李圣元 龍巖市農(nóng)業(yè)學(xué)校 福建龍巖 364000

在非洲豬瘟疫情影響下，龍巖市養(yǎng)豬場(chǎng)2019 年生豬存欄量與出欄量呈現(xiàn)大幅度下降的趨勢(shì)， 隨著各豬場(chǎng)生物安全意識(shí)提高， 臨床上常見的幾種病毒性傳染病得到一定緩解， 但一些重要的病毒性傳染病問題仍比較突出，并呈現(xiàn)出新的流行特點(diǎn)[1]。 豬的病毒性傳染病中對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成經(jīng)濟(jì)損失大的主要是由病毒引起的豬繁殖障礙疾病和消化道疾病[2]，該類疫病具有傳播快、流行廣的特點(diǎn)，臨床上常見的主要有豬瘟、偽狂犬病、圓環(huán)病毒病以及豬繁殖與呼吸綜合征等。 這些疫病通常會(huì)引起種豬不育、 精液質(zhì)量下降；母豬不發(fā)情、返情及不孕等癥狀；妊娠母豬發(fā)生流產(chǎn)、早產(chǎn)、木乃伊胎、弱仔胎等一系列癥狀，在臨床上一般無特效治療方法， 大多數(shù)可用疫苗接種來達(dá)到一定的防控效果[2]。 豬群在注射疫苗后通常會(huì)產(chǎn)生良好的免疫效果， 但由于不同豬場(chǎng)的具體情況千差萬別，且疫苗在運(yùn)輸、保存以及注射過程中難免出現(xiàn)紕漏，免疫失敗的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，如接種后仍然發(fā)病，未達(dá)到預(yù)定的保護(hù)期等。 因此，豬場(chǎng)應(yīng)主動(dòng)通過抗體水平監(jiān)測(cè)來確認(rèn)疫苗接種后是否達(dá)到理想的免疫效果，從而減少免疫失敗等情況發(fā)生[2]。

龍巖市養(yǎng)豬規(guī)模在幾十頭到幾百頭母豬的豬場(chǎng)占有較大比重， 為評(píng)估龍巖市各地區(qū)豬群中四類疫病的免疫水平，本文對(duì)龍巖市各地區(qū)10 個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)母豬進(jìn)行抽血檢測(cè)， 用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 方法對(duì)采集的296 份血樣進(jìn)行抗體檢測(cè)，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析總結(jié)。

1 材料與方法

1.1 血清樣品 2019 年 3 月 1 日至 2019 年 10 月1 日，分別采集龍巖市新羅區(qū)、連城縣、武平縣以及長汀縣等10 個(gè)不同規(guī)模化豬場(chǎng)母豬血樣， 合計(jì)296 份。

1.2 診斷試劑與儀器 豬偽狂犬病病毒gE 糖蛋白阻斷ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒、圓環(huán)病毒2 型ELISA抗體檢測(cè)試劑盒、 豬繁殖與呼吸綜合征抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，由金邁詩生物科技有限公司提供；豬瘟抗體 ELISA 檢測(cè)試劑盒， 由 IDEXX 公司提供；Biotek 酶標(biāo)儀、 洗板機(jī)等， 均由美國伯騰儀器公司提供。

1.3 操作方法與步驟 （1）配置洗滌液。 （2）血清稀釋。 （3）去除抗原包被板，在相應(yīng)孔內(nèi)分別加入稀釋的待檢血清和對(duì)照血清。（4）密封抗原包被板，孵育。（5）揭去封膜板，洗板，加入酶結(jié)合底物溶液，密封孵育。 （6）重復(fù)步驟（5），加入底物溶液。 （7）室溫下避光顯色 10~15 min。 （8）加入終止液，混勻，15 min 內(nèi)測(cè)定結(jié)果。（9）按照說明書分別在在酶標(biāo)儀測(cè)定各孔OD450nm值。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn) 按照各試劑盒說明將讀取的OD450nm值換算成所需值， 并按表1 的判定標(biāo)準(zhǔn)來判定檢測(cè)結(jié)果。

表1 試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)

2 結(jié)果與分析

四種疫病抗體水平檢測(cè)結(jié)果見表2。 總體上看，龍巖地區(qū)部分規(guī)?；i場(chǎng)免疫效果最好的是豬瘟，抗體陽性率高且變異系數(shù)低，抗體整齊度相對(duì)良好；豬繁殖與呼吸綜合征抗體S/P 平均值為1.61， 處于相對(duì)合理區(qū)間，但整齊度不佳；圓環(huán)病毒2 型抗體整體免疫效果尚可，但整齊度較差；偽狂犬病病毒gE抗體陽性率偏高， 結(jié)合發(fā)現(xiàn)部分豬場(chǎng)野毒流行較為嚴(yán)重，需要加強(qiáng)其控制和凈化措施。

