宗西翠，張翼 綜述，方彭華，陳玉清 審校

1.南京中醫(yī)藥大學翰林學院醫(yī)學院實驗實訓中心，江蘇 泰州 225300；2.南京師范大學生命科學學院 生物化學與生物制品研究所，江蘇 南京 210034；3.南京中醫(yī)藥大學 第一臨床醫(yī)學院，江蘇 南京 210023

抗菌肽是由特定基因編碼并誘導產(chǎn)生的一類多肽，具有相對分子質(zhì)量小、熱穩(wěn)定性高、作用機制獨特、殺菌范圍廣等特點，同時在刺激傷口愈合、激素調(diào)節(jié)及免疫調(diào)節(jié)等方面有重要作用。當前耐藥性問題日趨突出，對新型抗菌藥物需求十分迫切，抗菌肽引起耐藥的可能性較小，具有較好的應(yīng)用及開發(fā)前景。

抗菌肽的生產(chǎn)方法主要有3 種：①利用化學方法從生物有機體內(nèi)直接提取天然抗菌肽；②化學方法合成抗菌肽；③利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)抗菌肽。生物體中抗菌肽類型豐富，但含量極低，且相對分子質(zhì)量較小，分離純化困難，因此直接從機體中提取天然抗菌肽的開發(fā)研究雖取得了一定進展，但尚無法進行規(guī)?；a(chǎn)。根據(jù)已知氨基酸序列，利用化學合成法合成抗菌肽雖然起步較早，技術(shù)亦較為成熟，但由于提純過程復雜、工作量大、產(chǎn)物消旋、側(cè)鏈基團易被破壞、無法形成復雜空間結(jié)構(gòu)等缺點，限制了其在大規(guī)模生產(chǎn)中的應(yīng)用。隨著基因工程技術(shù)的高速發(fā)展及其在工業(yè)化應(yīng)用中的不斷成熟，通過原核或真核表達系統(tǒng)大規(guī)模制備基因工程抗菌肽已成為可能，是大量獲得抗菌肽最經(jīng)濟、科學、有效的途徑，但由于表達量低、表達產(chǎn)物不穩(wěn)定、與宿主之間的毒性作用等因素制約了其規(guī)?；a(chǎn)。本文就抗菌肽重組表達過程中的融合標簽選擇、偏愛密碼子選擇、最適菌株選擇、基因共表達、融合蛋白純化方法及基因表達設(shè)計等方面的優(yōu)化策略作一綜述，以期為抗菌肽的應(yīng)用和規(guī)?；a(chǎn)提供參考。

1 融合標簽的選擇

利用大腸埃希菌（Escherichia coli，E.coli）重組表達的抗菌肽，如擬穴青蟹抗菌肽［1］、PlnF 抗菌肽［2］、UBI18-35 抗菌肽［3］、GKY20 抗菌肽［4］等均以包涵體形式存在，后續(xù)處理較繁瑣，且復性后目的蛋白可能喪失活性［5］。將不易被E.coli 蛋白酶降解的蛋白基因與抗菌肽基因相連接，再轉(zhuǎn)入宿主菌中進行融合表達，可有效提高其抗菌活性、穩(wěn)定性，并延長其在體內(nèi)的半衰期。應(yīng)用較多的融合表達系統(tǒng)包括β-半乳糖苷酶系統(tǒng)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（glutathione transferase，GST）系統(tǒng)、麥芽糖結(jié)合蛋白（maltose binding protein，MBP）系統(tǒng)、純化標簽融合系統(tǒng)（如Flag-tag 和His-tag）、金黃色葡萄球菌蛋白A 系統(tǒng)及其他融合系統(tǒng)（如硫氧還蛋白）等，見表1［3，6-31］。

表1 近年已報道的抗菌肽重組表達系統(tǒng)Tab.1 Recombinant expression systems of antimicrobial peptides reported in recent years

