張雪梅，丁超，董莎

濟寧市第三人民醫(yī)院檢驗科，山東濟寧 272000

EB 病毒（epstein-barr virus, EBV）為雙鏈DNA病毒，屬于皰疹病毒科γ 皰疹病毒，流行病學研究提示全球約90%以上人群曾感染過EB 病毒[1]。EB病毒感染多見于兒童，主要表現(xiàn)為傳染性單核細胞增多癥（infectious mononucleosis, IM），大量的單個核細胞增生是傳染性單核細胞增多癥的主要特征[2-3]。傳染性單核細胞增多癥多易反復，嚴重患兒還可出現(xiàn)器官衰竭甚至死亡，因此早期準確的診斷和有效干預較為重要。

既往文獻提示T 細胞在EB 病毒感染患兒機體中具有異常變化并提示EBV DNA 載量可能與疾病的嚴重程度存在相關性[4-5]。已有研究發(fā)現(xiàn)EB 病毒感染與機體的細胞免疫和體液免疫均存在相關性，EB 感染患兒的病情進展與免疫功能低下有關[6]。故而，本研究選取2019 年1 月—2021 年4 月濟寧市第三人民醫(yī)院收治的60 例EBV-IM 患兒為研究對象，探討EB 病毒感染所致傳染性單核細胞增多癥（EBV-IM）患兒EBV-DNA 拷貝數(shù)與淋巴細胞的相關性?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院收治的60 例EBV-IM 患兒納入觀察組，同時選取健康兒童50 名作為對照組，兩組一般資料的資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)患兒監(jiān)護人知情同意及院內(nèi)醫(yī)學倫理委員會批準。見表1。

表1 兩組一般資料對比

1.2 納入與排除標準

納入標準：①實時定量聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction, PCR）檢測EBV-DNA 陽性；②IM 診斷符合《諸福棠實用兒科學》中的標準；③初次治療患兒。排除標準：①近1 個月有糖皮質激素、免疫抑制劑等藥物服用史者；②合并有心肌炎、免疫系統(tǒng)疾病、肝腎功能障礙等其他疾病者。

1.3 方法

①所有待檢兒童均取空腹靜脈血3 mL，離心后分離血清，采用血球儀（日本希森美康）和細胞鏡檢檢測外周血淋巴細胞和異型淋巴細胞。

②采用血清免疫球蛋白儀（德國西門子），應用免疫比濁法檢測IgG、IgM 和IgA 水平，相關檢測試劑盒購于南京建成生物研究所。

③采用實時定量PCR 儀（中國天?。z測EBVDNA 拷貝數(shù)，將全血標本按照試劑盒說明書處理和提取DNA，并取20 μl 加入DNA 檢測體系樣品反應槽中擴增和檢測：2 min 50℃預反應，5 min 94℃預變性，10 s 94℃，40 s 60℃為一個循環(huán)，共進行50個循環(huán)后檢測EBV-DNA 拷貝數(shù)，檢測極限為5×102copies/μl，檢測的數(shù)值≥5×102copies/μl 為陽性。

1.4 觀察指標

觀察比較兩組外周血淋巴細胞、異型淋巴細胞、免疫球蛋白G（immunoglobulin G, IgG）、IgM 和lgA 差異。觀察比較觀察組不同性別、年齡兒童外周血淋巴細胞、異型淋巴細胞和特異性免疫蛋白水平。

1.5 統(tǒng)計方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計量資料以（±s）表示，組間差異比較采用t檢驗；非正態(tài)分布計量資料采用M（P25，P75）表示，組間差異比較采用秩和檢驗；計數(shù)資料以[n(%)]表示，組間差異比較采用χ2檢驗；相關性采用Spearman 秩 相 關 分 析，P＜0.05 為 差 異 有 統(tǒng) 計 學意義。

2 結果

2.1 兩組外周血淋巴細胞和異型淋巴細胞水平比較

觀察組外周血淋巴細胞和異型淋巴細胞水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組外周血淋巴細胞和異型淋巴細胞水平對比[M（P25，P75），%]

2.2 兩組特異性免疫蛋白水平比較

觀察組外周血IgG、IgM 和IgA 水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組特異性免疫蛋白水平對比[M（P25，P75），g/L]

2.3 觀察組不同性別、年齡患兒外周血淋巴細胞、異型淋巴細胞和特異性免疫蛋白水平比較

觀察組不同性別、年齡患兒外周血淋巴細胞、異型淋巴細胞和特異性免疫蛋白比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表4。

表4 觀察組不同性別、年齡患兒外周血淋巴細胞、異型淋巴細胞水平對比[M（P25，P75），%]

