李艷輝， 趙 蓉， 肖誠(chéng)瑀， 汪宏波

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科，武漢 430022

子宮內(nèi)膜癌是全球最常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一[1]。高脂飲食和雌激素暴露都被證實(shí)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[2-3]，然而高脂飲食誘發(fā)子宮內(nèi)膜病變的作用機(jī)制尚未闡明。子宮內(nèi)膜從出現(xiàn)增生改變至惡變可能是一個(gè)連續(xù)演變過程，其中相關(guān)的發(fā)病因素及分子機(jī)制一直是科學(xué)研究的熱點(diǎn)[4-6]。研究表明高脂飲食下產(chǎn)生的肥胖，將引起過量雌激素的產(chǎn)生和胰島素抵抗，誘發(fā)機(jī)體代謝狀態(tài)改變，可能驅(qū)動(dòng)腫瘤的發(fā)生[6-7]；另一方面，高脂飲食可通過改變脂肪酸氧化代謝[8]、炎癥反應(yīng)[9]等直接參與腫瘤、心腦血管病等疾病的發(fā)生。但高脂飲食是否通過肥胖相關(guān)作用之外的途徑誘發(fā)子宮內(nèi)膜病變，值得進(jìn)一步探討。

人類腸道微生物群包含數(shù)千種細(xì)菌，總共有200萬個(gè)基因，大約是人類基因總數(shù)的150倍[10-11]。大量研究證實(shí)腸道微生物群與宿主間存在相互作用，腸道微生物群可以通過調(diào)節(jié)炎癥、誘導(dǎo)DNA損傷、產(chǎn)生與腫瘤發(fā)生相關(guān)的代謝物等方式促進(jìn)各種癌癥的發(fā)生[12-14]。飲食可調(diào)節(jié)腸道微生物群的組成和功能，進(jìn)而影響宿主的生理和病理狀態(tài)[15-16]。值得注意的是，目前關(guān)于腸道微生物群、高脂飲食與婦科腫瘤間相互關(guān)系的研究仍非常有限，而揭示腸道微生物在高脂飲食所致子宮內(nèi)膜病變過程中的作用及可能的機(jī)制，將有助于子宮內(nèi)膜病變的防治。

本研究通過高脂飲食喂養(yǎng)構(gòu)建小鼠子宮內(nèi)膜病變模型，探討高脂飲食在誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜病變中的作用；并采用宏基因組學(xué)對(duì)高脂飲食和持續(xù)雌激素干預(yù)下小鼠的腸道微生物群進(jìn)行研究，為進(jìn)一步探究微生物群失調(diào)在高脂飲食相關(guān)子宮內(nèi)膜癌變中的作用提供依據(jù)和研究方向。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 54只清潔級(jí)6周齡CD-1(ICR)雌性小鼠(北京維通利華公司)，18～25 g，飼養(yǎng)于華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心無病原體(SPF)動(dòng)物房，每5只一籠，飼養(yǎng)溫度(25±2)℃，濕度(55±5)%，維持12 h的光/暗循環(huán)。本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)華中科技大學(xué)動(dòng)物保護(hù)與利用委員會(huì)批準(zhǔn)許可。

1.1.2 主要試劑 小鼠喂養(yǎng)用高脂飼料(D19452，脂肪、糖水化合物及蛋白供能占比分別為60%、20%、20%)購(gòu)自北京華阜康有限公司；生化級(jí)17β-雌二醇購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司；小鼠血清三酰甘油(TG)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所；蘇木精-尹紅(HE)染色試劑盒購(gòu)自賽維爾生物科技有限公司；QIAamp DNA Stool Mini Kit試劑盒為德國(guó)QIAGEN公司產(chǎn)品。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 實(shí)驗(yàn)小鼠經(jīng)正常飲食喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為對(duì)照組、高脂飼料喂養(yǎng)組(HFD組)、17β-雌二醇喂養(yǎng)組(E2干預(yù)組)。對(duì)照組小鼠給予正常熱量飼料喂養(yǎng)；HFD組小鼠采用高脂飼料持續(xù)喂養(yǎng)26周；E2干預(yù)組小鼠在給予正常熱量飼料喂養(yǎng)下，每日一次性經(jīng)口給予500 μg/kg的17β-雌二醇[17-18]。每組18只小鼠，每周稱重記錄體重變化。

