糖尿?。―M）已成為日益嚴重的全球健康負擔，對世界各國的公共衛(wèi)生都構(gòu)成了巨大的挑戰(zhàn)。糖尿病會引起并發(fā)癥，如糖尿病心肌病變。與非糖尿病患者相比較，糖尿病患者更易發(fā)生心律失常。高糖高脂飲食可導致心肌電生理改變，傳導速度降低，在糖尿病心肌病變的過程中增加猝死和惡性心律失常發(fā)生的幾率。因此，探討糖尿病心功能不全的發(fā)生機制與其藥物治療具有重要意義。

二氫楊梅素（DHM）是蛇葡萄屬植物中發(fā)現(xiàn)的一種二氫黃酮類化合物，具有較強的抗炎作用。研究表明，二氫楊梅素能改善鏈脲佐菌素誘導的糖尿病小鼠心臟左室射血分數(shù)和左室短軸縮短率，對糖尿病心功能不全具有保護作用。同時也有研究證明，二氫楊梅素能通過激活自噬抑制miR-34a預防糖尿病性心肌病。然而，二氫楊梅素對糖尿病心功能不全及傳導異常的保護作用機制尚未闡述清楚。

糖尿病心臟功能不全的機制非常復雜，但有證據(jù)表明，代謝改變、ROS的過度產(chǎn)生、炎癥和自主神經(jīng)功能障礙都與此有關。高遷移率族蛋白-1（HMGB1）在細胞核中高表達，當其在高糖的刺激下釋放到細胞外作為信號分子誘發(fā)炎癥反應。但是有關HMGB1在糖尿病心肌病變中的作用尚不清楚。已有研究表明，二氫楊梅素能下調(diào)BGC-823 細胞及人臍靜脈內(nèi)皮細胞HMGB1的表達，抑制炎癥反應。二氫楊梅素能否通過下調(diào)高血糖所致大鼠心肌細胞的HMGB1表達和釋放，抑制糖尿病心肌病變中心臟傳導異常尚未見報道。

因此，本實驗將通過構(gòu)建2型糖尿病動物模型，探討二氫楊梅素能否通過調(diào)控HMGB1改善糖尿病大鼠心功能不全的現(xiàn)象，以期為糖尿病心肌病變提供治療的新思路。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 健康SPF 級雄性SD大鼠24只，6～8周齡，體質(zhì)量180～220 g，購自湖南省斯萊克景達公司，動物使用許可證號SCXK（湘）2016-0002，動物實驗均按照新藥藥效與安全性評價湖南省重點實驗室動物倫理與福利委員會的指導方案和批準進行（審批號：IACUC-2020（2）031），實驗遵循3R原則。

1.1.2 主要儀器與試劑 血糖儀（羅氏）；酶標儀（Thermo Scientific）；冷凍高速離心機（Eppendorf）；垂直電泳儀（Bio-Rad）；MPA 2000心功能分析系統(tǒng)（上海市奧爾科特生物科技有限公司）；心臟彩色超聲儀（Philips）；二氫楊梅素（由心腦血管天然藥物研究湖南省重點實驗室提供，純度≥98%）；鏈脲佐菌素（STZ，Sigma）臨用前用枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液配置；二甲雙胍（施貴寶）；胰島素ELISA試劑盒（碧云天）；TG、TC、LDL、HDL試劑盒（建成生物）；蘇木素伊紅（HE）染色試劑盒（碧云天）；HMGB1 兔多克隆抗體（Abcam）；NFκB p65兔多克隆抗體（Abcam）；磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）兔多克隆抗體（CST）；β-actin 小鼠單克隆抗體（博士德）；辣根過氧化物酶標記山羊抗兔（中杉金橋）；辣根過氧化物酶標記山羊抗小鼠（中杉金橋）。

訂貨成本是指企業(yè)在決定購買某種或是某些產(chǎn)品后向供應商發(fā)出訂單而發(fā)生的成本，主要包括內(nèi)部人員費用和管理費用。企業(yè)訂購成本主要特征是與采購次數(shù)有關，而與企業(yè)訂貨量大小無關。

