詹慧慧，姚方程，易 斌，魏惠珍, ，陳西勇，呂 尚，陳華師，金浩鑫，饒 毅, *

基于糖類成分探究黃精炆制前后差異

詹慧慧1，姚方程2，易 斌2，魏惠珍1, 3，陳西勇2，呂 尚1，陳華師2，金浩鑫3，饒 毅1, 3*

1.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330004 2.建昌幫藥業(yè)有限公司，江西 撫州 344700 3.中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心，江西 南昌 330006

基于黃精炆制前后糖類成分變化差異探討黃精炆制后“減毒增效”的作用機制。采用UV（紫外分光光度）法，測定黃精炆制前后的總多糖含量；采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器（HPLC-ELSD）法測定黃精炆制前后游離糖含量；采用高效凝膠滲透色譜-示差折光檢測器（HPGPC-RI）法分析黃精炆制前后的多糖相對分子質(zhì)量；采用高效液相色譜-紫外檢測器（HPLC-PDA）法對黃精多糖的單糖組成進行測定分析。黃精炆制后，總多糖含量下降約60%；游離糖中蔗糖含量降低35%，果糖含量升高22倍，葡萄糖含量升高4.4倍；炆制后相對分子質(zhì)量2個峰均降低1～5倍；黃精炆制前后多糖均由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖組成，生黃精單糖組成物質(zhì)的量比為甘露糖-鼠李糖-葡萄糖-半乳糖-阿拉伯糖（10∶6∶25∶7∶1）；炆制后物質(zhì)的量比為7∶5∶1.7∶14∶1。炆法炮制對黃精糖類成分影響較大，炆制后多糖發(fā)生水解及結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而使黃精麻舌感消失，藥效增強。

炆黃精；黃精多糖；多糖含量；游離糖；相對分子質(zhì)量；單糖組成

黃精為百合科滇黃精Coll.et Hemsl.、黃精Red、多花黃精Hua的干燥根莖，是我國常用大宗藥材之一，具有補氣養(yǎng)陰、健脾、潤肺、益腎等功效[1]，其藥效顯著，應(yīng)用范圍廣泛[2]。目前已有黃精顆粒、黃精飲料[3-4]等多種劑型上市?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃精具有抗衰老、保護心肌細胞、抗疲勞、抗腫瘤、提高免疫力、調(diào)血糖、調(diào)血脂等藥理作用，其藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)通常為多糖類成分[5-8]?！吨袊幍洹?020年版[1]亦是以總多糖作為黃精的質(zhì)量評價指標(biāo)。

孟詵等[9]在《食療本草》一書對黃精有“蒸之若生，則刺人咽喉”的記載，可知黃精生用對喉舌具有一定刺激性，接觸過生黃精或其汁液的皮膚會產(chǎn)生瘙癢的感覺，久聞其生味，有刺目之感。故現(xiàn)代臨床用藥多為制黃精。藥典中黃精炮制方法為酒制，九蒸九曬[10]也是黃精傳統(tǒng)炮制方法之一。此外，中藥炮制四大幫之一的建昌幫獨創(chuàng)的炆法炮制黃精傳承十二道古法炮制工藝，頗具特色。江南藥界至今還流傳著“藥不過樟樹不靈，藥不過建昌不行”的諺語。炆黃精與酒黃精、九蒸九曬黃精雖在本質(zhì)上均為生黃精反復(fù)蒸煮而成，但炆黃精在工具、時間及輔料都有其獨特之處，故無論在化學(xué)成分還是藥理方面黃精炮制后均存在差異。吳豐鵬等[11]測定了黃精九蒸九曬前后的總多糖含量及單糖組成結(jié)果表明黃精九蒸九曬后總多糖含量降低，單糖組成物質(zhì)的量比發(fā)生較大改變；萬曉瑩等[12]測定黃精酒制前后的相對分子質(zhì)量及免疫活性表明炮制后相對分子質(zhì)量差異較大且免疫活性增強；馮婧等[13]通過比較不同炮制方法黃精的多糖得率和體外抗氧化實驗結(jié)果表明黃精炮制后抗氧化活性增強；林雨等[14]也通過黃精九蒸九曬后化學(xué)成分變化差異結(jié)果，表明九蒸九曬黃精后化學(xué)成分顯著變化；楊華杰等[15]研究發(fā)現(xiàn)炆黃精相較于酒黃精、九蒸九曬黃精具有更強的抗疲勞及抗氧化作用。