1.2.2 標(biāo)本收集 在分組處理后的第13周每組隨機(jī)選取6只小鼠，第26周取各組剩余的12只小鼠。在小鼠的子宮內(nèi)膜增殖期(通過陰道涂片觀察)，經(jīng)麻醉后取其眼靜脈血2 mL。小鼠斷頸處死后，取下腹豎切口于子宮頸與子宮體交界部切下子宮，立即稱重。稱重后在體視顯微鏡下縱向剖開子宮。于冰上切取各只小鼠的部分子宮標(biāo)本用于后續(xù)的組織學(xué)檢查。

1.2.3 小鼠子宮內(nèi)膜組織學(xué)評(píng)估 小鼠子宮標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋，切片(5 μm)，蘇木精-伊紅染色。由2名病理醫(yī)師各自獨(dú)立閱片，并根據(jù)2014年修訂的WHO子宮內(nèi)膜病變分類，將子宮內(nèi)膜病變分為子宮內(nèi)膜增生不伴不典型性(EH)和子宮內(nèi)膜不典型增生(AH)兩類[19]。

1.2.4 小鼠糞便標(biāo)本的收集 由于飲食和環(huán)境因素能迅速改變腸道微生物群，本研究使用的藥物、飼料、飲用水和鼠籠均進(jìn)行了嚴(yán)格消毒控制，以避免潛在的交叉污染。在小鼠處死前1 d每小時(shí)收集1次糞便球。新鮮小鼠糞便收集于單個(gè)無菌離心試管內(nèi)，并迅速轉(zhuǎn)移至-80℃低溫冰箱冷凍保存，直到DNA提取。

1.2.5 宏基因組測(cè)序分析 采用宏基因組測(cè)序方法測(cè)定各組小鼠腸道微生物群。采用QIAamp DNA Stool Mini Kit試劑盒從9份小鼠糞便標(biāo)本(4份來自對(duì)照組小鼠，2份來自出現(xiàn)子宮內(nèi)膜非典型增生的HFD組小鼠，3份來自出現(xiàn)子宮內(nèi)膜非典型增生的E2干預(yù)組小鼠)中提取總DNA?；蚪MDNA經(jīng)超聲波破碎儀隨機(jī)打斷成長(zhǎng)度為350 bp的片段，經(jīng)末端修復(fù)、3′端加polyA、鏈接測(cè)序接頭、純化、PCR擴(kuò)增等步驟完成DNA文庫(kù)制備。Nanodrop初步測(cè)定DNA純度，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA完整性。Qubit對(duì)回收的文庫(kù)進(jìn)行定量，算出實(shí)際濃度后，采用Illumina Hiseq二代高通量測(cè)序儀對(duì)細(xì)菌16S rDNA序列進(jìn)行測(cè)序，得到所有對(duì)象樣本的腸道微生物群16S rDNA V3～V4可變區(qū)的原始序列。

1.2.6 生物信息學(xué)分析 測(cè)序得到的原始數(shù)據(jù)經(jīng)序列去重過濾、聚類?？偣采闪?4.9 Gb高質(zhì)量數(shù)據(jù)，平均每個(gè)樣本6.1 Gb。數(shù)據(jù)經(jīng)過濾，并去除宿主基因，創(chuàng)建非冗余基因集用于后續(xù)數(shù)據(jù)分析。對(duì)所有序列進(jìn)行分類單元(OTU)聚類分析及物種分類學(xué)分析。α多樣性是反映物種多樣性、豐富度、均勻度的綜合指標(biāo)。使用R語言進(jìn)行α多樣性分析。采用PICRUSt方法預(yù)測(cè)微生物群的功能差異，從COG功能分類和KEGG代謝途徑(第3層)兩個(gè)方面進(jìn)行差異比較。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用R語言進(jìn)行α多樣性分析、物種組成分析、微生物群差異分析。兩組間比較采用t檢驗(yàn)或Mann-Whitney U檢驗(yàn)，三組間比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。使用PICRUSt軟件進(jìn)行功能預(yù)測(cè)分析。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高脂飲食對(duì)小鼠體重及血脂水平的影響

