陳傳武，牛 英，付慧敏，劉冰浩，范七君，蔣海蘭

(廣西柑桔育種與栽培工程技術(shù)研究中心/廣西特色作物研究院，廣西桂林，541004)

“沃柑”是“坦普爾”桔橙和“丹西”紅桔的雜交種，屬高糖晚熟品種。近些年在我國多地引種栽培，表現(xiàn)出適應(yīng)性廣、抗逆性強(qiáng)、生長勢旺、早結(jié)豐產(chǎn)、果實(shí)外觀漂亮、品質(zhì)優(yōu)良、果實(shí)采收期長等優(yōu)點(diǎn)。在生產(chǎn)中，“沃柑”單獨(dú)成片種植時單果種子數(shù)達(dá)10多粒，與花粉正常的其他柑桔品種混栽時單果種子數(shù)可達(dá)20粒?！盁o核沃柑”是通過輻射育種方法從“沃柑”育出的新品種，保留了“沃柑”的優(yōu)良特性，單果種子數(shù)量減少至1～3粒，甚至無籽[1]。近幾年，廣西多地引種了“無核沃柑”，栽培過程中發(fā)現(xiàn)其果實(shí)品質(zhì)優(yōu)、口感佳、鮮果采摘上市期長，值得試種，但存在?；ū９y的問題。種子生長發(fā)育過程中產(chǎn)生的激素對著果和果實(shí)發(fā)育有重要影響，與有核品種相比，無核品種由于沒有種子，果實(shí)發(fā)育期間抵御異常天氣等影響因素的能力往往不如有核品種，因而無核變異的產(chǎn)量一般低于有核品種[2]。造成柑桔無核的原因主要分為以下幾個方面：雄性不育、雌性不育、自交異交不親和、胚胎敗育等[2-3]。本研究以“沃柑”“無核沃柑”為材料，從花藥發(fā)育、異交親和性、胚胎發(fā)育等3個方面觀察比較兩者的生殖發(fā)育特點(diǎn)和差異，探討“無核沃柑”的無核成因，為生產(chǎn)上保花保果技術(shù)的開發(fā)應(yīng)用提供理論支持，為進(jìn)一步探索柑桔無核成因的分子機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 花藥發(fā)育動態(tài)觀察

花藥發(fā)育動態(tài)觀測：以5～6年生“沃柑”“無核沃柑”為材料，從花蕾露白至開花，每隔2 d采集一次花蕾，以橫徑相差0.5 mm進(jìn)行分組，每個等級取5個樣(花蕾)。橫徑小于5 mm的花蕾，進(jìn)行整蕾冷凍切片；橫徑大于5 mm的花蕾，剝?nèi)』ㄋ庍M(jìn)行冷凍切片。對切片進(jìn)行熒光顯微觀察[4]。

每藥花粉粒數(shù)量統(tǒng)計：取待開放花蕾20枚，每個花蕾取1枚花藥放入2 mL離心管中，共計20枚。加入200 μL蒸餾水，用玻棒碾碎花藥，再加入800 μL 0.5% 吐溫20溶液，充分振蕩，使花粉粒均勻分布于溶液中。用10 μL移液槍吸取2 μL花粉粒懸浮液滴于載玻片上，10×顯微鏡下觀察，統(tǒng)計2 μL懸浮液中的花粉粒數(shù)，重復(fù)3次。按下列公式計算每枚花藥的花粉量：每枚花藥花粉量(粒/花藥)=(每2 μL花粉粒懸浮液中的花粉粒數(shù)×500)/20。

1.2 異交親和性觀察

開花期對“沃柑”“無核沃柑”進(jìn)行自然授粉(因自身花粉粒極少，未進(jìn)行自交授粉；果園附近種植有金秋砂糖桔)及分別以“桂橙1號”“琯溪蜜柚”“北京檸檬”為父本人工異花授粉。授粉后7 d和14 d每個處理各取雌蕊10個，F(xiàn)AA固定液固定，苯胺藍(lán)染色法觀察花粉管生長情況。具體步聚：(1)將固定保存的雌蕊，用梯度酒精浸洗(70%、50%、30%、蒸餾水，每級15 min)；(2)將雌蕊縱切或橫切成若干薄片，置于10%亞硫酸鈉溶液(采用無水亞硫酸鈉配制)中沸水浴10～20 min；(3)沸水浴后，吸除表面溶液，用蒸餾水浸洗一遍；(4)加入適量0.1%水溶性苯胺藍(lán)染色液浸染20 min以上；(5)用吸管和鑷子轉(zhuǎn)移材料至載玻片上，蓋上蓋玻片適當(dāng)壓展后進(jìn)行熒光顯微觀察。成熟期采收果實(shí)，統(tǒng)計每果種子數(shù)。0.1%苯胺藍(lán)染液配制方法：稱取苯胺藍(lán)0.1 g溶于100 mL 0.1 mol/L K3PO4溶液中，裝入棕色試劑瓶避光冷藏。