硫氧還蛋白（thioredoxin，TrxA）和GST 是抗菌肽融合表達中最常用的兩種載體蛋白，能夠促進多肽在E.coli 細胞質(zhì)中的可溶性表達。王若誠等［32］將鱟素抗菌肽目的基因Tachyplesin1（TP1）與TrxA 標簽以可溶形式進行融合表達，重組蛋白TP1 對金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）與枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）均具有良好抑菌活性，最小抑菌濃度分別為6 和10 mg ／ L。王文佳等［33］將蜂毒肽（melittin）插入載體pGEX6p-1，轉(zhuǎn)入E.coli BL21（DE3）進行誘導表達，并使用GST 親和層析純化重組蛋白，結(jié)果顯示，該重組蛋白具有明顯抑菌和抗腫瘤的作用。但由于TrxA 相對分子質(zhì)量較大（11 800），使標簽在融合產(chǎn)物中占較大比例；GST 也易發(fā)生蛋白水解降解，導致低效生產(chǎn)。小泛素樣修飾蛋白（small ubiquitin like modification protein，SUMO）是一種新的融合載體，可提高靶蛋白折疊率和溶解性，SUMO特異性蛋白酶的存在有利于運載蛋白的釋放。WU等［34］將melittin 與LL37 結(jié)合，設(shè)計雜交多肽melittin（1-13）-LL37（17-30）（M-L），并克隆至載體pET-SUMO，于E.coli 中表達，得到約165 mg ／ L 可溶性融合蛋白SUMO-M-L（純度92%），M-L 對所有指示菌（尤其是革蘭陽性菌）的抗菌活性均高于M 和L。賀軍芳等［35］以E.coli BL21（DE3）為宿主細胞，pET-SUMO為表達載體，獲得融合表達抗菌肽LHH1，其對金黃色葡萄球菌具有良好的抗菌活性，且對山羊血紅細胞的溶血毒性較低，但其相對分子質(zhì)量也較大（11 200），使肽及其載體占有較高比例。

另外，GST 可作為親和標簽純化融合蛋白，硫氧還蛋白和SUMO 則需要額外的親和標簽來純化融合蛋白，最常使用的是His-tag。ZHANG 等［36］將PGLa-AM1 基因與家蠶抗菌肽基因相連接，并在融合蛋白末端添加6 × His，轉(zhuǎn)入E.coli 進行表達，產(chǎn)量達30 mg ／ L。SHI 等［15］將Pa-MAP 2 與ELP-intein 融合表達，產(chǎn)量高達96 mg ／ L。但親和標簽與不同抗菌肽融合表達的產(chǎn)量存在明顯差異，Trx 與G13 融合表達后產(chǎn)量為200 mg ／ L［13］，而Trx 與Fowlicidin-2融合表達的產(chǎn)量僅有6 mg ／ L［9］。另外，同一抗菌肽使用不同融合標簽重組表達產(chǎn)量亦有所不同，Plectasin 與SUMO 融合表達產(chǎn)量可達41 mg ／ L［7］，而與GST 和Intein2 融合表達的產(chǎn)量僅有24.3 和23.8 mg ／ L［8］。因此應(yīng)根據(jù)抗菌肽性質(zhì)進行選擇，以有效提高融合蛋白的表達率。

2 偏愛密碼子的選擇

根據(jù)宿主對密碼子的偏愛性設(shè)計合成抗菌肽的編碼基因，可提高融合蛋白表達率。許國芹等［37］根據(jù)E.coli 密碼子偏愛性原則推測EP 基因核苷酸序列，構(gòu)建pET32a-EP 融合表達質(zhì)粒，成功表達出重組蛋白。王蓮哲等［38］根據(jù)畢赤酵母（Pichia pastoris）密碼子偏愛性進行優(yōu)化，合成樹蛙抗菌肽Cathelicidin目的基因，與表達載體pPIC9K 連接后電擊轉(zhuǎn)化至畢赤酵母GS115，分泌表達的抗菌肽對金黃色葡萄球菌和E.coli 具有抑菌活性。于婷等［39］依據(jù)畢赤酵母密碼子偏愛性原則編碼雜合肽Me-HNP1 基因，選擇蜂毒肽（melittin）和人體防御素（huamn defensin-1，HNP-1）部分基因序列進行人工融合，克隆至穿梭型表達載體pPICZα A 上，成功構(gòu)建分泌表達質(zhì)粒pPICZαAMe-HNP1。

