李敏茹，孔 意，張 曦，趙夢(mèng)詩(shī)，孫敬勇*

（1. 山東第一醫(yī)科大學(xué)（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院） 藥物研究所，山東 濟(jì)南 250024；2. 濟(jì)南明鑫制藥股份有限公司，山東 濟(jì)南 250216）

番石榴葉是桃金娘科（Myrtaceae Juss.）番石榴屬（Psidium L.）植物番石榴（Psidium guajava Linn.）的葉，原產(chǎn)于美洲熱帶地區(qū)，約17世紀(jì)末傳入中國(guó)[1]。番石榴葉和果均可入藥，在《嶺南草藥志》、《福建藥物志》和《臺(tái)灣藥用植物志》中均有記載，民間常用于清熱解毒、生津止渴、燥濕健脾、澀腸止瀉?，F(xiàn)代藥理研究表明其具有明顯的降血糖、降血壓、止瀉、抗氧化、抗菌、抗病毒及抗腫瘤等活性[2-5]。

為進(jìn)一步研究藥物有效成分，對(duì)番石榴葉進(jìn)行了提取和分離純化，得到9個(gè)化合物，根據(jù)化合物的波譜數(shù)據(jù)，鑒定這9個(gè)化合物分別為熊果酸（1）、山楂酸（2）、科羅索酸（3）、槲皮素（4）、金絲桃苷（5）、槲皮素-3-O-α-D-阿拉伯呋喃糖苷（6）、globulol（7）、α-cadinol（8）和δ-cadinol（9）。其中化合物6為首次從番石榴屬植物中分離得到。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AV-400型核磁共振儀，AV-600型核磁共振儀（瑞士Bruker公司）；Apex Ⅱ型高分辨質(zhì)譜儀（美國(guó)Bruker公司）；Ulti Mate 3000型高效液相色譜分析儀（賽默飛世爾科技有限公司）；Trap VL型質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent公司）；Shimadzu LC-20AD型制備型高效液相色譜儀（日本島津公司）；YMC-Pack ODS-A型液相色譜柱（日本YMC公司）；LH-20凝膠（瑞典Pharmacia LKB公司）。

1.2 試藥

柱色譜硅膠（青島海洋化工有限公司）；薄層色譜硅膠（青島海洋化工有限公司）；色譜甲醇，色譜乙腈（美國(guó)Tedia公司）；二氯甲烷，甲醇，乙酸乙酯，正丁醇，無(wú)水乙醇，石油醚，乙腈（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）。

2 提取分離

取干燥番石榴葉（5 kg），室溫下用75 %乙醇（150 L）浸泡提取3次，3次提取液分別濃縮后合并。依次用石油醚（6 L）、二氯甲烷（6 L）、乙酸乙酯（6 L）、正丁醇（6 L）分別萃取3次，分別得到石油醚部位（62.1 g），二氯甲烷部位（71.4 g），乙酸乙酯部位（60 g），正丁醇部位（33.3 g）。取石油醚部位和二氯甲烷部位，經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)洗脫）、凝膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)洗脫）、ODS柱色譜（甲醇-水系統(tǒng)洗脫）、制備HPLC（甲醇-水系統(tǒng)洗脫）進(jìn)行分離純化，得到化合物1～9。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

圖1 番石榴葉提取化合物結(jié)構(gòu)

化合物1：白色無(wú)定型粉末，ESI-MS（m/z）：479.2[M+Na]+；1H NMR（600 MHz，C5D5N）δH：0.91（3H，s，H-25），0.93（3H，s，H-24），0.97（3H，d，J=5.52，H-30），1.03（3H，s，H-26），1.07（3H，d，J=6.00，H-29），1.26（3H，s，H-23），1.27（3H，s，H-27），2.15（1H，d，J=8.28，H-18），3.47（1H，d，J=4.92，H-3），5.51（1H，m，H-12）；13C NMR（150 MHz，C5D5N）δC：39.4（C-1），28.8（C-2），78.2（C-3），39.5（C-4），55.9（C-5），18.8（C-6），33.7（C-7），39.2（C-8），48.1（C-9），37.4（C-10），23.7（C-11），125.7（C-12），139.3（C-13），42.6（C-14），28.2（C-15），25.0（C-16），48.1（C-17），53.6（C-18），39.5（C-19），40.0（C-20），31.1（C-21），37.5（C-22），28.8（C-23），17.5（C-24），15.7（C-25），16.6（C-26），23.9（C-27），179.8（C-28），17.5（C-29），21.4（C-30）。化合物1的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道一致，鑒定為熊果酸。