炆即“煴”，出自《集韻》[16]，即沒有火焰的微火慢煮。所謂炆法是指將凈藥材以水浸透后，裝入陶制炆藥壇內(nèi)，加入清水及輔料，置糠火中用文火慢慢煨煮至熟的制法，屬水火共制法。炆制后的黃精黑色如漆，氣味香醇，補益效果極佳。目前炆黃精的研究尚停留在采用GC-MS法、HPLC法測定炆黃精的非糖類化學(xué)成分[17-18]或單糖和寡糖類成分[19]的研究，尚未有對于炆黃精多糖成分的研究。故本實驗以炆黃精為研究對象，采用UV法測定黃精炆制前后總多糖的含量、HPLC法測定黃精炆制前后游離糖的含量；HPGPC法分析炆制前后相對分子質(zhì)量變化以及柱前衍生化（PMP-HPLC）方法對單糖組成進行研究?；邳S精炆制前后糖類成分變化探討炆制后黃精“減毒增效”機制，以期為炆黃精藥效研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

CS101-2E電熱鼓風(fēng)干燥箱，重慶萬達儀器有限公司；HH-S6恒溫水浴鍋，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；MS205DU AB104-N十萬分之一天平，瑞士Mettler-Toledo公司；Milli-Q超純水儀，美國Millipore公司；CTL550臺式低速大容量離心機，湖南湘立科學(xué)儀器有限公司；UV-2550紫外-可見分光光度計、Shimadzu LC-20AT高效液相色譜儀-紫外檢測器、LC-20AD高效凝膠色譜儀-示差折光檢測器，日本島津公司；Waters 2695-Alltech ELSD 2000-高效液相色譜儀-蒸發(fā)光散射檢測器，美國Waters公司。

1.2 材料

1.2.1 對照品 鼠李糖（質(zhì)量分數(shù)99.9%，批號111683-201502）、葡萄糖（質(zhì)量分數(shù)99.9%，批號110833-201707）、木糖（質(zhì)量分數(shù)99.9%，批號111508-201605）、甘露糖（質(zhì)量分數(shù)99.4%，批號140651-201504）、半乳糖（質(zhì)量分數(shù)99.5%，批號190090-201501）、阿拉伯糖（99.5%，批號111506- 200202）、果糖（質(zhì)量分數(shù)99.7%，批號BCY- 000366）、蔗糖（質(zhì)量分數(shù)99.7%，批號GBW10067）、右旋糖酐相對分子質(zhì)量（p，技術(shù)峰位相對分子質(zhì)量，多糖相對分子質(zhì)量的表述方式之一）標(biāo)準(zhǔn)（套）［對照品右旋糖酐D3p9750、右旋糖酐D4p13 050、右旋糖酐D5p36 800、右旋糖酐D6p64 650、右旋糖酐D7p135 350、右旋糖酐D2000p2 000 000，批號140637-201203］均由中國食品藥品檢定研究院提供。

1.2.2 試劑 乙腈，色譜純，美國Anaqua安可化學(xué)；鹽酸、硫酸、甲醇、無水乙醇、石油醚、乙醚、丙酮、三氯甲烷、正丁醇，分析純，上海品究化工有限公司；氯化鈉、硫酸鈉、氫氧化鈉等其他試劑，西隴科學(xué)股份有限公司；麻姑酒，批號F006- 210701，酒精度15.5%，江西鄭記麻姑酒業(yè)有限公司，檢驗結(jié)果符合黃酒《GB/T13662-2018》出廠項目要求。

1.3 樣品信息

本研究所用黃精藥材均由江西省建昌幫藥業(yè)有限公司提供，經(jīng)由江西中醫(yī)藥大學(xué)付小梅教授鑒定為黃精屬百合科黃精Red、滇黃精Coll.et Hemsl.、多花黃精Hua的干燥根莖。炆黃精飲片是參照《江西省中藥飲片炮制規(guī)范》及《建昌幫炮制規(guī)范》項下炆黃精炮制方法制得，黃精藥材編號為M1～M20，炆黃精編號為S1～S20。飲片基本信息見表1。