1.2 方法

1.2.1 動物建模及給藥 24只SD大鼠隨機分為正常對照組（Contol）、2 型糖尿病組（T2DM）、陽性對照二甲雙胍組（MET）、二氫楊梅素組（DHM），6 只/組，適應性喂養(yǎng)1周。T2DM和藥物干預組，高脂高糖飲食（高脂高糖飼料的配方為10.0%豬油、20.0%蔗搪、2.5%膽固醇、1.0%膽酸納、66.5%常規(guī)飼料）喂養(yǎng)6周后，一次性小劑量腹腔注射STZ（30 mg/kg），繼續(xù)給予高糖高脂飼料72 h，72 h后禁食16 h，測定空腹血糖，血糖值≥16.7 mmol/L視為造模成功，造模成功后持續(xù)給予高糖高脂飲食直至實驗結(jié)束。Control組大鼠給予注射等量的檸檬酸緩沖溶液。在T2DM大鼠造模成功的第2天，MET劑量采用大鼠臨床等效劑量，MET成人日服劑量為1500 mg/d，按照60 kg的人計算臨床劑量為25 mg/kg/d，轉(zhuǎn)換為大鼠的劑量約為150 mg/kg/d，MET組大鼠灌胃MET（150 mg/kg/d），DHM組劑量參考文獻中使用的劑量給予DHM 灌胃（250 mg/kg/d），連續(xù)用藥8 周，T2DM組和對照組灌胃等量的生理鹽水。

1.2.5 計算大鼠全心肥厚指數(shù) 全心肥厚指數(shù)（HWI）=全心質(zhì)量/體質(zhì)量（HW/BW）

1.2.3 心臟彩色超聲儀檢測大鼠心功能 用藥結(jié)束后，3%戊巴比妥鈉（0.3 mL/100 g）麻醉大鼠，稱重記錄，然后剃毛備皮，固定大鼠，對各組的大鼠行超聲心動圖檢測，測量并記錄大鼠左室射血分數(shù)（EF），左室短軸縮短率（FS），左室舒張期容積（EDⅤ），左室收縮期容積（ESⅤ）、心率（HR）、左心室舒張末期內(nèi)徑（LⅤIDd）及左心室收縮期內(nèi)徑（LⅤIDs），計算大鼠的每搏輸出量（SⅤ）：EDⅤ-ESⅤ，每個值取測量3次后的平均值。

閘基高程3.9～8.2m為第②層壤土，構(gòu)成地基直接持力層，具中等壓縮性，微透水性，穩(wěn)定性較好。高程3.3～3.3m為②1層粉土，中密，具中等透水性，滲透穩(wěn)定性較差，具液化潛勢。高程3.3m以下為③壤土，具中等壓縮性，微透水性，土質(zhì)不均勻，含腐殖質(zhì)和貝殼碎屑等。

1.2.2 大鼠OGTT實驗、空腹血糖、血脂、胰島素指標檢測大鼠禁食6 h后，口服1.11 mol/L葡萄糖溶液（2 g/kg），斷尾取血測定0、0.5、1、1.5、2 h血清葡萄糖水平，計算大鼠口服糖耐量（OGTT）曲線下面積（AUC），AUC（mmol/L?min）=30×（0.5×C0+0.5×C2+C0.5+C1+C1.5）。用血糖儀測定空腹血糖值（FBG），大鼠腹主動脈取血，4 ℃，3000 r/min，離心10 min分離血漿，胰島素試劑盒檢測胰島素含量，計算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）及胰島素敏感指數(shù)（HOMA-ISI），計算公式如下：HOMA-IR=FBG（mmol/L）×FINS（mU/L）/22.5、HOMAISI=22.5/FBG（mmol/L）×FINS（mU/L），糖化血紅蛋白（HbA1c）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）送湘南學院附屬醫(yī)院檢驗科進行測定。