化合物2：白色無(wú)定型粉末，ESI-MS（m/z）：495.5 [M+Na]+；1H NMR（600 MHz，C5D5N）δH：0.96（3H，s，H-29），1.00（3H，s，H-25），1.01（3H，s，H-30），1.03（3H，s，H-26），1.08（3H，s，H-24），1.22（3H，s，H-23），1.28（3H，s，H-27），3.31（1H，d，J=13.38，H-18），3.40（1H，d，J=9.24，H-3），4.09（1H，ddd，H-2），5.48（1H，m，H-12）；13C NMR（150 MHz，C5D5N）δC：47.8（C-1），68.6（C-2），83.9（C-3），39.8（C-4），56.0（C-5），18.9（C-6），33.2（C-7），39.9（C-8），48.2（C-9），38.6（C-10），24.0（C-11），122.5（C-12），144.9（C-13），42.0（C-14），28.3（C-15），23.8（C-16），46.7（C-17），42.3（C-18），46.5（C-19），31.0（C-20），34.3（C-21），33.2（C-22），29.3（C-23），16.9（C-24），17.5（C-25），17.6（C-26），26.2（C-27），180.1（C-28），33.2（C-29），23.7（C-30）。化合物2的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道一致，鑒定為山楂酸。

化合物3：白色無(wú)定型粉末，ESI-MS（m/z）：495.5 [M+Na]+；1H NMR（600 MHz，C5D5N）δH：0.96（3H，s，H-25），0.99（3H，d，J=2.7，H-30），1.02（3H，d，J=2.82，H-29），1.05（3H，s，H-26），1.08（3H，s，H-24），1.22（3H，s，H-27），1.28（3H，s，H-23），2.62（1H，d，J=9.6，H-18），3.39（1H，d，J=4.02，H-3），4.09（1H，ddd，H-2），5.47（1H，m，H-12）；13C NMR（150 MHz，C5D5N）δC：48.0（C-1），68.6（C-2），83.9（C-3），39.8（C-4），56.0（C-5），18.9（C-6），33.6（C-7），40.1（C-8），48.1（C-9），38.5（C-10），23.8（C-11），125.6（C-12），139.3（C-13），42.6（C-14），28.7（C-15），24.9（C-16），48.1（C-17），53.6（C-18），39.5（C-19），39.4（C-20），31.1（C-21），37.4（C-22），29.4（C-23），17.7（C-24），17.0（C-25），17.5（C-26），23.9（C-27），179.8（C-28），17.5（C-29），21.4（C-30）?；衔?的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道一致，鑒定為科羅索酸。

化合物4：黃色粉末，ESI-MS（m/z）：303.2[M+H]+；1H NMR（600 MHz，DMSO-d6）δH：12.48（1H，s，5-OH），7.67（1H，d，J=2.22，H-2’），7.53（1H，dd，J=2.16，2.22，H-6’），6.88（1H，d，J=8.46，H-5’），6.41（1H，d，J=1.98，H-8），6.19（1H，d，J=1.98，H-6）；13C NMR（150 MHz，DMSO-d6）δC：148.19（C-2），136.18（C-3），176.32（C-4），161.21（C-5），98.66（C-6），164.38（C-7），93.82（C-8），156.64（C-9），103.50（C-10），122.46（C-1’），115.59（C-2’），147.32（C-3’），145.54（C-4’），116.09（C-5’），120.46（C-6’）?；衔?的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9-10]報(bào)道一致，鑒定為槲皮素。