表1 黃精、炆黃精樣品信息

Table 1 Sample information of Polygonati Rhizoma and stewed Polygonati Rhizoma

基原生黃精炆黃精 編號產(chǎn)地生長年限/年編號來源 黃精M1河南南陽西峽米坪7S1M1炆制成品 M2河南南陽西峽西坪 S2M2炆制成品 M3河南南陽西峽雙龍鎮(zhèn) S3M3炆制成品 M4湖北十堰李家坡 S4M4炆制成品 M5湖北十堰郭家灣 S5M5炆制成品 M6湖北十堰大羊圈 S6M6炆制成品 M7湖北十堰西溝 S7M7炆制成品 M8湖北十堰陳家灣 S8M8炆制成品 M9湖北十堰廟灣 S9M9炆制成品 M10湖南雙鳳鄉(xiāng) S10M10炆制成品 M11湖南油洋鄉(xiāng) S11M11炆制成品 M12湖南羅子山 S12M12炆制成品 M13湖南安化 S13M13炆制成品 M14湖北十堰曹家灣 S14M14炆制成品 M15河南南陽西峽石界河 S15M15炆制成品 M16湖南高橋鄉(xiāng) S16M16炆制成品 滇黃精M17云南5S17M17炆制成品 M18貴州 S18M18炆制成品 多花黃精M19浙江5S19M19炆制成品 M20江西 S20M20炆制成品

2 方法與結(jié)果

2.1 炆法炮制工藝

取原藥，去除雜質(zhì)，洗凈，用清水漂約1 d，取出，瀝干水，放入炆藥罐內(nèi)，每罐裝藥2/3（黃精10 kg，加水10 L，麻姑酒2 kg），加入溫水，上蓋，移至圍灶內(nèi)，堆放干糠，點燃后炆1 d，至藥熟汁盡，取出，干燥；用麻姑酒噴灑均勻，悶潤，待吸盡后，蒸6 h，燜1夜，至轉(zhuǎn)黑色時，取出，干燥至半干，切斜厚片，干燥。

2.2 黃精、炆黃精總多糖含量與游離糖含量測定

2.2.1 黃精炆制前后總多糖含量測定

（1）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密稱取無水葡萄糖對照品適量置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋定容至刻度，搖勻，制得無水葡萄糖溶液質(zhì)量濃度為0.33 mg/mL。精密量取上述對照品溶液0.l、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分別置10 mL具塞刻度試管中，各加水至2.0 mL，搖勻。在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置水浴中保溫10 min，取出，立即置冰水浴中冷卻10 min，取出，以相應(yīng)試劑為空白。照紫外-可見分光光度法，在582 nm波長處測定吸光度（）值。以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），值為縱坐標(biāo)（）進行線性回歸，得回歸方程＝35.912＋0.050 8，2＝0.997 8，結(jié)果表明葡萄糖在33～198 μg/mL線性關(guān)系良好。

（2）黃精總多糖含量測定：取60 ℃干燥至恒定質(zhì)量的本品細粉約0.25 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過，殘渣用80%熱乙醇洗滌3次，每次10 mL，將殘渣及濾紙置燒瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過，殘渣及燒瓶用熱水洗滌4次，每次10 mL，合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取l.0 mL，置10 mL具塞干燥試管中，加水至2.0 mL，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置水浴中保溫10 min，取出，在582 nm波長處測定值。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含無水葡萄糖的質(zhì)量，計算，即得。?。∕12、M18、M19）3批生黃精藥材及對應(yīng)的炆黃精飲片（S12、S18、S19），按上述方法制備供試品溶液，測定，將測得值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算多糖含量，即得。多糖含量測定結(jié)果見表2。

2.2.2 黃精及炆黃精游離糖含量測定

（1）對照品溶液的制備：分別精密稱取減壓干燥至恒定質(zhì)量的果糖、葡萄糖、蔗糖對照品適量，置于同一10 mL量瓶中，加水溶解并稀釋定容至刻度，搖勻。制得果糖質(zhì)量濃度為1.107 mg/mL、葡萄糖質(zhì)量濃度為0.518 mg/mL、蔗糖質(zhì)量濃度為0.712 mg/mL的混合對照品溶液。

（2）供試品溶液的制備：精密稱取本品細粉0.20 g，加50 mL超純水，密塞，稱定質(zhì)量，加熱回流30 min后，放冷，再稱定質(zhì)量，用超純水補足減失的質(zhì)量，搖勻，過0.22 μm水相微孔濾膜，即得供試品溶液。

（3）色譜條件：儀器為Waters2695-Alltech ELSD 2000-高效液相色譜儀-蒸發(fā)光散射檢測器；色譜柱為Sepax HP-Amino（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-水（85∶15）；柱溫30 ℃；體積流量1.0 mL/min；漂移管溫度80 ℃；載氣體積流量2.0 mL/min。

