(jù)依賴性掃描的多級(jí)質(zhì)譜（MS/MS）發(fā)現(xiàn)，1、2、3、4、13、22、23、28 等化合物的裂解特征均為中性丟失一分子HO 形成穩(wěn)定的碎片離子。由此推斷這8 個(gè)化合物均為環(huán)辛二烯環(huán)C7 含羥基取代的聯(lián)苯環(huán)烯型木脂素。其中根據(jù)對(duì)照品五味子醇甲以及文獻(xiàn)和保留時(shí)間、MS/MS 碎片分別鑒定1、2、3、4、13、22、23、28 化合物結(jié)構(gòu)為戈米辛S 及其同分異構(gòu)體1/2/3、戈米辛R、propinquanin F、schisantherin F、戈米辛H。其中化合物2 ～4號(hào)化合物為該植物首次鑒定。

4 結(jié)論

本研究采用簡(jiǎn)單的前處理同時(shí)結(jié)合UHPLC Q-Exactive Orbitrap MS/MS 和分子網(wǎng)絡(luò)技術(shù)，建立了一種快速篩查和鑒定中藥五味子中聯(lián)苯環(huán)辛二烯型木脂素類化學(xué)成分的分析方法。根據(jù)所獲得的精確分子質(zhì)量、碎片離子等信息，結(jié)合對(duì)照品信息和相關(guān)文獻(xiàn)，共鑒定出31 種聯(lián)苯環(huán)辛二烯型木脂素類化合物，其中有13 個(gè)成分為首次在五味子中檢出。本研究進(jìn)一步豐富和細(xì)化了五味子有效成分信息特征，為五味子化學(xué)成分的分析提供一定參考，為五味子中聯(lián)苯環(huán)辛二烯型木脂素類成分的物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供依據(jù)。

本研究擬采用UHPLC Q-Exactive Orbitrap MS/MS 和分子網(wǎng)絡(luò)技術(shù)對(duì)五味子成分進(jìn)行快速篩查和深度鑒定，并解析其可能存在的新成分，以形成一套較為完整的成分表征策略，為化合物的物質(zhì)基礎(chǔ)分析提供方法學(xué)參考。