1.3 種子發(fā)育動態(tài)觀察

開花期用“琯溪蜜柚”做父本，分別對“沃柑”“無核沃柑”進(jìn)行人工授粉。授粉后，每隔兩周，每個處理各取5個果實(shí)觀察種子發(fā)育動態(tài)。果實(shí)橫徑小于3 cm、種子較小時，切取帶種子的果實(shí)中柱進(jìn)行冷凍切片；果實(shí)橫徑大于3 cm、種子較大時，剝?nèi)》N子進(jìn)行冷凍切片。對切片進(jìn)行熒光顯微觀察[4]。

2 結(jié)果與分析

2.1 花藥發(fā)育動態(tài)觀察

“沃柑”“無核沃柑”的花朵形態(tài)相似：花瓣5片，花瓣長0.7～1.1 cm，花瓣寬0.5～0.6 cm；花絲分離，雄蕊13～18枚，花絲長0.43～0.77 cm，花藥長0.2 cm左右；花藥淺黃白色，短小，上窄下圓，不飽滿較扁平，花藥低于柱頭，露柱花較多；開花后花藥呈淡黃白色，部分花藥黃褐色干癟狀，花藥大多不能開裂或部分開裂，肉眼難以看到花粉粒。解剖鏡下，“沃柑”花藥稍飽滿，可見少量花粉粒；“無核沃柑”花藥更為干癟，開裂少，可見花粉粒更少(見圖1 A1—A2和B1—B2)?！氨本幟省被ㄋ?，形態(tài)飽滿，顏色金黃，成熟時正常開裂并散出大量花粉(見圖1 C1—C2)。

“沃柑”“無核沃柑”的每枚花藥平均花粉粒數(shù)量相當(dāng)，分別為1 062和1 000粒；每枚花藥有4個花粉囊，大多數(shù)外側(cè)的2個花粉囊較正常，但形態(tài)不飽滿、內(nèi)徑小、花粉粒少；內(nèi)側(cè)的2個花粉囊大多發(fā)育不良或不發(fā)育；由于花粉囊較小、不飽滿，藥室壁受擠壓程度輕，大蕾期中間層細(xì)胞仍留存，藥室壁較厚(見圖1 A3和B3)?！氨本幟省钡?個花粉囊內(nèi)徑大，為飽滿的圓形，且大小均勻，每枚花藥平均花粉粒數(shù)量達(dá)11 775粒；由于花粉囊較大飽滿，藥室壁受擠壓程度重，大蕾期中間層細(xì)胞已被擠壓破壞，僅留存表皮和內(nèi)壁，藥室壁較薄(見圖1 C3)。

“沃柑”“無核沃柑”的花藥發(fā)育動態(tài)較一致。當(dāng)花蕾橫徑為2.6～3.0 mm時，花藥的4個角隅隆起，花粉囊形態(tài)可見，外側(cè)兩個花粉囊發(fā)育較正常，內(nèi)側(cè)兩個花粉囊較小或不發(fā)育；藥室壁未發(fā)育完全，與花粉囊間組織形態(tài)界限不分明(見圖2 A1和B1)。當(dāng)花蕾橫徑為3.6～4.0 mm時，花粉囊內(nèi)徑進(jìn)一步增大，花粉母細(xì)胞進(jìn)入減數(shù)分裂時期，整體呈團(tuán)塊狀黏連；藥室表皮層細(xì)胞和內(nèi)壁細(xì)胞形態(tài)逐漸分明(見圖2 A2和B3)。當(dāng)花蕾橫徑為4.6～5.0 mm時，四分體壁被胼胝質(zhì)酶溶解，花粉粒清晰可見，但挨擠成團(tuán)；藥室表皮層、內(nèi)壁層、2～3層中間層及絨氈層細(xì)胞形態(tài)分明(見圖2 A3和B3)。當(dāng)花蕾橫徑為5.6～6.0 mm時，花粉囊內(nèi)徑增至最大，花粉粒分散開來，藥室壁內(nèi)層和中間層細(xì)胞開始不均勻條狀加厚，進(jìn)入開花散粉時期(見圖2 A4和B4)。從花藥的發(fā)育動態(tài)看，“沃柑”“無核沃柑”的花藥都存在發(fā)育不良現(xiàn)象，主要表現(xiàn)為花粉囊發(fā)育不良或不發(fā)育，從而導(dǎo)致花粉囊中花粉粒數(shù)量少或無花粉粒產(chǎn)生。從花藥的外觀形態(tài)看，“沃柑”“無核沃柑”的花藥均屬于敗育型花藥[5]。