（4）樣品測定：取M12、M18、M19 3批生黃精藥材及對應(yīng)的炆黃精飲片（S12、S18、S19），按上述方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，色譜圖見圖1，計算結(jié)果見表2。

w

A-空白溶劑 B-混合對照品 C-生黃精藥材 D-炆黃精飲片

A-blank solvent B-mixed reference substances C-rawD- stewed

圖1 黃精炆制前后游離糖HPLC圖譜

Fig.1 HPLC of free sugars before and after stewed of

表2 黃精炆制前后多糖及游離糖含量測定結(jié)果(n = 2)

Table 2 Results of polysaccharide contents and free sugar contents before and after stewed of Polygonati Rhizoma (n = 2)

基原規(guī)格編號質(zhì)量分數(shù)/% 總多糖蔗糖果糖葡萄糖 黃精生黃精M1210.502.431.610.67 炆黃精S124.091.4525.952.59 滇黃精生黃精M1811.603.191.090.58 炆黃精S184.692.1430.992.22 多花黃精生黃精M1912.173.043.060.82 炆黃精S194.861.9638.714.36

2.3 黃精及炆黃精Mp測定

2.3.1 對照品溶液的制備 稱取已知p的右旋糖酐p標(biāo)準(zhǔn)（套）D3、D4、D5、D6、D7、D2000系列對照品適量，用0.05 mol/L硫酸鈉水溶液（流動相）溶解制成10 mg/mL的對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備 分別精密稱取黃精藥材、炆黃精飲片粗粉50 g，置圓底燒瓶中，加石油醚（沸點60～90 ℃）150 mL，66 ℃回流提取4 h脫脂。樣品揮干溶劑后加150 mL乙醚浸提過夜，進一步脫脂。揮干溶劑加入150 mL 80%乙醇84 ℃回流4 h。樣品倒去上層液，置于烘箱60 ℃烘干至恒定質(zhì)量，得脫脂黃精。

取上述脫脂黃精，加400 mL超純水，100 ℃水浴2 h，取上層液。再加超純水300 mL，100 ℃水浴2 h。合并2次上層液，濃縮至100 mL，加入適量80%乙醇，沉淀過夜。取醇沉后的上層液，濃縮，加適量80%乙醇，沉淀過夜，重復(fù)2次。將3次沉淀物，用丙酮清洗，置于烘箱中60 ℃烘干至恒定質(zhì)量，得黃精粗多糖。

取上述制備黃精粗多糖，分別加適量超純水復(fù)溶，按4∶1比例加入Sevage［三氯甲烷-正丁醇（4∶1）］試劑，充分震搖，4000 r/min離心（離心半徑為10 cm）20 min，棄去下層變性蛋白沉淀，取上清液，重復(fù)2次以上操作，干燥，得脫蛋白的多糖。加入少許適量的活性炭顆粒與沸石，于電熱套上加熱至微沸，保持微沸約1 h，除去色素，得精多糖。

精密稱定上述制備的精多糖適量，以0.05 mol/L硫酸鈉水溶液溶解并稀釋搖勻，得2.5 mg/mL的供試品溶液。

2.3.3 色譜條件 儀器為LC-20AD-高效液相色譜儀-示差折光檢測器，Lab Solutions含GPC軟件；色譜柱為Shodex Ashipak GF-7M HQ（300 mm×7.6 mm，9 μm）；流動相為0.05 mol/L硫酸鈉水溶液；體積流量0.5 mL/min；柱溫40 ℃；進樣量10 μL；示差折光檢測器池溫40 ℃。

2.3.4 樣品測定 取M12、M18、M19 3批生黃精藥材及對應(yīng)的炆黃精飲片（S12、S18、S19），按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.3.3”項下色譜條件測定，色譜圖見圖2，計算結(jié)果見表3。

通過對黃精及炆黃精中總多糖、游離糖含量、多糖相對分子質(zhì)量大小測定，炆制前后變化見表4，炆制后黃精中總多糖及蔗糖的含量因水解作用降低，作為水解產(chǎn)物的果糖和葡萄糖含量隨之增大；另外，多糖無甜味，但果糖和葡萄糖為目前市場公認的甜味劑，此研究結(jié)果與黃精炆制后甜味增加一致。此外，水解作用會破壞糖苷鍵，將多糖水解為相對分子質(zhì)量較小的結(jié)構(gòu)單位單糖，本研究結(jié)果中作為水解產(chǎn)物的果糖和葡萄糖的含量增加，從側(cè)面印證了黃精多糖在炆法炮制過程中，多糖發(fā)生了較為劇烈的水解。

