練啟仙，劉健鋒，楊茂發(fā)，吳 廣，周小蕓，羅 亭

（1.貴州大學(xué)昆蟲(chóng)研究所，貴陽(yáng) 550025；2.興義民族師范學(xué)院生物與化學(xué)學(xué)院，貴州 興義 562400）

大青葉蟬（Cicadella viridis）分布范圍較廣，該害蟲(chóng)可為害禾谷類和果蔬等160多種植物，越冬卵于4月孵化，在雜草、農(nóng)作物及蔬菜上為害，至9、10月，則集中于秋菜、冬麥等綠色植物上為害，10月中旬成蟲(chóng)陸續(xù)轉(zhuǎn)移到果樹(shù)、林木上為害并產(chǎn)卵于枝條內(nèi)，以卵越冬［1，2］；大青葉蟬主要是以成蟲(chóng)和若蟲(chóng)為害葉片和莖稈，刺吸汁液，造成退色、畸形、卷縮，甚至全葉枯死［3］，同時(shí)大青葉蟬在為害時(shí)還可傳播病毒?。?，5］，是果樹(shù)及林木的大敵。

轉(zhuǎn)氨酶普遍存在于生物體中，催化氨基酸和酮酸之間氨基的轉(zhuǎn)移。較常見(jiàn)的轉(zhuǎn)氨酶有谷氨酰胺合成酶（GS）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）。GS是一種普遍存在的參與細(xì)胞多種活動(dòng)的酶，首先與谷氨酸合成酶協(xié)同作用參與機(jī)體內(nèi)氮循環(huán)，其次參與神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸鹽的再循環(huán)，并參與谷氨酸的合成，為合成氨基酸和糖類（6-磷酸葡萄糖）提供原料［6，7］；ALT是依賴5′-磷酸吡哆醛的酶，催化可逆反應(yīng)，將丙氨酸的氨基轉(zhuǎn)移給α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸［8］；AST在物質(zhì)代謝中起到重要的作用，催化天門冬氨酸和α-酮戊二酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)生成草酰乙酸和谷氨酸［9］。當(dāng)環(huán)境發(fā)生改變時(shí)，昆蟲(chóng)體內(nèi)的酶活性就會(huì)發(fā)生改變，從而適應(yīng)多變的外界環(huán)境和抵御外源物質(zhì)。

目前對(duì)昆蟲(chóng)體內(nèi)酶活性影響的研究多施用殺蟲(chóng)劑，而施用抗生素還很少。同時(shí)，昆蟲(chóng)體內(nèi)普遍存在共生菌，內(nèi)共生菌不僅可調(diào)節(jié)宿主的營(yíng)養(yǎng)代謝［10］、影響生長(zhǎng)發(fā)育［11］、使雄蟲(chóng)雌性化［12］以及殺雄作用［13］等，還可以降解農(nóng)藥和增強(qiáng)宿主的抗藥性［14，15］以及提高昆蟲(chóng)對(duì)外源物質(zhì)的解毒能力［16］。據(jù)報(bào)道，低劑量的抗生素對(duì)寄主昆蟲(chóng)無(wú)直接的影響，但可以減少昆蟲(chóng)體內(nèi)的內(nèi)共生菌［17-20］。為此，本研究探討鹽酸土霉素對(duì)大青葉蟬轉(zhuǎn)氨酶（GS、ALT、AST）活性的影響，從而為研究害蟲(chóng)綜合防治措施奠定一定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試蟲(chóng)源

大青葉蟬發(fā)生期，采集大青葉蟬雌雄成蟲(chóng)，并利用水稻苗進(jìn)行飼養(yǎng)直至產(chǎn)卵，孵化為若蟲(chóng)，然后把若蟲(chóng)于水稻苗上飼養(yǎng)，備用。

1.2 鹽酸土霉素的處理

鹽酸土霉素的處理參考Narita等［21］、Zhang等［22］的方法并進(jìn)行適當(dāng)改進(jìn)。把20頭大青葉蟬1日齡若蟲(chóng)接到含0.05%鹽酸土霉素的全純飼料的裝置中喂養(yǎng)12 h，然后轉(zhuǎn)接到噴灑了12 h的鹽酸土霉素（0.1%）的水稻苗上繼續(xù)飼養(yǎng)，以不加鹽酸土霉素為對(duì)照，重復(fù)3次。處理后5、15 d及成蟲(chóng)（雄蟲(chóng)、雌蟲(chóng)）期收集其樣品，置于-80℃冰箱中保存，用于轉(zhuǎn)氨酶活性的檢測(cè)。

1.3 鹽酸土霉素對(duì)大青葉蟬體內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷氨酰胺合成酶的活性，其方法按照酶活性試劑盒（南京建成生物公司）的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)處理使用Excel 2013和SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，差異顯著性用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，并用Origin 9.0軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 鹽酸土霉素對(duì)大青葉蟬體內(nèi)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

