姜 羽， 呂國(guó)偉， 張文進(jìn)， 張 輝

(鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院神經(jīng)外科，鄭州 450000)

腦膠質(zhì)瘤是源自神經(jīng)上皮的腫瘤，占顱腦腫瘤的38%～52%，是顱內(nèi)最常見的原發(fā)性腫瘤，浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，不易完全切除，術(shù)后易復(fù)發(fā)，可導(dǎo)致嚴(yán)重的中樞神經(jīng)功能障礙，危及患者生命[1]。世界衛(wèi)生組織把膠質(zhì)瘤分為四個(gè)等級(jí)，Ⅰ～Ⅱ級(jí)膠質(zhì)瘤5 a存活率為30%～70%，Ⅲ～Ⅳ級(jí)生存期為9～12個(gè)月[2-3]。如何提高腦膠質(zhì)瘤患者存活率，延長(zhǎng)生存期，是神經(jīng)外科一直以來研究的重點(diǎn)與難點(diǎn)。DEAD-box解旋酶(DEAD-box helicases，Ddx)家族是一類高度保守的RNA解旋酶，屬于2型解旋酶超家族成員[4]。Ddx5具有多種生物活性功能，在轉(zhuǎn)錄、前mRNA處理或選擇性剪接、miRNA處理等生物學(xué)過程中發(fā)揮重要作用，Ddx17是Ddx解旋酶家族的主要成員之一，與Ddx5有高度同源性。Ddx5/Ddx17作為轉(zhuǎn)錄共同調(diào)節(jié)因子在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起重要作用。多種癌癥細(xì)胞中Ddx5和Ddx17表達(dá)水平升高，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[5]。本研究分析Ddx5和Ddx17表達(dá)水平及其對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后遠(yuǎn)期預(yù)后的作用，報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 選取2017年2月—2018年2月在鄭州中心醫(yī)院診治的腦膠質(zhì)瘤術(shù)后患者118例，其中男69例，女49例；年齡27～74(41.64±5.17)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均實(shí)施手術(shù)治療，符合《中國(guó)中樞神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)瘤診斷和診療指南(2015)》[6]對(duì)腦膠質(zhì)瘤的診斷。②肝腎功能、血常規(guī)正常(中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)≥1.5×109L-1，血小板計(jì)數(shù)≥100×109L-1)。③無其他腫瘤或嚴(yán)重性疾病。④無免疫性疾病或神經(jīng)系統(tǒng)疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前經(jīng)過化療、放療等治療者。②臨床資料不完整者。本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬已明確研究?jī)?nèi)容及可能存在的風(fēng)險(xiǎn)，均簽署同意書。

1.2 方法

1.2.1 Ddx5、Ddx17表達(dá)水平檢測(cè) 118例腦膠質(zhì)瘤患者均實(shí)施手術(shù)治療，手術(shù)中無菌環(huán)境得到腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本制成石蠟切片(4～8 μm)，68 ℃，烤片20 min；經(jīng)二甲苯脫蠟2次，每次10 min，依次通過無水乙醇10 min，體積分?jǐn)?shù)95%酒精5 min，體積分?jǐn)?shù)85%酒精5 min，體積分?jǐn)?shù)75%酒精5 min水化；質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%過氧化氫溶液滅活內(nèi)源性過氧化物酶30 min，PBS緩沖液沖洗3次，每次5 min；檸檬酸溶液抗原修復(fù)后，用聚乙二醇辛基苯基醚通透，隨后用山羊血清封閉；分別加兔抗人Ddx5和Ddx17一抗(1∶500，購自美國(guó)Invitrogen公司)，4 ℃孵育過夜，PBS緩沖液沖洗3次，每次5 min，加山羊抗兔二抗(1∶1 000，購自美國(guó)Invitrogen公司)37 ℃孵育1 h，PBS緩沖液沖洗3次，每次5 min；二氨基聯(lián)苯胺染色1 h，蘇木精復(fù)染20 s，脫水、透明、干燥、封片。顯微鏡下觀察，每張切片觀察5個(gè)視野，每個(gè)高倍鏡觀察100個(gè)細(xì)胞。染色強(qiáng)度評(píng)分：無著色0分，淺黃色1分，黃褐色2分，棕褐色3分；染色細(xì)胞百分比評(píng)分：染色細(xì)胞數(shù)< 5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。總分=染色強(qiáng)度評(píng)分+染色細(xì)胞百分比評(píng)分，總分0～3分為低表達(dá)，>3分為高表達(dá)[7]。