A-標(biāo)準(zhǔn)品圖譜 B-標(biāo)準(zhǔn)曲線 C-生黃精與炆黃精Mp測定圖譜 D-空白溶劑Mp測定圖譜

表3 黃精炆制前后多糖Mp及其分布(n = 2)

Table 3 Molecular weight and distribution of Polygonati Rhizoma polysaccharides before and after stewed (n = 2)

基原規(guī)格編號重均相對分子質(zhì)量（Mw）/104數(shù)均相對分子質(zhì)量（Mn）/104分布系數(shù)（Mw/Mn） 峰1峰2峰1峰2峰1峰2 黃精生黃精M1290.9354.09360.0053.6691.521.12 炆黃精S1221.6421.4644.9221.2624.391.56 滇黃精生黃精M18102.6094.98756.7274.3611.811.14 炆黃精S1837.4196.0525.0121.7831.091.21 多花黃精生黃精M19151.9849.28022.8906.1906.391.49 炆黃精S1927.4341.80814.1860.9691.931.86

表4 黃精炆制前后總多糖、游離糖含量及相對分子質(zhì)量變化

Table 4 Changes in total polysaccharide content, free sugar content and molecular weight before and after stewed of Polygonati Rhizoma

樣品質(zhì)量分數(shù)/%Mp 總多糖蔗糖果糖葡萄糖峰1峰2 生黃精11.42±0.852.89±0.401.92±1.390.69±0.121 151.76±324.0061.20±27.73 炆黃精4.55±0.401.85±0.3631.88±6.433.06±1.14288.32±79.8131.08±25.55

2.4 黃精及炆黃精單糖組成分析

2.4.1 對照品溶液制備 取減壓干燥至恒定質(zhì)量的甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖適量，置于同一10 mL量瓶中，加水稀釋并定容至刻度，制得含有甘露糖105.8 μg/mL、鼠李糖105.5 μg/mL、葡萄糖102.4 μg/mL、阿拉伯糖107.4 μg/mL、半乳糖104.9 μg/mL的混合對照品溶液。

2.4.2 供試品溶液制備 精密稱取本品0.30 g，置索氏提取器中，加80%乙醇適量，加熱回流提取4 h，棄去液體，藥渣揮干乙醇，濾紙筒拆開置于燒杯中，加水100 mL，回流1 h，混勻，離心，吸取上清液1.0 mL，置西林瓶中，加3.0 mol/L鹽酸溶液0.5 mL，封口，混勻，110 ℃水解3 h，放冷，用3.0 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性。吸取400 μL，加0.5 mol/L 1-苯基-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）甲醇溶液與0.3 mol/L氫氧化鈉溶液各400 μL，混勻，70 ℃水浴反應(yīng)100 min。再加0.3 mol/L鹽酸溶液500 μL，混勻，用三氯甲烷洗滌3次，每次5 mL，棄去三氯甲烷液，水層離心，即得。

2.4.3 色譜條件 儀器為Shimadzu LC-20AT高效液相色譜儀-紫外檢測器；色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.02 mol/L乙酸銨水溶液（20∶80）；檢測波長250 nm；體積流量1.0 mL/min；柱溫30 ℃。

2.4.4 精密度試驗 取1個批次生黃精藥材（M19）與炆黃精飲片（S19），按最終確定“2.4.2”項下方法制樣，按“2.4.3”項下色譜條件連續(xù)分析6次，計算甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖5個峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD分別為0.26%、0.44%、0.24%、0.22%、0.18%和0.92%、2.86%、1.19%、0.57%、2.23%，均低于3%，說明儀器精密度良好。

2.4.5 穩(wěn)定性試驗 取1個批次生黃精藥材（M19）與炆黃精飲片（S19），按最終確定“2.4.2”項下方法制樣，于0、2、4、8、12、24 h按“2.4.3”項下色譜條件分析，計算甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖5個峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD分別為0.21%、0.25%、0.24%、0.24%、0.25%和1.46%、2.49%、1.39%、0.94%、2.24%，樣品溶液穩(wěn)定。

2.4.6 重復(fù)性試驗 取1個批次生黃精藥材（M19）與炆黃精飲片（S19），按最終確定“2.4.2”項下方法平行制樣6份，按“2.4.3”項下色譜條件進行分析，計算甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖5個峰的的相對保留時間和相對峰面積的RSD分別為0.48%、0.75%、0.66%、0.72%、0.70%和1.77%、1.54%、2.38%、1.09%、1.58%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性好。