注：Ep-表皮；En-藥室內(nèi)壁；Ml-中間層；Ta-絨氈層；Ms-小孢子。A1—A3為“沃柑”花藥大蕾期(A1)、開花期(A2)外觀形態(tài)和大蕾期(A3)顯微形態(tài)；B1—B3為“無核沃柑”花藥大蕾期(B1)、開花期(B2)外觀形態(tài)和大蕾期(B3)顯微形態(tài)；C1—C3為“北京檸檬”花藥大蕾期(C1)、開花期(C2)外觀形態(tài)和大蕾期(C3)顯微形態(tài)。圖1 “沃柑”“無核沃柑”“北京檸檬”花藥外觀形態(tài)和顯微形態(tài)

2.2 異交親和性觀察

自然授粉時，“沃柑”“無核沃柑”柱頭上可見花粉粒極少。人工異花授粉時，“桂橙1號”“琯溪蜜柚”“北京檸檬”的花粉均能在“沃柑”“無核沃柑”柱頭上萌發(fā)，并經(jīng)花柱道進(jìn)入子房室(見圖3 A1和B1)，偶見花粉管伸入胚珠(見圖3 A2和B2)。

“沃柑”自然授粉及分別以“桂橙1號”“琯溪蜜柚”“北京檸檬”花粉進(jìn)行異花授粉后，每果種子數(shù)較多，分別為12.0、10.0、18.5和16.0粒(見圖3 A3)。“無核沃柑”自然授粉及分別以“桂橙1號”“琯溪蜜柚”“北京檸檬”花粉進(jìn)行異花授粉后，每果種子數(shù)較少，分別為0、1.0、1.5和0.5粒(見圖3 B3)。從異花授粉花粉管生長情況和果實(shí)結(jié)籽情況看，“無核沃柑”異花授粉后，花粉管可正常生長進(jìn)入子房室，其無核發(fā)生部位在胚珠，成因可能為雌性不育、受精受阻或胚胎敗育。

2.3 種子發(fā)育動態(tài)觀察

“沃柑”“無核沃柑”的子房形態(tài)相似，通常10室，每室2～6個胚珠，多為4個。異花(“琯溪蜜柚”花粉)授粉后2周，“沃柑”“無核沃柑”的胚珠大小無明顯差異，可見小的胚囊腔，部分胚珠的珠心細(xì)胞開始解體(見圖4 A1和B1)。授粉后4周，“沃柑”胚珠的大小分化明顯，較大胚珠的珠被、珠心進(jìn)一步發(fā)育(以下稱為正常胚珠)，較小胚珠則與2周左右時無明顯差異(見圖4 A2)；“無核沃柑”極少數(shù)胚珠進(jìn)一步發(fā)育長大，大部分胚珠的大小與授粉后2周無明顯差異，珠心細(xì)胞和內(nèi)珠被進(jìn)一步解體，在外珠被和胚囊間形成空腔(以下稱為異常胚珠)(見圖4 B2)。授粉后10周，“沃柑”正常胚珠進(jìn)一步發(fā)育，胚囊腔明顯長大，內(nèi)外珠被、珠心組織和胚囊組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)明晰(見圖4 A3)；“無核沃柑”異常胚珠的珠被、珠心和胚囊明顯解體、萎蔫(見圖4 B3)。授粉后12周，“沃柑”正常胚珠的胚囊腔直徑已達(dá)胚珠橫徑的1/3，且充滿游離胚乳核(見圖4 A4)，種子質(zhì)軟、種皮光滑(見圖4 C1-a)，未發(fā)現(xiàn)球形或心形胚(見圖4 C1-b)；“無核沃柑”異常胚珠完全萎蔫、皺縮，形成大小0.5 mm左右的微小癟子(見圖4 B4)。授粉后14周，“沃柑”正常發(fā)育種子的種皮表面出現(xiàn)明顯的棱紋，質(zhì)地變硬(見圖4 C2-a)；胚囊占據(jù)整個珠心，珠心細(xì)胞被壓擠成薄層，合子胚大多發(fā)育成球形、心形或較小的子葉胚(見圖4 A5和C2-b)。授粉后16周，“沃柑”的合子胚迅速發(fā)育成大小不等、質(zhì)地較軟、晶瑩剔透的子葉胚(見圖4 A6、C3-a和C3-b)。授粉后20周，“沃柑”較大的子葉胚已長滿整個胚囊，質(zhì)地變硬(見圖4 C4-a和 C4-b)。授粉后20周，“沃柑”的敗育種子大小不一，大的癟子長寬與正常種子相當(dāng)，小的癟子與授粉后兩周時的胚珠大小相當(dāng)(見圖4 C5-a)；“無核沃柑”的敗育種子普遍較小，大部分肉眼幾乎不可見(見圖4 C5-b)。