每周測(cè)量各組小鼠體重，結(jié)果顯示：自處理第2周開始，HFD組小鼠體重顯著高于對(duì)照組及E2干預(yù)組(均P<0.01)；HFD組小鼠外周血三酰甘油水平亦顯著高于對(duì)照組和E2干預(yù)組(均P<0.05)；但E2干預(yù)組與對(duì)照組小鼠的體重及血清三酰甘油水平并無顯著差異。見圖1。

A：各組小鼠干預(yù)過程中平均體重變化趨勢(shì)；B：干預(yù)第13周及第26周時(shí)各組小鼠血清三酰甘油水平比較；Control：正常飲食飼養(yǎng)組，E2：E2干預(yù)組，HFD：高脂飼料喂養(yǎng)組；與Control組比較，*P<0.05 **P<0.01圖1 各組小鼠體重、血清三酰甘油水平的變化Fig.1 Changes in body weight and serum triglyceride level of each group

2.2 高脂飲食干預(yù)誘導(dǎo)小鼠子宮內(nèi)膜增生

各組小鼠在干預(yù)的第13周和第26周分批處死，切除的子宮大體觀顯示：E2干預(yù)組小鼠的子宮體積明顯增大，而HFD組與對(duì)照組小鼠子宮在外觀上并無明顯差異。稱重結(jié)果顯示：第26周，E2干預(yù)組小鼠的子宮質(zhì)量顯著高于HFD及對(duì)照組[(8.58±0.30)gvs.(7.33±0.18)g，(7.16±0.22)g，P<0.01]。見圖2。

A：各組小鼠子宮大小大體觀代表性圖片；B：各組小鼠子宮質(zhì)量比較；C干預(yù)第13周各組小鼠子宮內(nèi)膜典型組織學(xué)表現(xiàn)(HE染色)，D：干預(yù)第26周各組小鼠子宮內(nèi)膜典型組織學(xué)表現(xiàn)(HE染色)，100×視野中黑框區(qū)域在400×視野中放大；Control：正常飲食飼養(yǎng)組；E2：E2干預(yù)組；HFD：高脂飼料喂養(yǎng)組；**P<0.01圖2 各組小鼠子宮大小及內(nèi)膜改變Fig.2 Changes of uterine size and endometrium of mice in each group

分組干預(yù)第13周，66.7%(4/6)E2干預(yù)組小鼠子宮內(nèi)膜呈現(xiàn)出子宮內(nèi)膜增生不伴有不典型性狀態(tài)，且子宮內(nèi)膜腺體/間質(zhì)比例明顯增加；而HFD組和對(duì)照組小鼠子宮內(nèi)膜組織學(xué)檢查均為正常。但至第26周，83.3%(10/12)的HFD組及91.7%(11/12)的E2干預(yù)組小鼠子宮內(nèi)膜呈現(xiàn)增生狀態(tài)；其中，16.7%(2/12)的HFD組小鼠及25.0%(3/12)的E2干預(yù)組小鼠，其子宮內(nèi)膜呈現(xiàn)腺體形狀不規(guī)則，腺上皮呈復(fù)層結(jié)構(gòu)并向腺腔內(nèi)突出，子宮內(nèi)膜細(xì)胞呈異型性、細(xì)胞極性喪失、細(xì)胞核異型性，提示出現(xiàn)子宮內(nèi)膜不典型增生；對(duì)照組小鼠子宮內(nèi)膜結(jié)構(gòu)均正常。但持續(xù)26周的高脂飲食(HFD)組和E2干預(yù)組均未觀察到子宮內(nèi)膜癌變的發(fā)生。見圖2。

2.3 腸道微生物群物種組成分析

宏基因組測(cè)序分析結(jié)果顯示：共測(cè)得119個(gè)門、2234個(gè)屬以及9043種細(xì)菌。其中HFD組測(cè)得113個(gè)門，1917個(gè)屬，7274種細(xì)菌；E2干預(yù)組測(cè)得104個(gè)門，1907個(gè)屬，7039種細(xì)菌；對(duì)照組測(cè)得119個(gè)門，2152個(gè)屬，8427種細(xì)菌。3組中排名前5的主要組成物種均為擬桿菌門(Bacteroidetes)、厚壁菌門(Firmicutes)、變形菌門(Proteobacteria)、未分類菌門(unclassified bacteria)和脫鐵桿菌門(Deferribacteres)。