2.4.7 加樣回收率試驗 精密稱取1個批次生黃精藥材（M19）與炆黃精飲片（S19）0.15 g，9份，置索氏提取器中，加80%乙醇適量，加熱回流提取4 h，棄去液體，藥渣揮干乙醇，濾紙筒拆開置于燒杯中，分別按照各單糖含量的80%、100%、120%加入5種單糖對照品，加水100 mL，回流1 h，混勻，離心，吸取上清液1.0 mL，置西林瓶中，加3.0 mol/L鹽酸溶液0.5 mL，封口，混勻，110 ℃水解3 h，放冷，用3.0 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性。吸取400 μL，加0.5 mol/L PMP甲醇溶液與0.3 mol/L氫氧化鈉溶液各400 μL，混勻，70 ℃水浴反應(yīng)100 min。再加0.3 mol/L鹽酸溶液500 μL，混勻，用三氯甲烷洗滌3次，每次5 mL，棄去三氯甲烷液，水層離心，即得供試品溶液。按“2.4.3”項下色譜條件分析。計算甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖5個峰的平均加樣回收率分別為95.68%、97.48%、99.14%、97.57%、99.60%，RSD分別為2.42%、2.56%、2.18%、2.67%、2.55%，表明該方法準(zhǔn)確度好。

2.4.8 樣品測定 取上述20批生黃精藥材及對應(yīng)的炆黃精飲片，按上述供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件，注入高效液相色譜儀測定，色譜圖見圖3，測定結(jié)果見表5。

2.5 黃精及炆黃精單糖組成聚類分析

利用Hiplot可視化平臺，對黃精及炆黃精單糖組成進行聚類分析，結(jié)果如圖4所示，可以明顯看出，生黃精藥材與炆黃精飲片明顯分為2大類（A類生黃精；B類炆黃精），隨著熱圖中顏色的增加，表明單糖物質(zhì)的量比的值越大，說明黃精炆制前后存在明顯差異。生黃精藥材中葡萄糖物質(zhì)的量比占比最高，炆制后半乳糖物質(zhì)的量比占比最高，可能是高溫加熱使得糖發(fā)生了異構(gòu)化反應(yīng)所致[20]，但具體反應(yīng)機制還需進一步研究。如表6所示，炆制前后黃精甘露糖、鼠李糖以及阿拉伯糖平均物質(zhì)的量比變化無顯著性差異，而黃精炆制前后葡萄糖的物質(zhì)的量比顯著降低，半乳糖物質(zhì)的量比明顯升高，說明炆法炮制對于多糖的單糖組成發(fā)生了改變，進一步影響多糖的生物活性。

A-空白圖譜 B-5個單糖混合對照品圖譜 C-生黃精 D-炆黃精 1-甘露糖 2-PMP試劑峰 3-鼠李糖 4-葡萄糖 5-半乳糖 6-阿拉伯糖

表5 黃精炆制前后單糖組成物質(zhì)的量比(n = 2)

Table 5 Substance ratio of monosaccharides Polygonati Rhizoma before and after stewed (n = 2)

樣品單糖組成及物質(zhì)的量比樣品單糖組成及物質(zhì)的量比 甘露糖鼠李糖葡萄糖半乳糖阿拉伯糖甘露糖鼠李糖葡萄糖半乳糖阿拉伯糖 M10.209 60.118 70.500 40.151 80.019 5S10.253 40.162 40.058 20.493 00.033 1 M20.277 60.122 30.397 50.178 30.024 3S20.279 40.152 10.061 00.470 30.037 1 M30.204 80.095 10.522 00.157 30.020 7S30.341 30.130 40.065 20.431 60.031 4 M40.213 60.090 70.527 80.148 10.019 9S40.321 20.145 20.064 00.435 30.034 2 M50.258 30.096 80.464 90.160 00.020 0S50.281 80.131 90.071 00.478 10.037 2 M60.267 10.067 40.550 10.100 80.014 5S60.279 80.123 30.080 30.474 30.042 4 M70.291 60.265 70.245 40.147 80.049 5S70.351 70.239 00.056 70.318 30.034 3 M80.311 80.112 50.454 60.106 40.014 7S80.338 80.150 40.077 10.393 90.039 8 M90.282 20.093 30.441 20.157 70.025 6S90.366 50.136 90.064 30.397 20.035 2 M100.417 70.130 40.437 50.283 60.030 9S100.288 70.163 30.054 40.457 10.036 4 M110.463 70.169 70.450 30.195 20.021 1S110.350 60.170 90.058 70.384 80.034 9 M120.333 20.112 90.410 50.128 10.015 2S120.339 10.157 20.054 30.416 30.033 1 M130.334 00.078 00.429 80.141 50.016 7S130.259 70.098 60.036 60.383 60.021 5 M140.274 00.104 30.478 90.127 80.014 9S140.319 60.157 20.080 70.405 60.036 8 M150.215 40.119 50.442 30.190 90.031 8S150.279 20.164 80.062 50.454 50.039 0 M160.241 70.231 40.409 60.093 60.023 8S160.328 00.146 00.107 10.381 40.037 5 M170.039 00.095 30.711 50.140 50.013 6S170.088 90.196 30.049 40.641 60.023 9 M180.021 20.346 20.554 40.146 00.032 3S180.076 70.249 90.040 50.594 00.038 8 M190.032 90.145 80.574 90.234 40.012 0S190.016 00.173 50.274 50.504 80.031 3 M200.050 00.189 30.494 40.240 00.026 2S200.064 00.252 90.064 20.573 00.045 9