表2 龍巖地區(qū)部分規(guī)?；i場(chǎng)四種疫病抗體檢測(cè)情況

2.1 豬瘟抗體水平與分析 275 份血清中共檢出陽性樣品257 份，整體陽性率為93.45%，變異系數(shù)為30.69%。 由圖1 可見，所檢大部分豬場(chǎng)的豬瘟抗體陽性率達(dá)到95%以上，陽性率高且抗體水平整齊度良好，但中A、J 兩家豬場(chǎng)抗體水平一般，整齊度較差，應(yīng)針對(duì)豬瘟抗體不合格的母豬進(jìn)行加強(qiáng)免疫。

圖1 規(guī)模化豬場(chǎng)CSF 抗體水平檢測(cè)圖

豬瘟，又名豬霍亂，通常以發(fā)病快、發(fā)病率高、患病后持續(xù)高熱、全身出血以及白細(xì)胞減少為特征，是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定的必須報(bào)告的疫病之一。 根據(jù)研究報(bào)道[3]，感染豬瘟病毒的母豬會(huì)發(fā)生所謂的“母豬帶毒綜合征”，其數(shù)量可以達(dá)到妊娠母豬的43%，由于母豬的持續(xù)性感染，因而導(dǎo)致所生仔豬出現(xiàn)先天性免疫耐受，一旦外界條件發(fā)生改變，將會(huì)導(dǎo)致疫病大面積流行。 從2011-2018 年病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果來看， 中國大陸地區(qū)豬瘟發(fā)病率和病死率一直處于下降狀態(tài)， 陽性帶毒率從 9.26%下降到0.70%， 說明我國C 株疫苗對(duì)現(xiàn)有的豬瘟流行毒株能提供有效保護(hù)， 也為我國的豬瘟凈化和根除提供了堅(jiān)實(shí)的技術(shù)支持[4]。 但目前部分養(yǎng)殖場(chǎng)（尤其是小型養(yǎng)豬場(chǎng)）依然存在病毒污染，豬瘟控制和凈化工作仍面臨不少困難和挑戰(zhàn)。

2.2 豬繁殖與呼吸綜合征抗體水平與分析 292 份血清樣品中， 檢出陽性樣品262 份， 陽性率達(dá)到89.73%，變異系數(shù)55.30%，抗體水平整齊度不佳。結(jié)合圖2-圖3 可以看出，A、J 兩個(gè)豬場(chǎng)陽性率達(dá)到100%， 且離散度較低，S/P 平均值在合理范圍內(nèi)，說明免疫效果較為理想。 I 豬場(chǎng)陽性率較低，且離散度為73.22%，抗體水平均一性較差，免疫效果不理想。由圖3 可以看出，F(xiàn) 場(chǎng)陽性率雖達(dá)到100%，但其S/P均值超過2.5，超過合理區(qū)間，分析可能存在藍(lán)耳病病毒活躍的跡象。

圖2 規(guī)模化豬場(chǎng)PRRS 抗體水平檢測(cè)圖

圖3 規(guī)?；i場(chǎng)PRRS 抗體S/P 平均值分布圖

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種豬的繁殖障礙和呼吸系統(tǒng)疾病[2]。 目前，高致病性豬藍(lán)耳?。℉PPRRS）毒株依然是優(yōu)勢(shì)流行毒株。近幾年來，雖然不時(shí)也有HP-PRRS 暴發(fā)的報(bào)道， 但總體上以地方性流行為主[5]。

有研究表明， 疫苗免疫的作用可以減少臨床發(fā)病和病理損傷，減少患豬排毒90%以上，改善生產(chǎn)性能、降低發(fā)病率和病死率，且弱毒疫苗效率要優(yōu)于滅活疫苗[6-7]。 豬繁殖與呼吸綜合征是免疫抑制性疾病，侵害免疫系統(tǒng)的同時(shí)還會(huì)造成持續(xù)性感染，并具抗體依賴增強(qiáng)作用以及減緩抗體產(chǎn)生的時(shí)間[5]。 根據(jù)江斌對(duì)近年來福建省豬藍(lán)耳病發(fā)病統(tǒng)計(jì)， 當(dāng)前藍(lán)耳病發(fā)病多種基因型并存， 除經(jīng)典毒株 （如V2332株、CH-1R 株）和高致病性毒株（如江西株、湖南株、天津株等）外，還有毒力介于上述兩者之間的新毒株（如 NADC30 株、QYYZ 株），自然感染或注射活疫苗后，豬只會(huì)出現(xiàn)長期帶毒和排毒的現(xiàn)象。 因而針對(duì)I豬場(chǎng)陽性但無明顯臨床癥狀的情況， 不僅要選擇安全高效的疫苗進(jìn)行科學(xué)免疫接種， 更要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理， 定期在飼料或飲水中添加黃芪多糖等抗病毒藥物，并進(jìn)行后期的預(yù)警監(jiān)測(cè)工作。