與正常對照組比較，T2DM組空腹血糖、糖化血紅蛋白、血糖AUC及胰島素抵抗指數(shù)顯著升高（＜0.01），胰島素敏感指數(shù)顯著下降（＜0.01）。與T2DM組比較，DHM組空腹血糖、糖化血紅蛋白、血糖AUC及胰島素抵抗指數(shù)顯著降低（＜0.01），胰島素敏感指數(shù)無明顯升高；陽性對照組空腹血糖、血糖AUC以及胰島素抵抗指數(shù)顯著降低（＜0.01），糖化血紅蛋白及胰島素敏感指數(shù)差異無統(tǒng)計學意義（＞0.05，圖1）。

1.2.6 心肌組織HE染色 4%多聚甲醛固定大鼠心臟組織，依次進行梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋等步驟，石蠟切片切成5 μm，進行二甲苯脫蠟、蘇木精及伊紅染色，分別拍照記錄各組左室心肌的病理形態(tài)學改變。

1.2.9 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進行處理，組間比較采用單因素方差分析進行統(tǒng)計學分析，采用Dunnett's檢驗的方法進行組間多重比較，＜0.05 認為差異有統(tǒng)計學意義。

1.2.8 Western blot檢測心臟組織的蛋白表達 心肌組織在液氮中研磨至粉末狀，提取心肌組織總蛋白并測定其濃度，取30 μg 蛋白樣品進行SDS-PAGE 凝膠電泳，將蛋白轉(zhuǎn)移至PⅤDF 膜上，以β-actin 為內(nèi)參照，兔抗羊HMGB1、NF-κB p65及p-NF-κB p65 為一抗，通過Western blot測定其HMGB1、NF-κB p65及p-NF-κB p65 相對表達量，實驗重復3 次。

③在縣級層面上對相關法規(guī)進行配套完善。以民勤為代表，主要包括：《民勤縣關于關閉部分機井及機井更新的實施意見》《民勤縣機井審批管理辦法》《民勤縣關于嚴格落實“三禁”政策加強生態(tài)環(huán)境保護的意見》《民勤縣水資源配置方案》《民勤縣實施以水定電控水管理辦法》《民勤縣地下水計量控制設備管理辦法》。

1.2.7 血漿中炎癥因子含量測定 大鼠腹主動脈取血，4 ℃，3000 r/min，離心10 min分離血漿，HMGB1試劑盒檢測血漿中HMGB1的含量。

1.2.4 心功能分析系統(tǒng)測定大鼠心電圖 用藥結(jié)束后，大鼠腹腔注射3%戊巴比妥鈉（0.3 mL/100 g）進行麻醉。麻醉后仰臥位固定大鼠，用針分別插入大鼠的雙上肢和右下肢皮下，再用心電圖電極固定在雙上肢（左前為紅色電極，右前為綠色電極）和右下肢（取黑色電極），使用MPA2000心功能分析系統(tǒng)記錄標準Ⅱ?qū)?lián)的心電圖。

其次，就是文章的內(nèi)容。乍一看，似乎也未嘗不可；細思量，則讓人生疑。比如，中秋節(jié)，他羅列一些從古到今的名人賞月軼事，到了春節(jié)，他又搜尋出古人如何過年的傳說。一年三百六十五天，春、夏、秋、冬四季歌寫畢，再接著寫二十四節(jié)氣，拉拉雜雜地寫些個無關痛癢的陳詞濫調(diào)。今年發(fā)表了，明年連改都不用，仍可發(fā)表。

2 結(jié)果

2.1 DHM對T2DM大鼠糖代謝的影響

21世紀初中國推出文化“走出去”戰(zhàn)略以來，成績斐然，“譯介在其中發(fā)揮了十分關鍵的作用”[1]。謝天振教授提出的“譯介”致力于“揭示譯語文化系統(tǒng)中的政治、意識形態(tài)、文學觀念、經(jīng)濟因素等對文學翻譯的操縱和影響”[2]。由此，“譯介”的概念不再局限于自身框架中，它突破傳統(tǒng)意義上的翻譯研究，從其他學科汲取養(yǎng)分豐盈自己，獲得更為長久的生命力。傳播學不僅是一門探討傳播現(xiàn)象與規(guī)律的學科，其交叉學科的屬性也使得它成為一種研究方法。從傳播學的角度來審視文學作品的譯介，不僅完善了傳播學的知識體系，推動傳播學理論建設，也為譯介研究提供新思路、新方法、新收獲。