3 討論

3.1 黃精炆制“麻舌感”消除機制分析

關(guān)于黃精生用產(chǎn)生“麻舌感”的描述，歷代醫(yī)籍均有記載[21-22]。有文獻表明[23]黃精產(chǎn)生麻舌感的主要成分為黏液質(zhì)，是一類由黃精多糖與某類蛋白質(zhì)形成的復(fù)合物（凝聚素）。據(jù)民間臨床應(yīng)用反饋，炆黃精口感、色澤俱佳，無麻舌刺激之感。通過對黃精炆制前后總多糖含量測定結(jié)果表明，炆黃精總多糖含量明顯低于生黃精，推測是在炆制過程中，黏液質(zhì)成分被破壞，從而麻舌感減輕。此外本實驗對黃精及炆黃精游離糖含量進行了測定，發(fā)現(xiàn)黃精炆制后游離糖含量顯著升高，游離糖尤其是果糖具有較高甜度，可以起到改善口感，調(diào)和諸味的作用，在一定程度上也降低了藥材對喉舌的刺激性。

A-生黃精 B-炆黃精

表6 黃精炆制前后單糖組成平均物質(zhì)的量比比較

Table 6 Comparison of the average substance ratio of monosaccharide composition before and after stewed of Polygonati Rhizoma

規(guī)格平均物質(zhì)的量比 甘露糖鼠李糖葡萄糖半乳糖阿拉伯糖 生黃精0.236 9±0.122 00.139 3±0.070 20.474 9±0.091 10.161 5±0.048 00.022 4±0.008 9 炆黃精0.261 2±0.108 20.165 1±0.041 00.074 0±0.049 60.454 4±0.079 20.035 2±0.005 6

3.2 黃精炆制后增效機制分析

有關(guān)藥理藥效實驗表明[24-28]，黃精炮制后確實可增強其補益之效。黃精多糖[7]具有抗氧化、抗疲勞、提高免疫力等作用，是黃精的主要活性成分。有研究報道[29]多糖藥效的發(fā)揮與其相對分子質(zhì)量有關(guān)，相對分子質(zhì)量過大或過小均無法被人體有效利用，通常是中等相對分子質(zhì)量多糖藥效最佳[11]。現(xiàn)階段常有學(xué)者以物理法、降解法、和衍生化法等手段[29]人為地降低多糖相對分子質(zhì)量。本研究中采用HPGPC法對黃精炆制前后多糖相對分子質(zhì)量分布進行測定，結(jié)果表明生黃精多糖相對分子質(zhì)量w主要分布在40 930～92 800，與萬曉瑩等[12]測定黃精酒制前后的相對分子質(zhì)量結(jié)果存在差異，推測可能是由于品種不同。黃精炆制后多糖相對分子質(zhì)量w主要分布在9300～18 080，呈顯著下降趨勢，說明黃精中大相對分子質(zhì)量多糖經(jīng)炆制后發(fā)生了水解，服用后人體吸收率提高，推測此為黃精炮制后“滋陰潤肺，補腎壯陽”之效增強的機制之一。

《神農(nóng)本草經(jīng)》[30]曾云：“（黃精）多年不老，白發(fā)更黑，齒落更生”；《名醫(yī)別錄》[31]也指出黃精“補中益氣，久服輕身，延年不饑”。作為藥食同源的中藥材，黃精可有效延緩衰老，歷來有“仙人余糧”的美譽。