2.4 組間腸道微生物群物種差異分析

在門水平，與對(duì)照組比較，HFD組的擬桿菌門豐度顯著降低，而厚壁菌門豐度顯著增多；與之相反，E2干預(yù)組與對(duì)照組比較呈現(xiàn)擬桿菌門豐度增加而厚壁菌門豐度的降低。見圖3A、3B。

在屬水平，與對(duì)照組比較，HFD組的Bacteroides屬(23.850%vs.10.710%)、Prevotella屬(12.800%vs.3.395%)和Clostridium屬(9.081%vs.6.613%)相對(duì)豐度降低，而non-classified pFirmicutes屬(5.585%vs.9.864%)相對(duì)豐度增加；E2干預(yù)組較對(duì)照組Clostridium屬(6.613%vs.1.512%)和unclassified fLachnospiraceae屬(9.948%vs.3.903%)相對(duì)豐度降低，而Bacteroides屬(23.85%vs.50.98%)和Prevotella屬(12.8%vs.16.79%)相對(duì)豐度增加。LEfSe分析亦提示HFD組與對(duì)照組小鼠腸道微生物群組成差異顯著，尤其是HFD組產(chǎn)短鏈脂肪酸的優(yōu)勢(shì)菌屬(Faecalibacterium和Ruminococcus)和丁酸的優(yōu)勢(shì)菌屬(Clostridium，Butyrivibrio，F(xiàn)usobacterium)豐度顯著降低。見圖3C、3D。

A：3組小鼠在門水平上的物種組成分析；B：3組小鼠腸道微生物群在門水平，排名前5位的微生物群占比差異分析；C：3組小鼠在屬水平上的腸道微生物種組成分析；D：高脂飲食組與對(duì)照組小鼠在屬水平的腸道微生物群LEfSe分析；E：3組小鼠在種水平的物種組成分析；F：高脂飲食組與對(duì)照組小鼠在種水平的物種組成差異分析；Ctrl：正常飲食飼養(yǎng)組；E2：E2干預(yù)組；HFD：高脂飼料喂養(yǎng)組；*P<0.05，**P<0.01圖3 各組小鼠腸道菌群物種差異分析Fig.3 Bioinformatics analysis of gut microbiome flora

在種水平，3組豐度最高的優(yōu)勢(shì)菌種均為Bacteroidessp.CAG：927，unclassified gBacteroides，Prevotellasp.CAG：1031，F(xiàn)irmicutesbacteriumASF500和Bacteroidesuniformis。差異分析顯示：HFD組中Bacteroidessp.CAG：927和Prevotellasp.CAG：1031的相對(duì)豐度降低，而Bacteroidesfragilis種相對(duì)豐度顯著升高。這是值得注意的，因?yàn)檫@一菌種在林奇綜合征患者的糞便樣本中明顯過多，而林奇綜合征會(huì)導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌和其他腫瘤的易感性增加[20]。見圖3E、3F。

2.5 腸道微生物群多樣性比較

采用Shannon指數(shù)表示α多樣性。HFD組Shannon指數(shù)高于對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.2667)；E2干預(yù)組與對(duì)照組小鼠的α多樣性無顯著差異(P>0.999)。見圖4。

Control：正常飲食飼養(yǎng)組；E2：E2干預(yù)組；HFD：高脂飼料喂養(yǎng)組圖4 各組小鼠腸道菌群在屬水平的α多樣性指數(shù)比較Fig.4 Comparison of the α diversity(Shannon index)of each group

2.6 功能預(yù)測(cè)分析

COG功能分類注釋結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，HFD組腸道微生物群基因在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、轉(zhuǎn)運(yùn)和分解代謝功能類群中的相對(duì)豐度較高；而E2干預(yù)組在細(xì)胞骨架功能類群中的相對(duì)豐度降低。見圖5A、5B。