1.2.2 預(yù)后判斷及分組 術(shù)后以電話和門診方式進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間截止至2021年2月，隨訪資料完整。記錄患者術(shù)后癥狀，定期進(jìn)行影像學(xué)檢查，關(guān)注有異常病變者，適時(shí)安排病理活檢，對(duì)確診為病情復(fù)發(fā)且各種條件允許的患者進(jìn)行二次切除手術(shù)，手術(shù)病理確診及因病情惡化死亡，作為終點(diǎn)事件[8]。符合終點(diǎn)事件者納入預(yù)后不良組(36例)，其余患者納入預(yù)后良好組(82例)。

1.2.3 可能影響因素收集 統(tǒng)計(jì)可能導(dǎo)致腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素，包括性別、年齡、吸煙史、飲酒史、是否完全切除腫瘤、放化療療效、放化療結(jié)合、病理級(jí)別、術(shù)前腫瘤直徑、術(shù)前頭部損傷、KPS評(píng)分、術(shù)前癲癇發(fā)作、病灶數(shù)目、顱高壓、腫瘤部位、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)。

1.2.4 logistic回歸分析 所收集的因素中，預(yù)后不良的發(fā)生情況(是=1，否=0)為因變量(Y)，可能影響因素性別(男=1，女=0)、吸煙史(有=1，無=0)、飲酒史(有=1，無=0)、腫瘤切除程度(完全切除=1，部分切除=0)、放化療療效(有效=1，無效=0)、放化療結(jié)合(是=1，否=0)、病理級(jí)別(Ⅲ、Ⅳ=1，Ⅰ、Ⅱ=0)、術(shù)前腫瘤直徑(直徑<6 cm=1，≥6 cm=0)、術(shù)前頭部損傷(是=1，否=0)、術(shù)前癲癇發(fā)作(是=1，否=0)、病灶數(shù)目(單個(gè)=1，多個(gè)=0)、顱高壓(是=1，否=0)、腫瘤部位(幕上=1，幕下=0)為二分類變量，年齡、BMI、術(shù)前KPS評(píng)分為連續(xù)變量。以上各因素均為自變量，實(shí)施logistic回歸分析。

1.2.5 觀察指標(biāo) ①2組Ddx5、Ddx17表達(dá)水平比較。②可能影響患者遠(yuǎn)期預(yù)后的因素比較。③logistic回歸分析明確影響腦膠質(zhì)瘤術(shù)后遠(yuǎn)期預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素。④受試者工作特征曲線(ROC曲線)分析Ddx5、Ddx17水平對(duì)腦膠質(zhì)瘤術(shù)后遠(yuǎn)期預(yù)后的預(yù)測(cè)作用。

2 結(jié)果

2.1 2組患者Ddx5、Ddx17水平比較 預(yù)后不良組Ddx5、Ddx17水平高于預(yù)后良好組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組患者Ddx5、Ddx17水平比較

2.2 影響患者預(yù)后的可能因素比較 與預(yù)后良好組相比，預(yù)后不良組腫瘤部分切除比例及病理Ⅲ、Ⅳ級(jí)所占比例較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；2組的性別、年齡、吸煙史、飲酒史、放化療有效、放化療結(jié)合、術(shù)前腫瘤直徑<6 cm、術(shù)前頭部損傷、術(shù)前癲癇發(fā)作、單個(gè)病灶、顱高壓、腫瘤部位在幕上、BMI、術(shù)前KPS評(píng)分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 影響預(yù)后的可能因素比較

2.3 logistic回歸分析影響患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素 經(jīng)logistic回歸分析，腫瘤部分切除、病理Ⅲ級(jí)、病理Ⅳ級(jí)、Ddx5、Ddx17水平均為導(dǎo)致腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 logistic回歸分析影響患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素

2.4 Ddx5、Ddx17水平對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后遠(yuǎn)期預(yù)后的預(yù)測(cè)作用 ROC曲線分析顯示，Ddx5、Ddx17預(yù)測(cè)腦膠質(zhì)瘤預(yù)后不良的靈敏度分別為83.78%、78.62%，特異度分別為77.47%、70.12%，準(zhǔn)確度分別為81.43%、72.62%，曲線下面積(AUC)分別為0.825、0.751。見表4、圖1。