2.3 圓環(huán)病毒病抗體水平與分析 294 份血清中檢出陽性樣品280 份，陽性率為95.24%。 由圖4 可以看出， 所檢大部分規(guī)?；i場(chǎng)的抗體陽性率達(dá)到100%，且變異系數(shù)處于合理范圍內(nèi)，抗體水平比較整齊。 其中A 場(chǎng)陽性率僅60%，變異系數(shù)超過合理范圍，S/P 平均值較低，懷疑豬場(chǎng)可能存在圓環(huán)病毒野毒感染， 應(yīng)結(jié)合豬場(chǎng)豬群健康度進(jìn)行評(píng)估， 必要時(shí)采取有效的生物安全措施， 降低圓環(huán)病毒野毒的威脅。

圖4 規(guī)模化豬場(chǎng)PCV2 抗體水平檢測(cè)圖

豬圓環(huán)病毒?。≒CVD）是由豬圓環(huán)病毒（PCV）引起的一系列相關(guān)疾病的總稱，臨床上具體表現(xiàn)為：斷乳仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征 （Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）、皮炎與腎病綜合征（Porcine dermatitis nephropathy syndrome）、自主先天性震顫（Congenital tremors，CT）等。 PCV 屬于圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬，是當(dāng)前發(fā)現(xiàn)最小的動(dòng)物病毒之一，按血清學(xué)及其基因組差異可分為 PCV1、PCV2、PCV3 三種血清型，其中PCV1 被認(rèn)為是豬腎細(xì)胞系中一種污染物， 已證實(shí)無致病性；PCV2 是引起PMWS 等圓環(huán)病毒相關(guān)病的主要病原之一；PCV3 于2016 年由Phan 等[8]發(fā)現(xiàn)并命名，多發(fā)現(xiàn)于患有皮炎與腎病綜合征（PDNS）的患豬體內(nèi)，其致病性以及現(xiàn)有商品化PCV2 疫苗對(duì)其免疫效力等當(dāng)前尚無定論[9-10]。 2016 年 Xiao 等[11]研究表明，PCV2d 已成為在美國流行的主要基因型。

根據(jù)江斌[1]調(diào)查研究，福建省當(dāng)前主要流行的圓環(huán)病毒為PCV2，但仍存在PCV3 感染；我國近幾年相繼報(bào)道部分省市檢測(cè)出PCV3[9]，劉建奎等[12]通過對(duì)福建省豬場(chǎng)的圓環(huán)病毒病血清學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)， 近年來PCV3 感染率近12.5%。 圓環(huán)病毒病是典型的免疫抑制病，感染后會(huì)降低機(jī)體自身的免疫力，并通過免疫抑制作用影響疫苗的免疫效果。 其中PCV3 對(duì)母豬的影響較大，會(huì)引發(fā)母豬的多種繁殖疾病，如流產(chǎn)、木乃伊胎等。雖然當(dāng)前市面上的圓環(huán)病毒病疫苗均可達(dá)到理想的免疫效果， 但豬場(chǎng)仍需加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，規(guī)范引種，并做好生物安全工作以防止圓環(huán)病毒野毒感染。

2.4 偽狂犬病抗體水平與分析 偽狂犬病病毒又稱豬皰疹病毒Ⅰ型、奧葉茲基氏病病毒，屬于皰疹病毒科、豬皰疹病毒屬[2]。 臨床上可致母豬流產(chǎn)、不發(fā)情、返情、屢配不孕等癥狀；新生仔豬感染后病死率可達(dá)100%， 并伴有嚴(yán)重的神經(jīng)癥狀； 保育仔豬瘦弱、“掉隊(duì)”；育肥豬發(fā)病后常繼發(fā)細(xì)菌感染（如傳染性胸膜肺炎等）導(dǎo)致死亡。 當(dāng)前，龍巖地區(qū)豬場(chǎng)所使用的疫苗主要以Bartha K61 株、HB2000 株以及上市不久的C 株為主，其中PRV 的主要毒力基因（gE基因）均缺失，可以確保疫苗的安全性且可以辨別野毒與疫苗產(chǎn)生的抗體，因此，使用ELISA 診斷試劑盒檢測(cè)gE 抗體可以直接反映野毒的感染情況。

在292 份所檢血清中檢出陽性90 份，偽狂犬病野毒的平均陽性率為30.82%， 與筆者2018 年對(duì)福建省龍巖市豬偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查的結(jié)果30.41%相近。在10 個(gè)場(chǎng)中，陰性場(chǎng)有3 個(gè)，野毒感染較為嚴(yán)重的為C 場(chǎng)，其陽性率高達(dá)91.89%，建議每年“一刀切”免疫6 次，即每2 個(gè)月1 次，并定期對(duì)豬群進(jìn)行監(jiān)測(cè)，最終建立新的陰性群。 整體來看，龍巖地區(qū)的偽狂犬病控制與凈化仍任重而道遠(yuǎn)。

本次所檢的10 個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)，豬瘟的免疫效果較好，圓環(huán)病毒病、豬繁殖與呼吸綜合征的免疫陽性率較高，但各場(chǎng)之間抗體水平差異較大，仍需引起一定的重視。