注：A1—A4“沃柑”花蕾直徑分別為2.6～3.0、3.6～4.0、4.6～5.0、5.6～6.0 mm時花藥顯微形態(tài)；B1—B4“無核沃柑”花蕾直徑分別為2.6～3.0、3.6～4.0、4.6～5.0、5.6～6.0 mm時花藥顯微形態(tài)。圖2 “沃柑”“無核沃柑”花藥發(fā)育動態(tài)

注：A1.“北京檸檬”花粉管進(jìn)入沃柑子房室；A2.“北京檸檬”花粉管進(jìn)入沃柑胚珠；B1.“北京檸檬”花粉管生長進(jìn)入“無核沃柑”柱頭和花柱；B2.“北京檸檬”花粉管生長進(jìn)入“無核沃柑”子房室和胚珠；A3.“沃柑”結(jié)籽狀(a.自然授粉；b.“桂橙1號”授粉；c.“琯溪蜜柚”授粉；d.“北京檸檬”授粉)；B3.“無核沃柑”結(jié)籽狀(a.自然授粉；b.“桂橙1號”授粉；c.“琯溪蜜柚”授粉；d.“北京檸檬”授粉)。圖3 “沃柑”“無核沃柑”異交親和性觀察

“無核沃柑”種子敗育的主要表現(xiàn)為早期珠心細(xì)胞解體，胚囊、胚珠停止發(fā)育，繼而引發(fā)整個胚珠的萎蔫、皺縮。本研究未能對胚囊的發(fā)育進(jìn)行系統(tǒng)的顯微觀察，不能判定“無核沃柑”的胚囊是否發(fā)育正常，也不能判定雌雄配子是否結(jié)合產(chǎn)生合子，因此，不能確定由胚囊敗育、受精受阻和早期胚敗育中的哪個因素導(dǎo)致了“無核沃柑”的種子敗育。

注：OI-外珠被；II-內(nèi)珠被；NC-珠心細(xì)胞；ES-胚囊；E-胚；A1—A6為授粉后2、4、10、12、14和16周“沃柑”種子的發(fā)育動態(tài)；B1—B4為授粉后2、4、10和12周“無核沃柑”種子的發(fā)育動態(tài)；C1-a和C1-b為授粉后12周“沃柑”的種子和胚囊；C2-a、C2-b，授粉后14周“沃柑”的種子和幼胚；C3-a和C3-b為授粉后16周“沃柑”的種子和胚；C4-a和C4-b為授粉后20周“沃柑”的種子和胚；C5-a為授粉后20周“沃柑”的敗育種子；C5-b為授粉后20周“無核沃柑”的敗育種子。圖4 “沃柑”“無核沃柑”種子發(fā)育動態(tài)