2.4 EBV-DNA 拷貝數(shù)與淋巴細胞和異型淋巴細胞的相關性分析

觀 察 組EBV-DNA 拷 貝 數(shù) 為0.30（0.10，0.61）copies/mL，將EBV-DNA 拷貝數(shù)與外周血淋巴細胞、特異性免疫蛋白進行相關分析，結果顯示EBVDNA 拷貝數(shù)與淋巴細胞呈正相關（rs=0.332，P＜0.05），與異型淋巴細胞、IgG、IgM、IgA 未見明顯相關性（rs=0.102、0.084、0.043、0.022，P＞0.05）。

續(xù)表4 觀察組不同性別、年齡兒童特異性免疫蛋白水平比較 [（M（P25，P75）,g/L]

3 討論

EB 病毒歸屬于皰疹病毒，是一種嗜淋巴細胞的DNA 病毒，具有轉化和潛伏特性，已證實是兒科多種疾病特別是發(fā)熱性疾病的主要病原體[7]。EB病毒感染后多數(shù)表現(xiàn)為傳染性單核細胞增多癥，部分患兒常因無法有效控制病情而導致遷延不愈并繼發(fā)其他惡性疾病。

本研究結果中，觀察組外周血淋巴細胞和異型淋巴細胞明顯高于對照組（P＜0.05）。上述結果提示EBV-IM 患兒T 細胞亞群紊亂，具體發(fā)病機制可能是EB 病毒感染機體后并在細胞內(nèi)大量復制，細胞發(fā)生溶解后EB 病毒逐漸釋放進入血液，導致T細胞分泌大量細胞因子[8-10]。故而，EB 感染患兒存在淋巴細胞紊亂現(xiàn)象。既往文獻提示IM 的發(fā)病及病情進展過程中存在異常的細胞免疫情況，這也與本研究結果具有一致性[11-13]。

本研究中兩組特異性免疫蛋白水平比較結果顯示：觀察組外周血IgG、IgM 和IgA 水平明顯高于對照組（P＜0.05）。該結果說明EBV-IM 患兒存在一定程度的免疫功能紊亂，這可能是因為機體由EB病毒入侵形成抗原，進而刺激產(chǎn)生特異性抗體，促進補體激活免疫細胞形成強效免疫效應導致外周血IgG、IgM 和IgA 免疫蛋白水平相對較高。

臨床中將熒光定量聚合酶鏈反應逐漸用來檢測EBV-DNA，且可以反映機體EBV-DNA 水平和EB 病毒感染和病毒的復制情況，臨床上可以根據(jù)EBV-DNA 拷貝數(shù)判斷病情嚴重程度[14-18]。本研究結果顯示，EBV-DNA 拷貝數(shù)與淋巴細胞呈正相關（P＜0.05），其余未見相關性。該結果說明EBV-IM患兒的EBV-DNA 拷貝數(shù)與淋巴細胞有一定相關性。相關文獻顯示IM 患兒外周血EBC-DNA 載量與疾病的嚴重程度呈顯著正相關，這也與本研究結果一致，EB 病毒感染免疫功能缺乏和不足是誘發(fā)腫瘤的主要原因[19]。臨床上PCR 技術逐漸廣泛應用于EB 病毒載量的檢測，感染EBV 導致細胞缺乏免疫功能而繼發(fā)淋巴瘤及惡性組織增生癥等重癥疾病。但也有研究發(fā)現(xiàn)兒童由于機體器官及免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未完善，導致免疫功能低下及尚未形成抗原特異性靶點等，更易引發(fā)免疫系統(tǒng)病變而導致噬血細胞綜合征等惡性疾病，因而EBV-DNA 拷貝數(shù)較高，這提示臨床上需要注意IM 的個體差異性[20]。

本研究的創(chuàng)新點在于系統(tǒng)分析了EBV-IM 患兒經(jīng)EB 病毒感染后機體免疫功能的變化，從本研究的數(shù)據(jù)可以得知隨著EBV-DNA 水平的升高，免疫細胞的免疫調節(jié)功能更加紊亂，機體也無法有效維持抗病毒的平衡，形成一種惡性循環(huán)而導致患兒臨床表現(xiàn)更加典型，因此EBV-DNA 的檢測可以考慮作為診斷IM 和判斷IM 治療效果的重要指標并在臨床范圍內(nèi)推廣應用。

綜上所述，EBV-IM 患兒T 細胞亞群紊亂，其中EBV-DNA 拷貝數(shù)與淋巴細胞有一定相關性。