圖1 不同指標(biāo)對(duì)腦膠質(zhì)瘤預(yù)后不良預(yù)測(cè)價(jià)值的ROC曲線

表4 不同指標(biāo)對(duì)腦膠質(zhì)瘤預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

腦膠質(zhì)瘤是神經(jīng)系統(tǒng)外胚層的膠質(zhì)細(xì)胞病變形成的腫瘤，其發(fā)生發(fā)展與遺傳和環(huán)境中的致癌因子密切相關(guān)，多種因素共同作用，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期不斷增殖分裂，且不受生長(zhǎng)接觸抑制與自身免疫系統(tǒng)限制，持續(xù)分裂誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生發(fā)展[9]。腦膠質(zhì)瘤難以完全切除，術(shù)后極易復(fù)發(fā)，術(shù)后患者的病理組織取材困難[10]。因此尋找可以監(jiān)測(cè)腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后情況的指標(biāo)，對(duì)術(shù)后復(fù)發(fā)及疾病未來走向進(jìn)行有效評(píng)估預(yù)測(cè)具有很高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

Ddx5參與多種生物學(xué)過程，如轉(zhuǎn)錄，前mRNA、rRNA和microRNA加工以及調(diào)控代謝，參與多種蛋白的復(fù)雜合成過程，調(diào)控細(xì)胞增殖和器官分化[11]。Ddx17氨基酸序列與Ddx5非常近， Ddx17和Ddx5作為RNA解旋酶，參與一系列RNA代謝過程。近年來有研究[12-13]發(fā)現(xiàn)，Ddx17和Ddx5可以與腫瘤細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子形成復(fù)合物，促進(jìn)相關(guān)基因表達(dá)，從而介導(dǎo)細(xì)胞增殖和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化等惡性生物學(xué)行為。有研究[14-16]表明，Ddx17和Ddx5參與調(diào)控多種腫瘤細(xì)胞增殖，在結(jié)腸癌細(xì)胞中，Ddx17和Ddx5可通過β-catenin形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，誘導(dǎo)c-Myc、cyclin D1等基因表達(dá)，共同促進(jìn)細(xì)胞的增殖。有研究[17-18]發(fā)現(xiàn)，Ddx17和Ddx5可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲，最終導(dǎo)致腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移。孫宇婷等[19]發(fā)現(xiàn)，人腦膠質(zhì)瘤組Ddx5表達(dá)水平明顯增高。ALQAHTANI等[20]研究發(fā)現(xiàn)，Ddx17在乳腺癌細(xì)胞中存在高表達(dá)，其異常表達(dá)可能作為新的臨床腫瘤標(biāo)志物或者預(yù)后指標(biāo)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，預(yù)后不良組Ddx5、Ddx17水平均高于預(yù)后良好組，表明Ddx5、Ddx17水平與預(yù)后有關(guān)，其異常表達(dá)可以影響惡性腫瘤患者預(yù)后。

本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)logistic回歸分析證實(shí)腫瘤部分切除、病理Ⅲ級(jí)、病理Ⅳ級(jí)、Ddx5、Ddx17水平是導(dǎo)致腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后遠(yuǎn)期預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素。Ddx5、Ddx17水平能夠反映術(shù)后患者的恢復(fù)情況，其與健康人群平均水平差值越大，說明病情越嚴(yán)重，預(yù)后越差。ROC曲線分析顯示，Ddx5、Ddx17預(yù)測(cè)腦膠質(zhì)瘤預(yù)后不良的靈敏度為83.78%、78.62%，特異度為77.47%、70.12%，準(zhǔn)確度為81.43%、72.62%，AUC為0.825、0.751，表明Ddx5、Ddx17水平對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者病情評(píng)估及術(shù)后遠(yuǎn)期預(yù)后預(yù)測(cè)有較高的臨床價(jià)值，可為臨床治療及預(yù)后判斷提供參考。

綜上所述，腦膠質(zhì)瘤患者的Ddx5、Ddx17水平可反映病情變化，且是導(dǎo)致術(shù)后遠(yuǎn)期預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素，對(duì)于術(shù)后遠(yuǎn)期預(yù)后預(yù)測(cè)有一定的臨床價(jià)值。在今后此類疾病的診斷、治療及預(yù)后判斷中，可以將Ddx5、Ddx17水平作為參考依據(jù)。