李曉坤，王寶維*，張名愛，凡文磊，孔 敏，岳 斌，汪 超

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)質(zhì)水禽研究所，國(guó)家水禽產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系營(yíng)養(yǎng)與飼料研究室，山東青島 266109；2.重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 402460）

膽堿又稱維生素B、增蛋素等，屬水溶性維生素，在動(dòng)植物組織中分布廣泛。在飼糧中添加適宜水平的膽堿不僅能增強(qiáng)畜禽體質(zhì)、防止由于脂肪在肝臟和腎臟中過度沉積所引發(fā)的各類疾病，還可以提高生產(chǎn)能力、改善畜禽產(chǎn)品質(zhì)量。因此，研究膽堿對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝繁殖性能、生殖激素及蛋品質(zhì)的影響具有重要意義。張文旭等研究表明，飼糧中添加膽堿可顯著提高生長(zhǎng)期青農(nóng)灰鵝的生長(zhǎng)性能、屠宰性能及表觀利用率。研究表明，過高的膽堿攝入會(huì)導(dǎo)致蛋雞產(chǎn)蛋率降低，并提高料蛋比。翟欽輝等研究表明，當(dāng)?shù)半u飼糧中缺少膽堿時(shí)，會(huì)出現(xiàn)脫腱病、產(chǎn)蛋比例降低及蛋重減小等。倪玉嬌研究表明，在蛋雞產(chǎn)蛋高峰期的基礎(chǔ)飼糧中添加膽堿對(duì)蛋雞平均采食量及料蛋比具有顯著影響。馬維英等研究表明，當(dāng)基礎(chǔ)飼糧中膽堿添加500 mg/kg 時(shí)，蛋殼強(qiáng)度及蛋形指數(shù)達(dá)到最大值，同時(shí)蛋白高度及哈氏單位都呈提高趨勢(shì)。目前，我國(guó)關(guān)于種禽膽堿的研究主要集中于雞和鴨，對(duì)于種鵝的膽堿需要量研究尚處于空白。本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加不同水平膽堿對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝繁殖性能、蛋品質(zhì)及血液生殖激素的影響，篩選種鵝產(chǎn)蛋期飼糧中膽堿的適宜添加量，為豐富我國(guó)種鵝營(yíng)養(yǎng)需求量數(shù)據(jù)庫(kù)提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼糧 選擇34 周齡體況相似的種鵝（五龍鵝）180 只，隨機(jī)分為6 組（0、200、400、600、800、1 000 mg/kg 膽堿），每組6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)中4 只母鵝1 只公鵝。預(yù)試期1 周，正試期10 周，采用開放式鵝舍分欄飼養(yǎng)。所有試驗(yàn)種鵝均由青島農(nóng)業(yè)大學(xué)優(yōu)質(zhì)水禽研究所育種基地提供，氯化膽堿采購(gòu)于山東巨佳生物科技有限公司（有效成分含量70%）。試驗(yàn)用基礎(chǔ)飼糧以玉米和豆粕為主要原料，將氯化膽堿換算成純量添加，參照NRC（1994）家禽營(yíng)養(yǎng)需要量中推薦的種鵝飼糧營(yíng)養(yǎng)水平設(shè)計(jì)配方。種鵝的飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)種鵝皆采用地面開放式飼養(yǎng)方式，不限飲水，自主采食，每日07:00 和16:00 各喂料1 次（可以依據(jù)采食情況臨時(shí)調(diào)整飼糧添加量）。試驗(yàn)前要保證種鵝鵝舍及水槽料槽干凈衛(wèi)生，且進(jìn)行嚴(yán)格的刷洗并消毒；正試期內(nèi)，每隔3 d 殺菌消毒1 次。

1.3 繁殖性能的測(cè)定 每日08:00 撿蛋，記錄當(dāng)日產(chǎn)蛋數(shù)量、合格蛋數(shù)、種蛋重量以及采食量。每組隨機(jī)挑選新鮮種蛋（10 d 內(nèi)產(chǎn)出）70 個(gè)，6 組共420 個(gè)，每30 d孵化1 次，試驗(yàn)期間總共進(jìn)行2 次孵化，分別記錄孵化指標(biāo)。