3 表達菌株的選擇

為提高真核蛋白的成功表達率，表達菌株的選擇亦十分重要。

3.1 原核表達系統(tǒng) 原核表達系統(tǒng)，特別是E.coli表達系統(tǒng)，具有基因?qū)敕奖?、易操作、產(chǎn)量高、生長速度快、成本較低等優(yōu)點，受到人們的青睞。E.coli BL21（DE3）通常用作宿主菌株，但其不能表達含有二硫鍵的抗菌肽融合蛋白，常生成包涵體［18，40］；E.coli菌株Origami 或Rosetta-Gami 特別用于生產(chǎn)富含二硫鍵的抗菌肽；Rosetta 系列菌株含有原本在E.coli中稀少的真核細胞密碼子，因此可有效增加真核細胞的蛋白表達水平。LIN 等［25］用E.coli Rosetta（DE3）異源表達獲得DEFB118 蛋白，產(chǎn)量達250 μg ／ mL，且對E.coli、金黃色葡萄球菌和枯草桿菌均表現(xiàn)出抗菌活性。馬文君等［41］實現(xiàn)了人汗腺抗菌素（Dermcidins，DCD-1L）的原核異源可溶表達，構(gòu)建質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化E.coli ER2566，表達產(chǎn)物對表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）等革蘭陽性菌較E.coli 具有更顯著的抑菌活性。另外，枯草芽孢桿菌也可作為E.coli 的替代原核表達系統(tǒng)來生產(chǎn)抗菌肽，包括Plectasin［7］、cathelicidin［42］和hybrid cecropin A-melittin［43］等，但該表達系統(tǒng)表達率有時比E.coli 低［44］。

3.2 真核表達系統(tǒng) 在真核表達系統(tǒng)中，應(yīng)用最廣泛的為酵母表達系統(tǒng)，其具有生長迅速、易于進行基因工程改造、能夠?qū)ν庠葱缘鞍走M行正確加工和后期修飾等優(yōu)點。酵母表達系統(tǒng)中的宿主載體主要是畢赤酵母和釀酒酵母。其中畢赤酵母表達系統(tǒng)操作簡單，營養(yǎng)要求低，可進行高密度發(fā)酵和大規(guī)模生產(chǎn)；其本身帶有強醇氧化啟動子1（aacoholoxidase1，AOX1），可通過改變甲醇在培養(yǎng)基中的濃度來調(diào)控表達。目前，已有多種抗菌肽在畢赤酵母中成功表達。ZHAN 等［26］將PRW4 與6×His-TrxA 融合并連接至載體pPICZαA，在畢赤酵母GS115 中表達融合蛋白，結(jié)果表明，重組PRW4 對E.coli、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等細菌具有與合成PRW4 相似的抗菌活性。WANG等［30］將設(shè)計的牛乳鐵素衍生肽（LfcinBD）基因片段插入至質(zhì)粒pPIC9K-His，構(gòu)建重組表達質(zhì)粒，在相同發(fā)酵條件下，LfcinBD 對金黃色葡萄球菌的抑菌活性強于天然牛乳鐵蛋白肽（LfcinB）。王莎莎等［45］構(gòu)建了產(chǎn)斑點叉尾鮰β-防御素（ictalurus punctatus βdefensin，IPBD）的畢赤酵母重組菌株，實現(xiàn)了基于真核表達的IPBD 的生物合成，結(jié)果表明，重組IPBD 對金黃色葡萄球菌、單增李斯特菌（Listeria monocytogenes）及銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的抑菌率分別為69.6%、71.6% 和65.8%。王蓮哲等［27］利用畢赤酵母表達抗菌肽Temporin-SHf 構(gòu)建pPIC9K-Temporin-SHf 表達質(zhì)粒，分泌表達的抗菌肽對金黃色葡萄球菌和E.coli 具有較強抑菌活性。釀酒酵母作為宿主菌進行異源蛋白生產(chǎn)操作簡單，能夠?qū)Ρ磉_異源蛋白進行必要的修飾和加工，保持外源蛋白的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定和生物學活性。榮慧杰等［46］通過融合牛乳鐵蛋白肽（LfcinB）基因與紅色熒光蛋白（mApple）基因，構(gòu)建以mApple 為報告基因的酵母表達質(zhì)粒，得到融合表達重組蛋白LfcinB-mApple，其對E.coli DH5α、金黃色葡萄球菌均有明顯抑菌活性。但該表達系統(tǒng)也存在一些缺陷，如在發(fā)酵過程中會產(chǎn)生酒精，可能對表達產(chǎn)物產(chǎn)生不利影響，無法完整加工信號肽，產(chǎn)物易過度糖基化，這些限制了其在異源蛋白重組表達中的應(yīng)用。