3 討論

3.1 雄性不育

雄性不育是柑桔無核的主要原因，溫州蜜柑和臍橙是雄性不育導(dǎo)致無核的代表，“伏令夏橙”“馬敘葡萄柚”“無籽甌柑”“少核紅江橙”等的無核和少核也與花粉部分?jǐn)∮嚓P(guān)[2，5-10]。有研究表明，花藥外觀形態(tài)與花粉育性密切相關(guān)[5，8-9]。陳力耕把雄性不育的溫州蜜柑做母本與雄性正?？捎谋∑ぜ?xì)葉甜橙做父本雜交所獲得的F1代單株的花粉育性分為正常型、低育型、敗育型和退化型；正常型單株的花藥形態(tài)飽滿、顏色金黃，成熟時正常開裂并能散出大量花粉；低育型單株的花藥呈短圓形，但形態(tài)較為飽滿，黃色或淡黃色，可開裂散粉，但花粉量明顯少于正?？捎?；敗育型單株的花藥較短小，部分或大部分呈干癟狀態(tài)，色澤灰白或略顯淡黃，花藥大多不能開裂，開裂的也極少散出花粉；退化型單株的花藥呈箭頭狀，花藥與花絲基本等粗，似為花絲的直接延長，顏色灰白，毫無花粉粒[5]。胡志勇等發(fā)現(xiàn)，花藥的顏色與飽滿狀況基本上能反映該品種花粉的育性：花藥敗育品種“格倫臍橙”的花藥空癟、呈乳白色，完全沒有花粉；細(xì)胞質(zhì)雄性不育(細(xì)胞質(zhì)內(nèi)遺傳物質(zhì)控制花粉粒敗育等雄性個體不育的現(xiàn)象，不育性狀可以通過母性遺傳傳遞給后代)品種“國慶一號”溫州蜜柑的花藥細(xì)尖而癟，呈淺黃色；低育少核品種“華農(nóng)本地早”桔的花藥較飽滿，呈淡黃色；育性最強(qiáng)的多核品種“HB柚”的花藥飽滿、呈金黃色[8]。張遲等研究表明，“有籽甌柑”花藥飽滿，色澤金黃，在室內(nèi)放置2～3 d后花藥自然開裂散粉；“無籽甌柑”花藥空癟，色澤淡黃，在室內(nèi)放置2～3 d后花藥上幾乎沒有自然散發(fā)的花粉[9]。本研究中，“沃柑”“無核沃柑”的花藥短小、扁平，開花后呈干癟狀且大多不能開裂，散粉極少，應(yīng)歸屬為敗育型花藥[5]。

從花藥的組織細(xì)胞形態(tài)看，柑桔正常發(fā)育的花藥，4個藥室發(fā)育基本同步且大小相對一致，形態(tài)圓或橢圓，在花藥成熟后，每側(cè)的2個藥室之間藥隔消失而連成一體，成為具有2個藥室的成熟花藥。細(xì)胞質(zhì)雄性不育品種“國慶一號”溫州蜜柑花藥中的4個花粉囊發(fā)育不同步，外側(cè)的2個花粉囊發(fā)育較快，內(nèi)側(cè)的發(fā)育落后且較小[8]。“蕉柑”花藥從發(fā)育早期開始就陸續(xù)出現(xiàn)一些不正?，F(xiàn)象，表現(xiàn)為藥室發(fā)育受阻，藥室發(fā)育大小不一、畸形，同側(cè)的2個藥囊室之間的藥隔不解體等[11]。“格倫”臍橙花藥在早期有造孢細(xì)胞形成，但在隨后的發(fā)育過程中造孢細(xì)胞降解、退化，沒有花粉母細(xì)胞形成，最后在花藥室中央形成一個空腔，花藥壁細(xì)胞的分化正常[8]。相關(guān)研究表明，花藥發(fā)育異?，F(xiàn)象出現(xiàn)越早，花粉的敗育愈加嚴(yán)重[2，11]。本研究發(fā)現(xiàn)，與溫州蜜柑[8]和“蕉柑”[11]花藥的發(fā)育類似，“沃柑”“無核沃柑”花藥發(fā)育前期存在4個花粉囊發(fā)育不同步、大小不一的異常現(xiàn)象，后期存在花粉囊小、花粉囊內(nèi)花粉粒少的異?，F(xiàn)象，前期花粉囊不正常發(fā)育是導(dǎo)致花藥畸形、花粉粒少的主要原因。