1.4 血清生殖激素的測(cè)定 試驗(yàn)期結(jié)束時(shí)，隨機(jī)選取每組各個(gè)重復(fù)體況近似的母鵝2 只，翅靜脈取血10 mL，3 000 r/min 離心10 min 后，制得血清樣品，分裝后進(jìn)行冷凍保存。采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定血清孕酮、睪酮、黃體生成素、雌二醇含量，相關(guān)指標(biāo)的試劑盒為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。

1.5 蛋品質(zhì)的測(cè)定 蛋重、蛋白高度、蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度、蛋黃顏色、蛋殼顏色、哈氏單位及蛋黃比率均按照《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語(yǔ)和度量統(tǒng)計(jì)方法》（NY/T 823-2004）測(cè)定與計(jì)算。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA，LSD）、雙變量相關(guān)性分析和Duncan's 多重比較檢驗(yàn)方法，分析種鵝飼糧中不同膽堿添加水平的影響及各指標(biāo)間的差異性；對(duì)不同膽堿水平下的繁殖性能進(jìn)行二次曲線擬合，獲得最適添加量。

2 結(jié)果

2.1 不同膽堿水平對(duì)種鵝繁殖性能的影響 由表2 可知，飼糧中添加不同膽堿添加水平對(duì)鵝種蛋受精率和健雛率的影響均不顯著。200～800 mg/kg 組料蛋比低于0 mg/kg組（＜0.05）；400～800 mg/kg 組種蛋合格率高于200 mg/kg組和1 000 mg/kg 組（＜0.05）、0 mg/kg 組（＜0.01），200、800 mg/kg 組種蛋合格率高于0 mg/kg 組（＜0.05）；600 mg/kg 組產(chǎn)蛋率高于0、200 mg/kg 組（＜0.05）；400 mg/kg 組孵化率高于0、800 mg/kg 組（＜0.05）。

表2 不同膽堿水平對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝繁殖性能的影響 %

建立回歸方程：

=28.720+0.048-3.779E（=0.227，P=0.014）

=89.358+0.033-2.702E（=0.737，P＜0.01）

=87.836+0.039-3.806E（=0.337，P＜0.01）

由上述回歸曲線方程可知，飼糧中膽堿添加水平610.659 mg/kg 時(shí)，種蛋合格率較高；當(dāng)飼糧中膽堿添加量為600 mg/kg 時(shí)，料蛋比、產(chǎn)蛋率、受精率、孵化率及健雛率均達(dá)最佳，此時(shí)種鵝繁殖性能較為良好。從繁殖性能方面分析，建議在產(chǎn)蛋期種鵝飼糧中添加600 mg/kg 膽堿。

2.2 不同膽堿水平對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝血清生殖激素的影響由表3 可見，飼糧中不同膽堿添加水平對(duì)血清中孕酮、睪酮、雌二醇含量有極顯著影響，對(duì)黃體生成素含量無顯著影響。600、800 mg/kg 組孕酮含量高于0～400 mg/kg組（＜0.01）；600、800 mg/kg 組睪酮含量高于0 mg/kg組（＜0.01）、200～600 mg/kg 組（＜0.05）；600、800 mg/kg 組雌二醇含量高于0 mg/kg 組（＜0.01）、200～600 mg/kg（＜0.05）。綜上結(jié)果可知，在飼糧中膽堿添加水平為600 mg/kg 時(shí)，種鵝血清中孕酮、睪酮、雌二醇含量均能達(dá)到最高。