另外，有些抗菌肽在原核和真核表達系統(tǒng)中均可表達，獲得融合蛋白。凡復等［47］在E.coli 中轉(zhuǎn)入仔豬骨髓組織抗菌肽（protegrin-1，PG1）的成熟肽基因，構(gòu)建可表達融合蛋白的GST-PG1 基因工程菌，該重組菌具有顯著的抗菌效果。還可將編碼成熟PG1 的DNA 序列與6×His 標簽融合，克隆至載體pPICZαA中，再轉(zhuǎn)入畢赤酵母中，表達的PG1／6×His 對HepG2細胞具有較強抗癌活性［48］。吳玲梅等［49］為研究太平洋鱈（Gadusmacrocephalus）抗菌肽Hepcidin（GmHep）的分子結(jié)構(gòu)和表達特性，分別成功構(gòu)建了原核（pET-32a-GmHep）和真核（pEGFP-GmHep）表達質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)化E.coli BL21（DE3），0.01mmol ／ L IPTG 于30 ℃誘導4 h,可大量表達目的蛋白；轉(zhuǎn)染鯉上皮瘤細胞，在細胞質(zhì)中可觀察到明顯綠色熒光，表明GmHep 蛋白成功表達且定位于細胞質(zhì)。

4 基因共表達策略

將2 個或2 個以上的單個相同或不同抗菌肽基因通過特定連接點或結(jié)構(gòu)連接，構(gòu)建至特定的表達載體中，可有效增加外源蛋白的可溶性和產(chǎn)量，與輔酶共表達可獲得活性蛋白，還能實現(xiàn)生物功能相關(guān)蛋白的共表達。

4.1 單啟動子表達系統(tǒng) 在單啟動子表達系統(tǒng)中，1 個轉(zhuǎn)錄單元是由“promoter-ORF（s）-terminator T”序列構(gòu)成，基因之間由一段DNA 序列連接，多個基因以多順反子的形式轉(zhuǎn)錄和翻譯。這種表達系統(tǒng)比較簡便、靈活。劉珂杭等［50］利用SUMO 融合標簽在E.coli 系統(tǒng)中通過串聯(lián)表達制備重組LfcinB，結(jié)果顯示，大于90%的SUMO-（LfcinB）n 蛋白以可溶形式表達于E.coli BL21（DE3）細胞中；SUMO-（LfcinB）2的表達量高于SUMO-LfcinB 和SUMO-（LfcinB）3，通過SUMO 特異性蛋白酶切除SUMO 標簽，羥胺釋放單體，獲得純化的重組LfcinB，產(chǎn)率約為15 mg ／ L，具有一定的抗菌和抗腫瘤活性。XU 等［51］通過將豬β-防御素-2（porcine β-defensin-2，pBD-2）和天蠶素-P1（cecropin P1，CP1）融合基因插入載體pMK4，轉(zhuǎn)化后獲得表達融合肽的枯草芽孢桿菌，其保留了較好抗菌活性，同時大幅降低了對宿主菌生長的干擾，且可顯著促進仔豬生長。FAN 等［52］為實現(xiàn)豬β-防御素-1（porcine β-defensin-1，pBD-1）在巴斯德畢赤酵母中的高效表達，設(shè)計合成pBD-1 三倍串聯(lián)體（3pBD-1）基因序列，構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pHLI-S1-3pBD-1。單啟動子表達系統(tǒng)也存在一些缺點，如基因在載體上的順序影響其表達水平，啟動子后第1 個基因編碼的蛋白表達率明顯要高；兩個基因之間起連接作用的DNA序列大小和組成，也可影響基因的表達水平；載體的容量有限，一般難以裝入4 個以上的基因；轉(zhuǎn)錄單元可能導致質(zhì)粒不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化過程中易發(fā)生序列丟失。