KEGG代謝途徑分析結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，HFD組腸道微生物群基因在氧化磷酸化、β內(nèi)酰胺抵抗、組氨酸代謝、cAMP抵抗、鐵死亡、凋亡等亞類顯著富集；而在氨酰-tRNA生物合成、甘油糖脂代謝、胰高血糖素等亞類豐度顯著下降。見圖5C、5D。

A：HFD組與對(duì)照組微生物群差異基因的COG功能分類注釋結(jié)果；B：E2干預(yù)組與對(duì)照組微生物群差異基因的COG功能分類注釋結(jié)果；C：HFD組與對(duì)照組微生物群差異基因的KEGG代謝途徑分析結(jié)果；D：E2干預(yù)組與對(duì)照組微生物群差異基因的KEGG代謝途徑分析結(jié)果；Ctrl：正常飲食飼養(yǎng)組，E2：E2干預(yù)組，HFD：高脂飼料喂養(yǎng)組圖5 各組腸道菌群功能差異分析Fig.5 Variance analysis of function of gut microbiome flora in each group

3 討論

本研究采用高脂飲食連續(xù)喂養(yǎng)CD-1小鼠，發(fā)現(xiàn)高脂飲食可誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜不典型增生的發(fā)生，且其發(fā)生率與目前已明確的子宮內(nèi)膜不典型增生誘發(fā)因素——持續(xù)無孕激素抵抗的雌激素刺激相當(dāng)(16.7%vs.25.0%)。這一結(jié)果再次驗(yàn)證了高脂飲食是子宮內(nèi)膜不典型增生的危險(xiǎn)因素。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示：高脂飲食與多種腫瘤的發(fā)生率升高相關(guān)，包括胰腺癌[21]、腸道腫瘤[8]以及子宮內(nèi)膜癌[22]等。而在動(dòng)物模型中，Cheng等[17]采用高脂飲食和(或)17-β雌二醇喂養(yǎng)C57BL/6小鼠12周，發(fā)現(xiàn)高脂飲食促進(jìn)了小鼠子宮內(nèi)膜腺體的增殖(與本研究中第13周收集的小鼠子宮內(nèi)膜標(biāo)本組織學(xué)觀測(cè)結(jié)果一致)。Wilkinson等[22]在一種遺傳性易患子宮內(nèi)膜癌的大鼠——BDⅡ/Han鼠中分別給予高脂飲食喂養(yǎng)15個(gè)月，9只正常飲食組大鼠及12只高脂飲食組大鼠內(nèi)均有4只大鼠出現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌變。雖然高脂飲食干預(yù)下的BDⅡ/Han大鼠子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率并無顯著增加，但作者推測(cè)其原因可能主要與研究的樣本量過少相關(guān)。高脂飲食導(dǎo)致子宮內(nèi)膜病變的機(jī)制，目前尚不完全清楚。除了高脂飲食下人體和動(dòng)物模型產(chǎn)生的肥胖，誘發(fā)機(jī)體代謝狀態(tài)改變驅(qū)動(dòng)子宮內(nèi)膜病變的發(fā)生[6-7]外，是否還存在其他機(jī)制值得進(jìn)一步探討。越來越多的研究認(rèn)為腸道微生物群在機(jī)體的健康及疾病狀況中發(fā)揮了重要作用。腸道微生物群的組成可以決定個(gè)體從食物中獲取能量的功效，而與之相對(duì)的膳食組成的變化亦可改變腸道微生物群組成[23]。因此本研究探討了高脂飲食喂養(yǎng)對(duì)小鼠腸道微生物群的影響，及其可能在子宮內(nèi)膜病變中的作用。