3.2 自交異交親和性

由于部分柑桔品種具有良好的單性結(jié)實(shí)能力，自交不親和便成為在毋需雜交的情況下獲得無核果實(shí)的一個有益性狀[2-3]。自交不親和在柚類品種中較為典型，“琯溪蜜柚”“晚白柚”“HB柚”“水晶柚”具有單性結(jié)實(shí)能力，在不授粉或自花授粉的情況下能獲得無核果實(shí)，異花授粉則獲得多籽果實(shí)；“沙田柚”“酸柚”“無酸柚”不具有單性結(jié)實(shí)能力，在不授粉或自花授粉的情況下不能獲得果實(shí)，異花授粉則獲得多籽果實(shí)[12]?！吧程镨帧弊越换虍惤皇诜酆?，花粉管均能通過柱頭乳突細(xì)胞間隙進(jìn)入柱頭；自交花粉管在花柱1/2左右處停止生長，異交花粉管正常進(jìn)入胚囊[13]?！艾g溪蜜柚”“度尾蜜柚”自交和互交(異花)花粉在柱頭上都可正常萌發(fā)；自交花粉管進(jìn)入柱頭組織后，大部分在伸長過程出現(xiàn)破裂，伴隨有內(nèi)容物滲出，在花柱道內(nèi)緣有胼胝質(zhì)出現(xiàn)，但仍有部分花粉管能正常生長進(jìn)入子房，并從胚柄處進(jìn)入胚珠，在珠心組織里觀察到胼胝質(zhì)的積累，其中大多數(shù)“琯溪蜜柚”和少數(shù)“度尾蜜柚”胚珠的胚囊位置出現(xiàn)強(qiáng)烈的熒光亮點(diǎn)，而互交的胚珠中沒有觀察到這些現(xiàn)象[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，與“蕉柑”[15]相似，“沃柑”“無核沃柑”異交花粉管均能通過花柱進(jìn)入子房室，“沃柑”異交均有籽，“無核沃柑”異交均無籽。

3.3 雌性不育和胚敗育

被子植物雌蕊通常由柱頭、花柱和子房構(gòu)成。雌性不育表現(xiàn)為柱頭、花柱和子房不發(fā)育或發(fā)育畸形，胚珠和胚囊發(fā)育異常等[16]。胚囊不育是形成無核柑桔的重要原因之一。華盛頓臍橙、伏令夏橙、哈姆林甜橙、馬敘無核葡萄柚和溫州蜜柑等，在胚囊的大孢子期、二核期、四核期和八核期皆有退化現(xiàn)象[3，6]?！敖陡獭钡牟糠峙咧榘l(fā)育緩慢，珠被不完全包裹珠心，珠心中沒有大孢子母細(xì)胞存在；大部分胚珠的大孢子發(fā)育滯后，花后10 d胚珠和胚囊出現(xiàn)敗育跡象，花后20 d敗育胚囊明顯萎縮[17]。胚敗育是指植物授粉受精后，雌雄配子結(jié)合形成胚，但由于某些因素，胚中途停止發(fā)育的現(xiàn)象[18]?！艾g溪蜜柚”Ⅰ型敗育種子，授粉后5 d珠心細(xì)胞開始出現(xiàn)萎縮，授粉后50 d珠心組織細(xì)胞完全萎縮，外珠被發(fā)育停止，形成0.5 cm左右的癟籽；Ⅱ型敗育種子，授粉后50 d珠心組織細(xì)胞沒有萎縮，胚囊繼續(xù)發(fā)育，胚乳開始萎縮，授粉后65 d未見合子胚的生長，珠心組織細(xì)胞和胚乳逐漸萎縮，最終成為0.7～1 cm左右的癟籽[19]?！澳县S蜜桔”自交、雜交組合授粉后4周多數(shù)胚停滯于合子胚階段，胚囊瓦解，珠心組織也彼此分離形成空腔，最終胚珠退化消失或僅留存胚珠退化的痕跡；授粉后8周大部分飽滿種子的胚發(fā)育到心形胚階段時，胚乳開始瓦解，至成熟期形成大小不一的癟子[20]。本研究發(fā)現(xiàn)，與“琯溪蜜柚”Ⅰ型敗育種子一樣，“無核沃柑”胚珠形態(tài)敗育的起始部位也為珠心細(xì)胞，不同的是“無核沃柑”的珠被停止發(fā)育時期較早，最終形成微小癟子。