4.2 多啟動子共表達體系 在多啟動子共表達體系中，所有基因均可單獨轉(zhuǎn)錄，獲得各自的mRNA 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。該表達系統(tǒng)能有效減少單一基因載體的轉(zhuǎn)化次數(shù)，還能克服共表達中基因表達水平難以控制等問題。KUDDUS 等［53］將分子伴侶HLA 與SN-1 通過構(gòu)建pCOLADuet1-HLA-SN-1 共表達體系，使目標蛋白SN-1 的表達量明顯升高；SATOSHI 等［54］將ABF-2與4 個不同分子伴侶通過載體pCOLADuet-1 分別構(gòu)建pCOLA-［HLA］-ABF-2、pCOLA-［BLA］-ABF-2、pCOLA-［HLZ］-ABF-2、pCOLA-Microbicidal assay［BLZ］-ABF-2和pCOLA-ABF-2 等共表達體系，也實現(xiàn)了提高目標蛋白產(chǎn)量和活性的目的。THOMAS 等［55］將Sericin的部分序列和Cecropin B 重組，連接至表達載體pET-47b（+），使這兩種難以表達的蛋白均在E.coli中表達，且融合蛋白的殺菌活性更強。CHEN 等［56］構(gòu)建pVAX1 融合抗菌肽與白細胞介素-2 基因真核共表達質(zhì)粒CAMPS-2A-IL-2（VAP2），獲得的融合蛋白能有效防止病原微生物感染小鼠，增強機體的體液免疫和細胞免疫能力，且效果明顯優(yōu)于單一抗菌肽融合基因，表明抗菌肽融合基因與白細胞介素-2 的共表達對動物有更好的保護效應(yīng)。該表達系統(tǒng)也存在一些缺點，如多個啟動子會占據(jù)載體的克隆空間，減少了裝載基因的數(shù)量；多個啟動子之間可能會互相干擾，影響目的基因的表達；若裝載基因過多，載體太大，質(zhì)粒在宿主菌中可能不穩(wěn)定。

4.3 雙質(zhì)粒共表達系統(tǒng) 在雙質(zhì)粒共表達系統(tǒng)中，將不同外源基因分別構(gòu)建至不同載體，構(gòu)建出重組質(zhì)粒，再將這些重組質(zhì)粒同時或分步導入同一宿主細胞，也可實現(xiàn)外源基因的共表達。PENG 等［57］將CAMPs片段分別克隆至真核表達質(zhì)粒pPIC9K 和pPICZαA中，成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pPIC9K-CAMPs 和pPICZαACAMPs，獲得了GS-PKZ-CAMPs 可誘導表達菌株。但這種表達系統(tǒng)對載體的要求較高，如用于共轉(zhuǎn)化的載體應(yīng)含有不同的抗生素選擇標記，還應(yīng)含有不同的復制起點（p15A 和ColE1）及相似的拷貝數(shù)。有研究表明，同時滿足以上條件時，單一載體多重轉(zhuǎn)化后亦可能不發(fā)生共表達［58］。因此這種技術(shù)受到了一些限制，分析原因可能為：共表達基因較多時，技術(shù)操作工作量大；多個基因共轉(zhuǎn)化使可轉(zhuǎn)入細胞數(shù)量減少；多種抗生素共存，細胞的生長速率減慢；質(zhì)粒之間存在不兼容的情況。

5 融合蛋白純化方法的優(yōu)化

融合蛋白純化的方法及條件取決于表達宿主生物及融合標簽，較多依賴于色譜法，一些融合標簽使基于非色譜的融合蛋白純化成為可能。GUO 等［28］將Oxysterlin 1 基因克隆至含有彈性蛋白樣多肽（Elastinlike polypeptide，ELP）和蛋白質(zhì)內(nèi)含肽（Intein）基因的質(zhì)粒中，構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pET-ELP-I-Oxysterlin 1，重組蛋白主要以可溶性形式表達，進而通過簡單的鹽析和pH 改變即可對目標小肽進行純化，最終獲得Oxysterlin 1 的產(chǎn)量約為1.2 mg ／ L。SUN 等［11］設(shè)計了一種具有酸性裂解位點的四螺旋蛋白DAMP4，與抗菌肽Pexiganan 融合，DAMP4var-Pexiganan 融合蛋白保留了DAMP4 的高溫穩(wěn)定性，因此只能用熱和鹽沉淀的方法從細胞中純化，從而消除了基于色譜的純化步驟。SUN 等［12］開發(fā)了一種新的融合蛋白DAMP4-F-Pexiganan，避免了基于色譜的純化和酶切的步驟，與微生物生產(chǎn)抗菌肽的傳統(tǒng)方法比較，具有較大優(yōu)勢。