2.2 DHM對T2DM大鼠脂代謝的影響

與正常對照組比較，T2DM組TC、TG、LDL-C顯著升高（＜0.01），HDL-C顯著下降（＜0.05）。與T2DM組比較，陽性對照組HDL-C顯著升高（＜0.05），而TC、TG及LDL-C差異無統(tǒng)計學意義；DHM組TG顯著下降（＜0.01）、HDL-C 顯著升高（＜0.01），而DHM 對T2DM大鼠TC和LDL-C的影響無統(tǒng)計學意義（圖2）。

2.3 DHM對T2DM大鼠心功能的影響

與正常對照組比較，T2DM組心臟彩超EF、FS、SⅤ顯著下降（＜0.05或＜0.01），LⅤIDd、LⅤIDs顯著升高（＜0.01）；與T2DM組比較，DHM組EF、FS、SⅤ顯著升高（＜0.01），陽性對照組EF、FS顯著升高（＜0.01），而SⅤ變化無統(tǒng)計學意義，陽性對照組及DHM組LⅤIDd、LⅤIDs顯著下降（＜0.05或0.01，圖3）。

2.4 DHM對T2DM大鼠心電圖、心率及心臟指數(shù)的影響

與正常對照組比較，T2DM心電圖結(jié)果顯示有明顯的房顫現(xiàn)象，心率顯著下降（＜0.05），心臟指數(shù)明顯升高（＜0.01）；與T2DM組比較，陽性對照組及DHM組房顫現(xiàn)象明顯改善，心率顯著升高（＜0.05或0.01），心臟指數(shù)明顯下降（＜0.05或0.01，圖4）。

2.5 DHM對T2DM大鼠心肌組織病理形態(tài)的影響

對各組大鼠心肌組織HE染色結(jié)果顯示，正常對照組大鼠心肌細胞排列規(guī)則，無心肌纖維斷裂。T2DM組大鼠心肌細胞體積增大，排列不規(guī)則，肌束間隔中有大量血細胞聚集以及炎癥浸潤。陽性對照組和DHM組大鼠心肌組織病理形態(tài)學變化明顯改善，其中陽性對照組尚有少量血細胞聚集及炎癥浸潤，DHM 在改善T2DM大鼠心肌組織炎癥浸潤上更為明顯（圖5）。

2.6 DHM對T2DM大鼠心肌組織及血漿中HMGB1蛋白的影響

與正常對照組比較，T2DM組HMGB1蛋白在心肌組織中的表達及血漿中的釋放顯著升高（＜0.01）；與T2DM組比較HMGB1蛋白在DHM組心肌組織中的表達及血漿中的釋放顯著降低（＜0.01），而陽性對照組差異無統(tǒng)計學意義（圖6）。

合理確定各因子權(quán)重對評價系統(tǒng)非常重要。目前，確定權(quán)重的方法有很多種，分為主觀賦權(quán)法和客觀賦權(quán)法?；趯哟畏治龇ê挽刂捣ǖ闹笜巳诤蠙?quán)重，使主觀和客觀相結(jié)合，計算權(quán)重更加合理、真實。

2.7 DHM對T2DM大鼠心肌組織p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白的影響

與正常對照組比較，T2DM組心肌組織中p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白比值顯著升高（＜0.05）；與T2DM組比較陽性對照組與DHM組心肌組織中p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白比值顯著降低（＜0.05或0.01，圖7）。