用鹽酸土霉素處理大青葉蟬1日齡若蟲(chóng)，處理后5、15 d，與對(duì)照相比，谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性顯著上升；至成蟲(chóng)期，雌蟲(chóng)中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性變化不明顯，但雄蟲(chóng)中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性顯著降低（圖1）。

圖1 鹽酸土霉素對(duì)大青葉蟬體內(nèi)谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

2.2 鹽酸土霉素對(duì)大青葉蟬體內(nèi)谷草轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

從圖2可以看出，用鹽酸土霉素處理后，與對(duì)照相比，大青葉蟬體內(nèi)谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性發(fā)生了顯著變化，處理后5 d，其活性顯著上升；處理后15 d和成蟲(chóng)期，谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性又顯著下降。

圖2 鹽酸土霉素對(duì)大青葉蟬體內(nèi)谷草轉(zhuǎn)氨酶活性的影響

2.3 鹽酸土霉素對(duì)大青葉蟬體內(nèi)谷氨酰胺合成酶活性的影響

用鹽酸土霉素處理后，與對(duì)照相比，大青葉蟬體內(nèi)的谷氨酰胺合成酶的活性發(fā)生了顯著或極顯著變化，處理后5 d，谷氨酰胺合成酶活性顯著上升；處理后15 d，其活性又顯著下降；至成蟲(chóng)期，雌蟲(chóng)的谷氨酰胺合成酶活性顯著下降，雄蟲(chóng)谷氨酰胺合成酶活性極顯著下降（圖3）。

圖3 鹽酸土霉素對(duì)大青葉蟬體內(nèi)谷氨酰胺合成酶活性的影響

3 小結(jié)與討論

轉(zhuǎn)氨酶是昆蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的一種重要酶類，殺蟲(chóng)劑等因素常常會(huì)影響酶的活性。本研究中，用鹽酸土霉素處理大青葉蟬1日齡若蟲(chóng)，其體內(nèi)的3種轉(zhuǎn)氨酶（谷氨酰胺合成酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶）活性發(fā)生了變化，與對(duì)照相比，處理后5 d，3種轉(zhuǎn)氨酶的活性均顯著升高，處理后15 d，谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性增強(qiáng)，谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷氨酰胺合成酶的活性降低，至成蟲(chóng)期，3種轉(zhuǎn)氨酶的活性均下降。呂艷艷等［23］用甲氧蟲(chóng)酰肼處理蠶，谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性發(fā)生了變化；家蠶體內(nèi)注射細(xì)胞毒性藥物，其家蠶幼蟲(chóng)中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性增強(qiáng)［24］；果蠅在25℃條件下生活比在15℃生活時(shí)的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性低［25］；用富含L-丙氨酸和L-天門冬氨酸而無(wú)糖的人工飼料喂養(yǎng)果蠅幼蟲(chóng)其體內(nèi)的谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性增強(qiáng)［26］；亢菊俠等［27］用利福平處理麥長(zhǎng)管蚜，其內(nèi)共生菌減少，谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性降低（與本研究結(jié)果一致），而谷氨酰胺合成酶的活性增強(qiáng)。

轉(zhuǎn)氨酶主要參與氨基酸的分解和合成［28］。經(jīng)研究，用鹽酸土霉素處理大青葉蟬的1日齡若蟲(chóng)，體內(nèi)共生菌含量減少，總氨基酸的含量減少，必需氨基酸的含量增加，非必需氨基酸的含量減少，雌蟲(chóng)中谷氨酸的含量顯著增加［20］，同時(shí)轉(zhuǎn)氨酶的活性發(fā)生了變化，由此說(shuō)明經(jīng)鹽酸土霉素處理后，大青葉蟬體內(nèi)氨基酸之間的轉(zhuǎn)換受到了干擾。據(jù)報(bào)道，內(nèi)共生菌可合成氨基酸，從而為宿主提供必需氨基酸，保證宿主的營(yíng)養(yǎng)平衡［29-31］，同時(shí)內(nèi)共生菌也影響宿主的生長(zhǎng)發(fā)育［32］，具有降解農(nóng)藥［33］的作用；目前昆蟲(chóng)體內(nèi)共生菌可用于害蟲(chóng)防治以及降低昆蟲(chóng)傳播病毒的能力，如在田間大量釋放不親和的淡色庫(kù)蚊雄蟲(chóng)，與自然界中雌蟲(chóng)交配后所產(chǎn)生的卵不能夠正常孵化，從而有效控制淡色庫(kù)蚊的種群［34］，用抗生素處理桃蚜后，降低了桃蚜對(duì)馬鈴薯卷葉病毒（PLAV）的傳播能力［35］。

綜上所述，鹽酸土霉素減少了昆蟲(chóng)體內(nèi)的共生菌，同時(shí)也使昆蟲(chóng)的轉(zhuǎn)氨酶發(fā)生了變化，因此，該研究結(jié)果可為大青葉蟬以及其他農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)采取綜合防治措施提供理論依據(jù)。