6 基因表達設(shè)計的優(yōu)化

抗菌肽的融合表達可通過多方面、多環(huán)節(jié)條件的優(yōu)化來提高其表達量。鄧贛奇等［59］為獲得一種能分泌菌絲霉素的畢赤酵母菌并探討其活性，將優(yōu)化的目的蛋白堿基序列與標簽MBP 基因序列融合，通過雙酶切將重組基因序列插入至表達載體畢赤酵母pGAPZaA，獲得的重組蛋白經(jīng)純化后對金黃色葡萄球菌具有抑制作用。PARVANEH 等［24］設(shè)計并生產(chǎn)了MagaininⅡ作為重組融合蛋白的類似物，該序列含有24 個氨基酸殘基（P24），其中Lys、His、Ser 殘基被Arg 取代，疏水Phe 被Trp 取代，利用pTYB21在E.coli 中重組產(chǎn)生P24，其對革蘭陽性菌具有較強的抗菌活性，比Pexigananan 更有效。MONTFORTGARDEAZABEL 等［29］分別利用融合蛋白CuF3H+和SmbP 與抗菌肽Bin1b 在E.coli 中共表達，經(jīng)分離純化獲得的Bin1b 對金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出抗菌活性。葉若柏等［60］構(gòu)建了用E.coli 表達內(nèi)含肽介導的MME 重組質(zhì)粒，通過表達獲得依次由組氨酸、SUMO、MME、內(nèi)含肽構(gòu)成的融合蛋白，并在Mesna 與NH4HCO3存在下，促進了內(nèi)含肽自剪切，MME 碳末端被酰胺化，實現(xiàn)了簡單的“一步法”制備。WANMAKOK 等［61］構(gòu)建了1 個由人LL-37 和組蛋白5（Hst-5）兩個截短的活性形式組成的AL32-P113 雜交肽基因，克隆至質(zhì)粒pTXB-1 中，并在E.coli BL21（DE3）中表達，結(jié)果表明，兩種雜交肽均對革蘭陰性菌和酵母細胞具有較強的抗菌活性，而L31-P113 肽對革蘭陽性菌的抗菌活性約為LL-37 的4 倍，且這些雜交多肽對人紅細胞的溶血作用增加，表明雜交多肽對病原菌具有更廣泛、更強的抗菌能力，未來可作為局部治療微生物感染的一種治療方法。

7 小結(jié)與展望

目前，雖已開發(fā)了各種高效率和低成本的抗菌肽重組表達系統(tǒng)和方法，但該領(lǐng)域仍具有較大的發(fā)展?jié)摿?。近期開發(fā)的最有效的基因編輯技術(shù)之一CRISPR-Cas，是基于細菌中的自然防御機制來控制病原體，CRIDPR RNA（crRNA）結(jié)合Cas9 內(nèi)切酶在其靶向區(qū)域形成雙鏈斷裂，同時利用同源重組、非同源末端連接等方法精確敲入大片段外源基因［62］。CRISPR-Cas 介導的基因修復、破壞、插入或缺失已在生物醫(yī)學研究、醫(yī)學、農(nóng)業(yè)和生物技術(shù)等多個領(lǐng)域得到應(yīng)用。將基因編輯工具與現(xiàn)有的基因工程方法相結(jié)合，使抗菌肽的生產(chǎn)變得更簡便、更快捷。另外，CRISPR-Cas9 介導的基因沉默、基因敲除或特定DNA序列的操縱也可促進異源抗菌肽的產(chǎn)生、正確快速的折疊或適當?shù)姆g后加工修飾。

生產(chǎn)高純度和高活性的抗菌肽對其在藥物和治療中的應(yīng)用具有重要意義。傳統(tǒng)的抗菌肽重組表達遇到了許多困難，如由于抗菌肽對其細菌宿主的毒性而導致低表達產(chǎn)量，從融合蛋白中釋放和純化抗菌肽的繁瑣過程導致低生產(chǎn)量，進而限制其規(guī)?；a(chǎn)。相信隨著科學技術(shù)的發(fā)展，未來一定能夠研發(fā)出一種成本低且可高效表達抗菌肽的系統(tǒng)。