表3 不同膽堿水平對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝生殖激素的影響

2.3 不同膽堿水平對(duì)種蛋蛋品質(zhì)的影響 由表4 可知，飼糧中添加不同水平的膽堿對(duì)于種蛋哈氏單位、蛋白高度、蛋殼強(qiáng)度和蛋形指數(shù)有顯著影響，對(duì)蛋重、蛋殼顏色、蛋黃比率、蛋殼厚度、蛋黃顏色無有顯著影響。600 mg/kg 蛋形指數(shù)高于0、1 000 mg/kg 組（＜0.05）。600 mg/kg 組蛋殼強(qiáng)度高于0 mg/kg 組（＜0.01）、200 mg/kg組（＜0.05），而200～800 mg/kg 這4 組高于0 mg/kg組（＜0.05）。200、600 mg/kg 組哈氏單位高于0、1 000 mg/kg 組（＜0.01），400、800 mg/kg 組高于0 mg/kg組（＜0.05）。以上結(jié)果表明，種鵝產(chǎn)蛋期飼糧中膽堿添加水平為600 mg/kg 時(shí)，種蛋蛋形指數(shù)、哈氏單位、蛋白高度、蛋殼強(qiáng)度均可達(dá)到最大值。

表4 不同膽堿水平對(duì)種蛋品質(zhì)的影響

2.4 膽堿干預(yù)條件下種鵝繁殖性能與血清生殖激素相關(guān)性分析 由表5 可知，孕酮與種蛋合格率顯著相關(guān)；睪酮與種蛋合格率及產(chǎn)蛋率極顯著相關(guān)，與孵化率顯著相關(guān)；雌二醇與產(chǎn)蛋率、種蛋合格率及孵化率極顯著相關(guān)。

表5 飼糧中膽堿添加水平對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝繁殖性能與血清生殖激素的相關(guān)性

3 討 論

3.1 不同膽堿水平對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝繁殖性能的影響 有研究表明，在低水平蛋白型或玉米-豆粕型飼糧中，或者飼糧中缺乏含硫氨酸時(shí)，適宜的補(bǔ)充膽堿可以顯著提高產(chǎn)蛋率和料蛋率，達(dá)到最佳生產(chǎn)狀態(tài)。馬維英等對(duì)紹興鴨的研究表明，膽堿對(duì)產(chǎn)蛋期種鴨的繁殖性能有一定影響，尤其顯著影響平均蛋重、產(chǎn)蛋率，當(dāng)飼糧膽堿添加量為500 mg/kg 時(shí)，種鴨的生產(chǎn)性能指標(biāo)較為良好。秦永平等研究表明，飼糧中添加膽堿可顯著提高產(chǎn)蛋率，提高飼料報(bào)酬，當(dāng)膽堿實(shí)際添加量換算成純量為600 mg/kg 時(shí)最佳。廖杰研究表明，在蛋雞基礎(chǔ)飼糧中加入1 042 mg/kg 膽堿能顯著提高飼料轉(zhuǎn)化率及產(chǎn)蛋量，降低畸形破殼蛋的比例。崔明明研究顯示，飼糧中添加氯化膽堿能夠減少破殼蛋和沙皮蛋的比例，提高雞蛋合格率。倪玉嬌研究表明，在處于產(chǎn)蛋高峰期蛋雞的低能量基礎(chǔ)飼糧中添加膽堿，對(duì)商品蛋雞平均采食量及料蛋比有顯著影響，當(dāng)飼糧中膽堿添加水平為300 mg/kg 時(shí)，商品蛋雞的經(jīng)濟(jì)收益為最佳。本研究結(jié)果顯示，在種鵝的基礎(chǔ)飼糧中加入膽堿對(duì)種蛋受精率和健雛率沒有顯著影響，當(dāng)飼糧中膽堿添加水平為600 mg/kg 時(shí)，可顯著減低種鵝的料蛋比例，顯著提高了種鵝的產(chǎn)蛋率、蛋合格率以及孵化率。綜合本研究結(jié)果，添加膽堿對(duì)種鵝的繁殖性能有一定影響，但膽堿添加水平與前人研究結(jié)果差異較大，可能與膽堿純度、家禽種類或飼養(yǎng)模式相關(guān)。

