王坤，吳月靜，王興珍，勵麗

目前，我國糖尿病患病率增加趨勢明顯，2015 年至2017 年中華醫(yī)學會內(nèi)分泌學分會的流行病學調(diào)查顯示我國18歲及以上人群糖尿病患病率為11.2%，其中2 型糖尿病占90%以上[1]。過去一直認為2 型糖尿病是遺傳與環(huán)境因素共同作用的結果，近年來出現(xiàn)了一個嶄新的醫(yī)學科學方向-免疫代謝學[2]，主要研究內(nèi)容為免疫與代謝在生理及各種疾病中的相互影響。研究發(fā)現(xiàn)，適應性免疫調(diào)節(jié)尤其是CD4+T淋巴細胞亞群在2 型糖尿病的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用[3]。CD4+T 淋巴細胞亞群根據(jù)其功能和產(chǎn)生細胞因子的類型，可以分為促炎性Th1 細胞和抗炎性Th2 細胞。本文通過比較健康人群與初發(fā)2 型糖尿病患者外周血Th1 和Th2 的表達差異，分析其相關性并為進一步探索免疫機制在2 型糖尿病發(fā)病過程中的作用提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2021 年7-11 月在寧波市第一醫(yī)院內(nèi)分泌門診就診的2型糖尿病患者作為觀察組，其中男13 例，女17 例；年齡（48.0±12.3）歲。另選擇同期無糖耐量、尿酸及高胰島素血癥等代謝指標異常的正常志愿者10 例作為健康對照組，男5 例，女5 例；年齡（39.0±11.5）歲。兩組的性別、年齡等一般情況差異無統(tǒng)計學意義（P ＞0.05）。本研究符合醫(yī)學倫理學標準，且已獲得本院倫理委員會批準，所有檢測均獲得患者的知情同意并簽署知情同意書。

1.2 納入及排除標準 納入標準：（1）符合WHO 2 型糖尿病診斷標準，年齡≥18 歲；（2）體質(zhì)量指數(shù)（BMI）≥19 kg/m2；（3）簽署知情同意書；（4）未使用過任何降糖藥物（包括各類中藥）。排除標準：（1）受檢者本人或直系親屬有自身免疫性疾病史（如1 型糖尿病、風濕性疾病等）；（2）近期有不明原因發(fā)熱；（3）存在感染等其他原因引起的炎癥狀態(tài)；（4）腫瘤患者。

1.3 方法

1.3.1 標本和數(shù)據(jù)采集 記錄所有研究對象一般資料，包括性別、年齡、身高及BMI；測量頸圍、腰圍、臀圍，測量內(nèi)臟脂肪面積和皮下脂肪面積；抽取空腹（空腹10 h 以上）靜脈采血，以貝克曼au5800生化分析儀檢測肝腎功能、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）；羅氏Cobas E602 全自動電化學發(fā)光分析儀檢測空腹胰島素、空腹C肽；糖化血紅蛋白分析儀檢測糖化血紅蛋白，希森美康xn9000 全自動血液分析儀檢測血常規(guī)（白細胞計數(shù)、中性粒細胞絕對值和淋巴細胞絕對值）。

1.3.2 流式細胞儀檢測外周血Th1 和Th2 細胞 取肝素抗凝全血125 l，加入RPMI 1640 培養(yǎng)液125 l，1 l 佛波酯/離子霉素混合物（250×，杭州聯(lián)科生物）和1 l 布雷非德菌素/莫能霉素混合物（250×，杭州聯(lián)科生物），37 ℃孵育箱中培養(yǎng)4～6 h 后收集細胞。用人抗CD3（FITC，克隆號：OKT3，聯(lián)科生物）和抗人CD8（PerCP-Cy5.5，克隆號：RPAT8，聯(lián)科生物）進行細胞表面染色，分別加入抗人IFN-（PE，克隆號：4SB3，聯(lián)科生物），抗人IL-4（APC克隆號：8D48，聯(lián)科生物）進行細胞內(nèi)因子染色。采用流式細胞儀檢測分析，以CD4+IFN-+/CD4+T表示Th1 占CD4+T 細胞的比例，CD4+IL-4+/CD4+T 表示Th2 占CD4+T 細胞的比例。用Flow jo 軟件分析數(shù)據(jù)。

1.3.3 胰島素抵抗指數(shù) 穩(wěn)態(tài)模型評估的胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）=空腹血糖×空腹胰島素/22.5，穩(wěn)態(tài)模型評估的胰島 細胞功能指數(shù)（HOMA-）=20×空腹胰島素/（空腹血糖－3.5）。

