聶延君，張乃斌，吳 敏，陳 真，徐玉文*

（1. 山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院 仿制藥研究與評價重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 山東省仿制藥一致性評價工程技術(shù)研究中心，山東 濟(jì)南 250101；2. 山東省公共衛(wèi)生臨床中心，山東 濟(jì)南 250000）

吡拉西坦屬于γ-氨基丁酸（GABA）的環(huán)形衍生物，為腦代謝改善藥，可用于多種原因所致的記憶減退及輕、中度腦功能障礙，也用于兒童智能發(fā)育遲緩[1-5]。吡拉西坦片收載于《中國藥典》2020年版二部，國外藥典未收載該品種，日本橙皮書和FDA溶出曲線數(shù)據(jù)庫也均未收載吡拉西坦溶出度測定相關(guān)信息和方法?！吨袊幍洹番F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中未收載溶出度檢查，無法準(zhǔn)確反映藥物體外溶出情況。吡拉西坦原料藥在水中易溶，溶解度約為519.4 mg/ml（37 ℃），在不同pH溶液中的溶解度相差不大。本研究通過考察不同溶出方法、溶出介質(zhì)、轉(zhuǎn)速和取樣時間點(diǎn)等條件，建立了吡拉西坦片的溶出度測定方法，并對6家企業(yè)樣品的溶出度及溶出曲線等進(jìn)行了比較。本文建立的方法具有較好的區(qū)分力，為吡拉西坦片質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)提高提供了重要依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）；自動溶出儀（瑞士SOTAX公司）；CP225D電子天平（德國Sartorius公司）；真空脫氣儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）。

1.2 試藥

吡拉西坦片分別由A～F 6家企業(yè)提供；吡拉西坦原料藥（江西躍華藥業(yè)有限公司，批號：20180951）；吡拉西坦對照品（中國食品藥品檢驗(yàn)研究院，批號：100386-201703，含量：100.0 %）；乙腈為色譜純，鹽酸、冰醋酸、醋酸鈉、磷酸氫二鉀、氫氧化鈉等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 對照品溶液制備 精密稱取吡拉西坦對照品適量，加水溶解并制成0.12 mg/ml的溶液，作為對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制備 取溶出液，濾過，精密量取續(xù)濾液適量，加水稀釋，制成每1 ml中約含吡拉西坦0.12 mg的溶液，作為供試品溶液

2.2 溶出量測定[6]

采用高效液相色譜法（HPLC），色譜柱為C18，流動相為0.1 %磷酸氫二鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至6.0±0.05）-乙腈（95:5）；檢測波長為205 nm，流速為1.0 ml/min。精密量取供試品和對照品溶液各20 μl注入色譜儀，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算吡拉西坦溶出量，即得。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 線性關(guān)系 精密稱取吡拉西坦對照品50.15 mg，置50 ml量瓶中，加乙腈-水（5:95）溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液（1 mg/ml）。分別精密量取適量，用乙腈-水（5:95）稀釋制成每1 ml含吡拉西坦0.02，0.06，0.09，0.12，0.15，0.18 mg的溶液，作為線性溶液。分別精密量取20 μl，進(jìn)樣，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性擬合。結(jié)果，吡拉西坦在0.02～0.18 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程：y=40 439x+209 742，相關(guān)系數(shù)（r）為0.9993。

2.3.2 準(zhǔn)確度 按處方量稱取空白輔料適量，加乙腈-水（5:95）溶解并過濾，取續(xù)濾液作為空白輔料溶液。分別稱取吡拉西坦對照品適量，用空白輔料溶液稀釋，分別制成每1 ml含吡拉西坦0.06，0.12，0.18 mg的溶液，每個濃度配制3份，精密量取20 μl，進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果回收率平均值為100.1 %。說明此方法中吡拉西坦的回收率良好。結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取0.12 mg/ml的吡拉西坦對照品溶液，分別于0，2，4，6，8 h進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果，吡拉西坦在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。結(jié)果見表2。

表2 穩(wěn)定性結(jié)果

2.3.4 濾膜吸附試驗(yàn) 分別采用離心和濾膜過濾兩種方式處理供試品溶液，結(jié)果兩種方法溶液峰面積相差不大，濾膜對峰面積影響較小，因此采用濾膜過濾處理供試品溶液。結(jié)果見表3。

表3 供試品溶液經(jīng)離心和過濾處理后峰面積

2.4 溶出度測定方法的建立

2.4.1 pH值-溶解度曲線 取9支具塞試管，分別精密加入pH 1.0鹽酸溶液，pH 2.0鹽酸溶液，pH 4.0醋酸鹽緩沖溶液，pH 5.5醋酸鹽緩沖溶液，pH 6.0磷酸鹽緩沖液，pH 6.8磷酸鹽緩沖液，pH 7.4磷酸鹽緩沖液，pH 8.0磷酸鹽緩沖液各5 ml，分別加入過量吡拉西坦原料藥，制成飽和溶液，置37 ℃水浴中振蕩過夜[7]，按2.2項(xiàng)下色譜條件測定溶解度并繪制吡拉西坦pH值-溶解度曲線。取純化水作為溶出介質(zhì)同法操作，計(jì)算吡拉西坦在水中的溶解度。結(jié)果表明，吡拉西坦原料在水中的溶解度為519.4 mg/ml，在pH 1.0～8.0溶出介質(zhì)中，溶解度分布在503.4～568.7 mg/ml之間，受pH影響較小，略成S形分布，整體相差不大。吡拉西坦片規(guī)格有0.4 g和0.2 g兩種，以900 ml作為溶出介質(zhì)體積，均能滿足漏槽條件。結(jié)果見表4。