本實驗采用HPLC-PDA結(jié)合衍生化方法進行黃精多糖炆制前后的單糖組成，測定結(jié)果表明生黃精多糖的單糖組成平均物質(zhì)的量比為甘露糖-鼠李糖-葡萄糖-半乳糖-阿拉伯糖（10∶6∶25∶7∶1）；炆制后黃精多糖的單糖組成平均物質(zhì)的量比為7∶5∶1.7∶14∶1。吳豐鵬等[11]測定了黃精九蒸九制前后的總多糖含量及單糖組成，同時測定了體外抗氧化活性發(fā)現(xiàn)炮制后多糖含量較生品降低了72%（炆黃精降低60%），半乳糖物質(zhì)的量比同樣顯著提高，且抗氧化活性增強，說明黃精炆制或九蒸九制化學(xué)成分變化趨勢相似，但炆黃精可更大程度保留多糖成分；炆制后黃精多糖葡萄糖物質(zhì)的量比降低，半乳糖物質(zhì)的量比升高，因此，可推測黃精炆制可使抗氧化（抗衰老）作用增強。

3.3 小結(jié)與展望

炆黃精作為建昌幫主打5大炆藥之一，其歷史悠久，療效顯著，老少皆宜。對炆黃精的開發(fā)利用不僅具有極大的市場價值，也有利于傳統(tǒng)中醫(yī)藥文化的傳承與發(fā)揚。因此本研究以炆黃精為研究對象，系統(tǒng)分析了炆制前后多糖含量、相對分子質(zhì)量及單糖組成，對黃精炆制藥效變化機制進行初步探討，可為后續(xù)找尋炆黃精藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，完善相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等提供思路。多糖為具有復(fù)雜空間構(gòu)型的大分子化合物[32]，本實驗僅通過上述研究內(nèi)容尚不足以闡明黃精多糖的結(jié)構(gòu)與藥效關(guān)系，還需要進一步對多糖糖苷鍵類型、分子鏈及空間構(gòu)象等進行更深入的探究，從而為炆黃精及其相關(guān)衍生產(chǎn)品的深度開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Exploring the differences ofbefore and after stewing based on carbohydrate components

ZHAN Hui-hui1, YAO Fang-cheng2, YI Bin2, WEI Hui-zhen1, 3, CHEN Xi-yong2, LYU Shang1, CHEN Hua-shi2,JIN Hao-xin3, RAO Yi1, 3

1.Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004, China 2.Jianchangbang Pharmaceutical Limited Company, Fuzhou 344700, China 3.National Engineering Research Center for Manufacturing Technology of Traditional Chinese Medicine Solid Preparation, Nanchang 330006, China

Based on the differences in the changes of carbohydrate components before and after the stewed of Huangjing (), the mechanism of “detoxification and efficiency enhancement” after the stewed ofwas discussed.The UV method was used to determine the total polysaccharide content before and after the stewed of; The free sugar content before and after the stewed ofwas determined by HPLC-ELSD; The relative molecular mass of polysaccharides before and after the stewed ofwas analyzed by the HPGPC-RI method; The monosaccharide composition ofpolysaccharides was determined and analyzed by HPLC-PDA.After stewing, the content of total polysaccharides decreased by about 60%; The content of sucrose in free sugar decreased by 35%, the content of fructose increased by 22 times, and the content of glucose increased by 4.4 times; the two peaks of relative molecular mass decreased by 1-5 times after steaming polysaccharide before and after the stewed ofs composed of mannose, rhamnose, glucose, galactose, arabinose, and the molar ratio of the monosaccharide ofwas mannose-rhamnose-glucose-galactose-arabinose (10:6:25:7:1); The molar ratio after stewing was 7:5:1.7:14:1.The stewed method has a great influence on the carbohydrate components of, and the polysaccharide will be hydrolyzed and the structure will be changed after stewed so that the numbness ofon the tongue disappears and the medicinal effect is enhanced.

stewed;polysaccharides; polysaccharide content; free sugars; relative molecular weight; monosaccharide composition

R283.1

A

0253 - 2670(2022)09 - 2687 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.09.011

2021-11-18

江西省中管局科技項目（2020B0385）

詹慧慧（1996—），女，碩士研究生，從事藥物質(zhì)量控制研究。Tel: 16679095248 E-mail: 1376017584@qq.com

通信作者：饒 毅，博士生導(dǎo)師，教授，從事中藥質(zhì)量控制研究。Tel: 13807041192 E-mail: raoyi99@126.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]