本研究中宏基因組學(xué)技術(shù)分析結(jié)果顯示高脂飲食喂養(yǎng)組小鼠腸道微生物群的α多樣性較對(duì)照組有較明顯的升高(雖然未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異)，并且高脂飲食組與正常飲食對(duì)照組及17β-雌二醇組比較，腸道微生物群物種組成上差異顯著。例如，與正常飲食對(duì)照組比較，腸道微生物群中擬桿菌門(Bacteroidetes)豐度在HFD組中顯著降低，而厚壁菌門(Firmicutes)豐度在HFD組顯著增多，這與許多研究結(jié)果相一致[24-25]。LEfSe分析也發(fā)現(xiàn)高脂飲食喂養(yǎng)組中產(chǎn)短鏈脂肪酸的優(yōu)勢(shì)菌屬(Faecalibacterium和Ruminococcus)和丁酸的優(yōu)勢(shì)菌屬(Clostridium，Butyrivibrio，F(xiàn)usobacterium)豐度顯著降低，與之前的研究結(jié)果相似[26]。產(chǎn)丁酸鹽的基因豐度降低被認(rèn)為是肥胖和漢族2型糖尿病人群的共同特征[26]；同時(shí)產(chǎn)短鏈脂肪酸、丁酸的腸道微生物群的普遍減少與許多人類疾病相關(guān)[27]。高脂飲食也可使腸道微生物群的生物學(xué)功能及代謝途徑發(fā)生改變[25]。本研究中，KEGG代謝途徑分析顯示，相較對(duì)照組，高脂飲食喂養(yǎng)組的腸道微生物群基因在氧化磷酸化、鐵死亡、凋亡等亞類富集顯著。上述由高脂飲食喂養(yǎng)誘導(dǎo)的腸道微生物群基因組發(fā)生顯著上調(diào)的代謝途徑中，需特別關(guān)注的是鐵死亡。鐵死亡作為一種新型的程序性細(xì)胞死亡形式，其在內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中的作用正在引起關(guān)注[20]。此外高脂飲食喂養(yǎng)誘導(dǎo)小鼠腸道微生物群基因組的氨酰-tRNA生物合成、甘油糖脂代謝、胰高血糖素等亞類下降，提示高脂飲食誘導(dǎo)了小鼠氨基酸、糖類、脂質(zhì)代謝的紊亂；而先前的研究已經(jīng)揭示高脂飲食誘導(dǎo)的胰島素抵抗[28]、炎癥反應(yīng)[29]等均可誘發(fā)機(jī)體的代謝紊亂，并被認(rèn)為是促進(jìn)子宮內(nèi)膜病變的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

另一個(gè)需要考慮的問題是上述腸道微生物組成及功能改變到底是由高脂飲食還是肥胖所致。Xiao等[24]的研究應(yīng)用有肥胖傾向BL6和肥胖抵抗的Sv129小鼠對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)肥胖的不同敏感性，以及它們對(duì)COX活性抑制劑的不同反應(yīng)，鑒定了到底是高脂飲食還是肥胖在小鼠腸道微生物群變化中起到更大作用。結(jié)果顯示小鼠腸道微生物群的明顯變化更多源于高脂飲食喂養(yǎng)，而非肥胖?；谶@一結(jié)論，我們推測(cè)高脂飲食喂養(yǎng)亦可能在本研究中主導(dǎo)了小鼠腸道微生物群組成及基因功能改變。

本研究仍有以下不足之處：首先，因高脂飲食(HFD)及17-β雌二醇(E2)干預(yù)組內(nèi)分別只有2只、3只小鼠出現(xiàn)子宮內(nèi)膜的不典型增生，致使進(jìn)行宏基因組測(cè)序的樣本數(shù)量相對(duì)較少。其次，雖然小鼠和人類具有相似的腸道微生物群組成和功能，但仍不能完全代表高脂飲食、肥胖對(duì)人體腸道微生物群和子宮內(nèi)膜病變的影響。最后，未進(jìn)行糞菌移植來驗(yàn)證腸道微生物群的改變對(duì)子宮內(nèi)膜病變的影響，導(dǎo)致本研究缺乏腸道微生物群紊亂參與子宮內(nèi)膜病變的直接證據(jù)。上述的不足需要我們?cè)诮窈蟮难芯恐羞M(jìn)一步完善。

本研究通過長(zhǎng)達(dá)26周的高脂飲食喂養(yǎng)，在CD-1小鼠中構(gòu)建出子宮內(nèi)膜不典型增生模型；并通過宏基因組學(xué)技術(shù)驗(yàn)證了高脂飲食對(duì)小鼠腸道微生物群組成及功能的影響。高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠腸道微生物群失調(diào)可能與子宮內(nèi)膜增生甚至癌變相關(guān)，值得未來進(jìn)一步的研究探索。