王航天，范倩倩，李 焱，楊莉?qū)?/p>

(西安醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，陜西 西安 710021)

人類(lèi)在長(zhǎng)期與惡性腫瘤斗爭(zhēng)過(guò)程中，持續(xù)不斷地進(jìn)行高效低毒的抗癌藥物的研發(fā)。咪唑類(lèi)生物配體能與生物酶和受體等形成氫鍵、發(fā)生疏水作用和π-π相互作用，且具有抗癌、抗微生物和抗氧化的藥用特性，因而被人們廣泛關(guān)注[1]。作為人體的內(nèi)源性金屬，銅的有機(jī)配體配合物能夠與DNA相互作用，它們具有較好的生物氧化還原活性和較強(qiáng)的核堿親和力[2-3]。探究金屬配合物與DNA之間的相互作用方式，對(duì)識(shí)別DNA特異結(jié)構(gòu)、設(shè)計(jì)和篩選抗癌金屬藥物，以及研究DNA的水解斷裂等都有著重要意義[4-6]。我們?cè)O(shè)計(jì)合成了聯(lián)咪唑硝基衍生物—N,N’-二甲基-5-硝基-2,2’-聯(lián)咪唑(NO2Me2biim, L) (圖1)，并以它為配體，得到了其過(guò)渡金屬銅(Ⅱ)配合物，采用紫外-可見(jiàn)光譜(Uv-vis)、熒光光譜、相對(duì)黏度等分析方法初步研究了配體及其配合物與小牛胸腺DNA(CT-DNA)的相互作用。

圖1 —N,N’-二甲基-5-硝基-2,2’-聯(lián)咪唑結(jié)構(gòu)式

1 材料與方法

1.1 儀器試劑

德國(guó)EA 元素分析系統(tǒng)公司VARI-EL型元素分析儀，上海大譜儀器有限公司DDS-307型電導(dǎo)儀，德國(guó) Brucker 公司EQUINOX55 型紅外光譜儀，日本島津公司UV-1800紫外分光光度計(jì)，日本日立公司F-4500熒光分光光光度計(jì)，上海申玻玻璃儀器廠烏氏黏度計(jì)。

小牛胸腺DNA(CT-DNA)，三羥甲基氨基甲烷(Tris)均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，Cu(ClO4)2結(jié)晶水合物自制，按文獻(xiàn)方法合成配體NO2Me2biim[7]，其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭麴s水為二次蒸餾水。

1.2 配合物的合成

稱(chēng)取 0.5 mmol 自制的Cu(ClO4)2結(jié)晶水合物溶于甲醇中，加入 15 mL 0.5 mmol 配體NO2Me2biim的甲醇溶液，室溫下攪拌反應(yīng) 1 h，過(guò)濾，濾液靜置 14 d，析出綠色球狀晶體。

1.3 配體及配合物與CT-DNA相互作用實(shí)驗(yàn)

配體及配合物與CT-DNA相互作用的紫外光譜、熒光光譜及黏度法實(shí)驗(yàn)均采用文獻(xiàn)已報(bào)道的經(jīng)典方法進(jìn)行[8]。

2 結(jié)果與討論

2.1 配合物的組成與結(jié)構(gòu)表征

配合物的化學(xué)式、元素分析及摩爾電導(dǎo)率(Λm)列于表1。

表1 配合物的元素分析及摩爾電導(dǎo)率

室溫條件下，配合物乙醇溶液的摩爾電導(dǎo)率值表明配合物在乙醇中是非電解質(zhì)[9]，即銅離子與配體和高氯酸根離子配位形成中性配合物。

表2 配體及配合物的主要紅外吸收頻率(cm-1)及歸屬

由圖2紫外-可見(jiàn)吸收光譜可見(jiàn)，配體中咪唑環(huán)共軛體系的π→π*躍遷使其在 240 nm 和 336 nm 處表現(xiàn)出兩個(gè)主要吸收峰。配體與金屬離子發(fā)生配位形成配合物后，相應(yīng)的紫外吸收峰的強(qiáng)度發(fā)生了明顯變化。

圖2 配體和配合物的紫外吸收光譜

綜合上述IR、摩爾電導(dǎo)率、UV-Vis和元素分析結(jié)果，推測(cè)配合物組成為[Cu(NO2Me2biim)2(ClO4)2]，高氯酸根和配體都與金屬進(jìn)行單齒配位形成四配位的銅配合物[12]，結(jié)構(gòu)如圖3所示。

圖3 [Cu(NO2Me2biim)2(ClO4)2]結(jié)構(gòu)式

2.2 配體及Cu(Ⅱ)配合物與DNA相互作用紫外吸收光譜

圖4表明，當(dāng)配體和配合物溶液的濃度一定時(shí)，二者的最大紫外特征吸收峰隨著CT-DNA加入量的增加均表現(xiàn)為減色效應(yīng)，而Cu(Ⅱ)配合物在 240 nm 附近的吸收峰卻又表現(xiàn)為增色效應(yīng)，與配體不同的是位移和強(qiáng)度都發(fā)生了一定的變化。此現(xiàn)象發(fā)生的原因可能是當(dāng)配合物與DNA相互作用時(shí)，破壞了配合物聚集體及配合物分子之間的氫鍵[13-14]，同時(shí)配合物的紫外吸收還出現(xiàn)1個(gè)等吸收點(diǎn)，等吸收點(diǎn)的產(chǎn)生代表了配合物與DNA形成了復(fù)合物[15]。吸收減弱及出現(xiàn)等吸收點(diǎn)是靜電作用或嵌插作用的特征。

圖4 配體L及Cu(Ⅱ)配合物與DNA作用的紫外吸收光譜

2.3 配體及Cu(Ⅱ)配合物與DNA相互作用的熒光光譜

配體的熒光強(qiáng)度隨著DNA濃度的增大而減小，熒光發(fā)射峰發(fā)生了較大的紅移，而Cu(Ⅱ)配合物的熒光光譜強(qiáng)度則增大，如圖5所示。研究表明，當(dāng)小分子與DNA相互作用，其熒光光譜減弱甚至發(fā)生猝滅，可能是二者在水溶液中互相碰撞發(fā)生能量交換所致。

圖5 配體L及Cu(Ⅱ)配合物與DNA作用的熒光發(fā)射光譜

2.4 配體及其配合物與 DNA 相互作用的黏度

DNA相對(duì)黏度隨配合物濃度的增加而逐漸減小，隨配體濃度的增加而逐漸增大，如圖6所示。小分子以插入模式與DNA作用，使DNA雙螺旋鏈增長(zhǎng)，黏度增大；以部分插入方式與DNA作用，DNA雙螺旋發(fā)生扭曲，黏度減小[16]。

圖6 DNA的相對(duì)黏度隨配體及Cu(Ⅱ)配合物加入量的變化

3 結(jié)論

合成了N,N’-二甲基-5-硝基-2,2’-聯(lián)咪唑的銅(Ⅱ)配合物并對(duì)其進(jìn)行了性質(zhì)表征，確定了配合物的可能結(jié)構(gòu)。與DNA相互作用的研究結(jié)果表明，配體及其Cu(Ⅱ)配合物與DNA相互作用模式分別為典型插入和部分插入模式，配體結(jié)構(gòu)的平面性比配合物更好，所以其與DNA的相互作用力較強(qiáng)。