化合物5：黃色粉末，ESI-MS（m/z）：465.3[M+H]+；1H NMR（600 MHz，DMSO-d6）δH：12.64（1H，s，5-OH），7.68（1H，dd，J=1.98，8.4，H-6’），7.54（1H，d，J=1.92，H-2’），6.82（1H，d，J=8.52，H-5’），6.41（1H，d，J=1.92，H-6），6.21（1H，d，J=1.86，H-8），5.38（1H，d，J=7.68，H-1’’）；13C NMR（150 MHz，DMSO-d6）δC：156.77（C-2），134.04（C-3），177.99（C-4），161.73（C-5），99.15（C-6），164.60（C-7），93.98（C-8），156.8（C-9），104.44（C-10），121.63（C-1’），115.68（C-2’），145.30（C-3’），148.94（C-4’），116.50（C-5’），112.46（C-6’），102.41（C-1’’）,71.73（C-2’’），73.73（C-3’’），68.43（C-4’’），76.33（C-5’’），60.64（C-6’’）?；衔?的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，鑒定為金絲桃苷。

化合物6：黃色粉末，ESI-MS（m/z）：435.3[M+H]+；1H NMR（600 MHz，DMSO-d6）δH：7.56（1H，dd，J=2.16，8.46，H-6’），7.48（1H，d，J=2.16，H-2’），6.85（1H，d，J=8.4，H-5’），6.39（1H，d，J=1.32，H-8），6.18（1H，d，J=1.5，H-6），5.59（1H，d，J=1.08，H-1’’）；13C NMR（150 MHz，DMSO-d6）δC：156.34（C-2），133.19（C-3），177.46（C-4），161.09（C-5），98.82（C-6），165.17（C-7），93.57（C-8），156.58（C-9），103.50（C-10），120.78（C-1’），115.46（C-2’），145.07（C-3’），148.56（C-4’），115.37（C-5’），121.49（C-6’），107.77（C-1’’），81.98（C-2’’），76.95（C-3’’），85.88（C-4’’），60.67（C-5’’）?；衔?的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，鑒定為槲皮素-3-O-α-D-呋喃阿拉伯糖苷。

化合物7：白色粉末，ESI-MS（m/z）：223.1 [M+H]+；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δH：0.92（3H，m，H-12），0.98（3H，d，J=2.64，H-15），1.01（3H，d，J=2.64，H-14），1.10（3H，d，J=2.76，H-13），1.90（1H，m，H-8），2.01（1H，m，H-11）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δC：39.69（C-1），28.46（C-2），19.36（C-3），26.84（C-4），20.24（C-5），44.67（C-6），75.23（C-7），57.12（C-8），26.22（C-8），26.22（C-9），34.66（C-10），36.39（C-11），16.06（C-12），16.06（C-13），28.69（C-14），15.81（C-15）。化合物7的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致，鑒定為globulol。

化合物8：白色粉末，ESI-MS（m/z）：223.1[M+H]+；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δH：0.76（3H，d，J=6.96，H-12），0.92（3H，d，J=6.96，H-13），1.10（3H，s，H-14），1.67（3H，s，H-15），5.50（1H，s，H-6）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δC：72.55（C-1），42.26（C-2），22.02（C-3），46.78（C-4），39.92（C-5），122.38（C-6），134.96（C-7），31.18（C-8），22.71（C-9），50.08（C-10），26.03（C-11），15.16（C-12），21.68（C-13），23.83（C-14），20.79（C-15）。化合物8的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道一致，鑒定為α-cadinol。

化合物9：白色粉末，ESI-MS（m/z）：223.1[M+H]+；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δH：0.81（3H，d，J=6.96，H-12），0.88（3H，d，J=6.96，H-13），1.29（3H，s，H-14）,1.66（3H，s，H-15），5.52（1H，s，H-6）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δC：72.45（C-1），35.39（C-2），21.53（C-3），44.17（C-4），36.85（C-5），124.66（C-6），134.37（C-7），30.98（C-8），18.57（C-9），45.62（C-10），26.48（C-11），15.37（C-12），21.62（C-13），23.60（C-14），28.00（C-15）。化合物9的核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道一致，鑒定為δ-cadinol。