3.2 不同膽堿水平對(duì)產(chǎn)蛋期種鵝血液生殖激素的影響有研究表明，生殖激素通過下丘腦-垂體-性腺軸的調(diào)控在雞蛋的產(chǎn)生過程中發(fā)揮著重要作用。郭禹等研究表明，在下丘腦-垂體-性腺軸的調(diào)控系統(tǒng)中存在正反饋和負(fù)反饋調(diào)節(jié)，而下丘腦及垂體的受體表達(dá)水平與其負(fù)反饋調(diào)節(jié)相關(guān)。王芳等研究表明，許多中藥及西藥都可提高受體表達(dá)或者增強(qiáng)激素水平，從而達(dá)到提高產(chǎn)蛋性能。劉禹辰等研究表明，下丘腦-垂體-性腺軸可以受維生素、激素等刺激以提高產(chǎn)蛋率以及種蛋合格率。趙曉鈺等研究結(jié)果顯示，家禽繁殖性能受血液中生殖激素含量的影響。當(dāng)血液中黃體生成素與雌二醇含量較高時(shí)，種禽產(chǎn)蛋性能較好。Reddy 等研究指出，血液中孕酮濃度與蛋雞產(chǎn)蛋率具有相關(guān)性，當(dāng)血清孕酮濃度高時(shí)，蛋雞產(chǎn)蛋率也較高。本研究結(jié)果顯示，隨著飼糧膽堿添加水平的提高，血液中睪酮、孕酮、雌二醇、黃體生成素濃度基本呈先升高后降低的趨勢(shì)，當(dāng)膽堿的添加水平為600 mg/kg 時(shí)，上述激素濃度皆達(dá)到最高值；其中睪酮、孕酮、雌二醇與產(chǎn)蛋率和孵化率有顯著相關(guān)性。膽堿是B 族維生素的一種，其作用機(jī)理可能是參與下丘腦-垂體-性腺軸的調(diào)控系統(tǒng)中的正反饋或負(fù)反饋調(diào)節(jié)，提高受體水平或直接提高激素水平，從而影響種鵝生產(chǎn)性能。

3.3 不同水膽堿水平對(duì)產(chǎn)蛋期種蛋品質(zhì)的影響 劉松等研究顯示，在蛋雞飼糧中加入氯化膽堿可以提高雞蛋蛋殼厚度、強(qiáng)度及蛋黃顏色，綜合繁殖性能考慮，蛋雞飼糧中氯化膽堿最適量為1 000 mg/kg。蛋黃顏色受禽種類以及飼糧中著色物質(zhì)含量影響。董淑楠等研究顯示，蛋禽本身不能合成色素，蛋黃顏色與飼糧中類胡蘿卜素含量有關(guān)，蛋黃顏色的改變可以體現(xiàn)蛋的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。Ruiz 等研究表明，蛋黃顏色未受到飼糧中膽堿的影響。王晶研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中膽堿添加水平為2 960 mg/kg 時(shí)，能夠極顯著降低蛋黃顏色。秦永平等研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加膽堿后能夠顯著提高產(chǎn)蛋率及蛋殼品質(zhì)，但對(duì)蛋重沒有顯著影響。馬維英等研究表明，膽堿可能通過提高甲基代謝間接參與肉堿合成進(jìn)而影響哈氏單位和蛋白高度來提高鴨蛋的新鮮程度。本研究結(jié)果顯示，膽堿對(duì)蛋殼強(qiáng)度、蛋形指數(shù)、蛋白高度、哈氏單位有顯著影響，可能與膽堿被氧化后最終以S-腺苷甲硫氨酸為活性甲基供體參與甲基代謝活動(dòng)相關(guān)；添加膽堿對(duì)蛋黃顏色的影響不顯著，可能因?yàn)榈包S顏色主要受遺傳及飼糧中所含著色物質(zhì)有關(guān)。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，600 mg/kg 膽堿可以顯著降低種鵝料蛋比，顯著提高產(chǎn)蛋率、種蛋合格率及孵化率，顯著改善蛋形指數(shù)、蛋白高度、蛋殼強(qiáng)度和哈氏單位；適宜膽堿水平能顯著提高產(chǎn)蛋期種鵝血清生殖激素中孕酮、睪酮、雌二醇含量，并且生殖激素水平與繁殖性能具有顯著相關(guān)性。建議產(chǎn)蛋期種鵝飼糧中的膽堿添加水平為600 mg/kg。