1.4 統(tǒng)計方法 采用SPSS 25.0 軟件處理數(shù)據(jù)。正態(tài)分布的計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，采用t 檢驗；非正態(tài)分布數(shù)據(jù)以M（P25，P75）表示，比較采用秩和檢驗；計數(shù)資料采用2檢驗；相關因素分析采用Spearman 相關性分析。P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 兩組身高、頸圍、臀圍、UA、TC、TG、LDL-C、白細胞計數(shù)、中性粒細胞計數(shù)和淋巴細胞計數(shù)差異均無統(tǒng)計學意義（均P ＞0.05）。觀察組體質(zhì)量、BMI、腰圍、內(nèi)臟脂肪面積、皮下脂肪面積、空腹血糖、空腹胰島素、空腹C 肽、HOMA-IR 及糖化血紅蛋白均高于對照組（均P＜0.05），HOMA-、HDL-C 均低于對照組（均P ＜0.05）。見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組外周血Th1、Th2 和Th1/Th2比值 與對照組相比，觀察組Th1 在外周血CD4+T 淋巴細胞中的比例、Th1/Th2 比值均升高（均P ＜0.05），Th2 在CD4+T 淋巴細胞中的比例降低（P ＜0.05），見表2。

表2 兩組Th1、Th2 和Th1/Th2 比較

2.3 外周血Th1、Th2 和Th1/Th2 與HOMA-IR、HOMA-和糖化血紅蛋白的相關性分析 Spearman 分析顯示，人體外周血Th1 與Th2 比例呈負相關（r=－0.358，P=0.023），Th2 比例與HOMA-呈正相關（r=0.391，P=0.013），Th1/Th2與 HOMA-呈負相關（r=－ 0.438，P=0.005），與 HOMA-IR呈正相關（r=0.322，P=0.043），與糖化血紅蛋白呈正相關（r=0.349，P=0.027），見表3。

表3 Th1、Th2 和Th1/Th2 與HOMA-IR、HOMA-和糖化血紅蛋白的相關性

3 討論

2 型糖尿病的發(fā)病是一個復雜的病理過程，2 型糖尿病患者存在免疫異常及器官特異性抗體的改變。在2 型糖尿病發(fā)病機制的相關研究中發(fā)現(xiàn)脂肪組織中巨噬細胞浸潤增加，相關炎性細胞因子表達上升，而Wu 等[4]及Kintscher 等[5]的研究結果分別證實了T淋巴細胞浸潤早于巨噬細胞的出現(xiàn)。Nishimura 等[6]研究再次證實了T淋巴細胞在脂肪組織炎癥的起始階段即已介入，并且與該炎癥所介導的糖耐量異常和胰島素抵抗的進展變化一致。上述研究結果均提示了T 淋巴細胞在2 型糖尿病發(fā)病的上游啟動和維持過程中發(fā)揮了重要的作用。

本研究納入的2 型糖尿病均為初發(fā)患者，糖化血紅蛋白均值為6.59%，BMI、腰圍、內(nèi)臟脂肪面積及HOMA-IR均比對照組明顯升高，這說明在2 型糖尿病初發(fā)階段胰島素抵抗已經(jīng)參與到發(fā)病過程中，而HOMA-也同時降低，提示在胰島素抵抗的同時合并胰島功能不足。分析其原因可能為增多的脂肪加重了慢性炎癥，使胰島素敏感性下降，刺激胰島素抵抗發(fā)生，促使患者血糖升高，高血糖刺激機體分泌更多的胰島素，加重了胰島的負擔，從而導致胰島功能不足。龐邵杰等[7]研究結果也發(fā)現(xiàn)糖尿病患者胰島素抵抗指數(shù)高于正常人群，并且在糖尿病前期已經(jīng)出現(xiàn)了胰島素抵抗。

本研究還發(fā)現(xiàn)2 型糖尿病患者較正常對照組Th1 升高、Th2 降低以及Th1/Th2 比值升高。研究顯示，CD4+T 淋巴細胞亞群比例的平衡是維持免疫穩(wěn)態(tài)的關鍵，其包括Thl 細胞和Th2 細胞，Th1淋巴細胞表現(xiàn)為促炎作用，Th2 淋巴細胞則為抗炎細胞，二者之間的比例平衡是維持免疫穩(wěn)態(tài)基礎[8-9]。本研究結果提示觀察組促炎作用增強，抗炎作用減弱，并且出現(xiàn)促炎和抗炎細胞比例失衡，這與盛志新等[10]結果一致。

在相關分析方面，本研究發(fā)現(xiàn)人群中Th1 與Th2 呈負相關，支持目前的相關理論，即Th1 與Th2 作用互相拮抗。同時發(fā)現(xiàn)Th2 與胰島 細胞功能指數(shù)成正相關，Th1/Th2 與胰島素抵抗指數(shù)、糖化血紅蛋白正相關，與胰島 細胞功能指數(shù)負相關，這提示Th1/Th2的升高和Th2的下降可能參與了胰島素抵抗加重和胰島 細胞功能下降的過程，但是具體的機制還需要進一步的研究。而其他衡量肥胖的指標如BMI、腰圍和內(nèi)臟脂肪面積等均未發(fā)現(xiàn)與Th1 和Th2 有相關性，分析可能與納入的2 型糖尿病患者患病時間不長，并且血糖不夠高有關。