表4 吡拉西坦在不同pH條件下的溶解度（37 ℃）

2.4.2 溶出度測定方法選擇 取A、B、C企業(yè)樣品各一批，以水900 ml為溶出介質(zhì)，分別采用籃法和槳法，轉(zhuǎn)速為50 r/min。結(jié)果本品在兩種溶出裝置中測得的結(jié)果基本一致。籃法和槳法作為口服固體制劑最常用的兩種方法[8]，各國藥典均有收載，其中片劑溶出度的首選方法為槳法，本著通用性強(qiáng)、耐用性好、廣泛普及的原則[5]，本品選用采用槳法作為溶出方法。結(jié)果見表5。

表5 溶出度測定方法比較

2.4.3 轉(zhuǎn)速選擇[9]取A～C 3家企業(yè)樣品，考察在50 r/min和75 r/min兩種轉(zhuǎn)速條件下的溶出曲線差異。結(jié)果在75 r/min轉(zhuǎn)速條件下，3家樣品溶出速率較快，30 min時達(dá)到平臺期。轉(zhuǎn)速調(diào)整為50 r/min時，溶出速率減緩，各企業(yè)樣品30 min的溶出度有較大區(qū)別，B企業(yè)樣品溶出明顯減緩，呈現(xiàn)出較大區(qū)分力，因此轉(zhuǎn)速擬定為50 r/min。結(jié)果見表6。

表6 兩種轉(zhuǎn)速下的溶出量比較

2.4.4 溶出介質(zhì)的選擇 分別選取0.1 mol/L HCl、pH 4.0 醋酸鹽緩沖液、pH 6.8 磷酸鹽緩沖液和水4種溶出介質(zhì)，比較同一企業(yè)樣品在4種不同介質(zhì)中的溶出行為差異。結(jié)果表明樣品在4種溶出介質(zhì)中15 min的溶出量均可達(dá)85 %以上，20 min后達(dá)平臺期，4條溶出曲線基本一致。雖然水在不同地區(qū)的pH可能略有不同[6]，但根據(jù)吡拉西坦pH值-溶解度曲線，pH對吡拉西坦的溶解度影響較小，本著環(huán)保經(jīng)濟(jì)、易操作的原則，選取水作溶出介質(zhì)。另外比較多家企業(yè)溶出曲線發(fā)現(xiàn)，以水為溶出介質(zhì)，仍具有很好的區(qū)分力，能滿足質(zhì)量控制的要求[10]。見表7。

表7 4種溶出介質(zhì)的溶出結(jié)果比較

綜上，吡拉西坦片溶出度測定方法為：以水900 ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r/min，依法[6]操作，經(jīng)30 min時取溶出液，按2.1.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1.1項(xiàng)下方法制備對照品溶液，按2.2項(xiàng)下方法進(jìn)樣測定。

2.5 溶出曲線的測定

取A～F 6家企業(yè)樣品，依法操作，取樣時間點(diǎn)調(diào)整為5，10，15，20，30，45 min，分別取溶液10 ml，濾過，同時補(bǔ)液；分別精密量取供試品溶液和對照品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算溶出量。以時間為橫坐標(biāo)，累積溶出量為縱坐標(biāo)，繪制溶出曲線。結(jié)果見表8。結(jié)果顯示，15 min時A、E企業(yè)樣品的溶出量大于85 %，30 min時僅D企業(yè)樣品溶出量不足85 %，該企業(yè)樣品在45 min時溶出量仍低于85 %。根據(jù)溶出曲線結(jié)果，將吡拉西坦片溶出度限度設(shè)定為30 min時溶出量不低于標(biāo)示量的85 %。

表8 6家企業(yè)樣品溶出曲線

2.6 6家企業(yè)樣品考察

按已確定方法測定A～F 6家企業(yè)樣品的溶出度，結(jié)果，B和D兩家企業(yè)樣品溶出度不合格，其中D企業(yè)樣品溶出緩慢，且溶出量較低，說明該企業(yè)制備工藝或處方存在一定問題，見表9。

表9 溶出度測定結(jié)果

3 討論

吡拉西坦片現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中未設(shè)定溶出度檢查，無法客觀反映樣品的體外溶出情況。對于固體制劑，體外溶出試驗(yàn)應(yīng)盡可能反映其在體內(nèi)的釋放和吸收情況，因此應(yīng)選擇合適的、具有較強(qiáng)區(qū)分能力的溶出介質(zhì)[11-12]。本文考察不同溶出方法、轉(zhuǎn)速、溶出介質(zhì)和取樣時間點(diǎn)等，確定了吡拉西坦片溶出度測定方法。該方法具有較好的區(qū)分力，6家企業(yè)樣品中有2家樣品溶出度低于擬定限度（85 %），其中一家企業(yè)的平均溶出度僅為55 %，整體溶出度較差，反映出該企業(yè)在制劑處方或制備過程中存在一定問題，因此，增訂溶出度檢查項(xiàng)十分必要，同時也可為企業(yè)篩選處方，改進(jìn)工藝提供依據(jù)。