3 討論

糖尿病心肌病是一種心臟收縮和舒張功能受損的心功能障礙，是糖尿病慢性并發(fā)癥之一，最終進展為心力衰竭、心律失常及心源性休克等，重癥患者甚至猝死。糖尿病心肌病發(fā)病的核心因素主要為胰島素抵抗及糖脂代謝紊亂，而氧化應激、線粒體損傷、炎癥反應等是其常見的病理生理基礎。在糖尿病心肌病治療中，有效改善胰島素抵抗、糖脂代謝以及抑制炎癥能夠緩解糖尿病心肌病患者的病癥。然而，目前臨床上主要以控制血糖、血脂及對癥治療糖尿病心肌病，且長期服用具有毒副作用。已有研究證明，DHM通過激活自噬抑制miR-34a預防糖尿病心肌病，DHM也能通過抑制氧化應激減少心肌細胞凋亡預防糖尿病心肌病。DHM改善糖尿病心肌病以及機制報道尚不完善，炎性因子HMGB1在DHM治療糖尿病心肌病中的作用尚未見報道。本研究采用高脂高糖飲食加小劑量STZ誘導2型糖尿病大鼠心肌病模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)DHM可能通過抑制HMGB1及NF-κB p65磷酸化減少炎癥反應改善糖尿病大鼠心肌病。

影像學研究顯示，左心室向心性重構(gòu)是糖尿病心肌病的相關特征，可能與心肌能量受損和收縮期應變降低有關。糖尿病心臟肥厚與心肌甘油三酯沉積有關。此外，胰島素抵抗引起的高胰島素血癥也被認為直接促進心肌肥厚。一些臨床前和臨床研究的目的是破譯糖尿病心肌病的潛在機制。在所有的輔助因素中，糖脂代謝紊亂似乎在2型糖尿病這一病理過程中起著重要的作用。我們的研究也證實，在2型糖尿病大鼠模型中，總膽固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白及胰島素抵抗指數(shù)均升高，大鼠心臟彩超顯示射血分數(shù)、左室短軸縮短率、每搏輸出量均不同程度的降低，而左心室舒張末期內(nèi)徑及左心室收縮期內(nèi)徑均升高，表示糖尿病大鼠舒張期和收縮期收縮功能降低，并伴有心肌細胞收縮減弱等心功能不全的現(xiàn)象，這與許多文獻報道一致。二甲雙胍是2型糖尿病的一線降糖藥物，除了降低血糖外，研究顯示其可能對T2DM患者的心血管事件風險有一定影響,文獻報道它能抑制2型糖尿病小鼠的炎癥、凋亡和氧化應激減輕糖尿病心肌病。與其他降糖藥相比，MET可降低T2DM患者心血管事件的風險，因此本研究將其作為陽性對照藥。按照文獻劑量給予DHM灌胃治療能改善糖尿病大鼠糖脂代謝紊亂及胰島素抵抗，與MET組比較并無太大差異，而對糖尿病大鼠心功能不全的現(xiàn)象不同程度的減輕作用，其作用相比MET組更明顯，這在以往的研究中未見報道。研究顯示DHM的抗炎作用強大，能抑制NF-κB介導的炎癥，我們推測DHM改善糖尿病心肌病的作用與其抗炎作用相關。

炎癥反應是2型糖尿病心肌病變常見的病理生理機制。HMGB1是一種促炎因子，在多種組織中高表達，在外界刺激下能從細胞核中釋放出來，促進炎癥的發(fā)生和發(fā)展。有研究表明HMGB1不僅能對炎癥刺激做出反應，而且能誘導巨噬細胞和中性粒細胞產(chǎn)生炎癥介質(zhì)。HMGB1 刺激巨噬細胞誘導組織壞死因子（TNF）-α、白細胞介素（IL）-1α、IL-1β、IL-1ra、IL-6、IL-8、巨噬細胞炎性蛋白（MIP）1α和MIP-1β的從頭合成，在心力衰竭和重塑過程中起重要作用。我們前期研究中發(fā)現(xiàn)，DHM 能夠有效抑制HMGB1 的表達和釋放；HMGB1亦能夠調(diào)控NF-κB信號轉(zhuǎn)導途徑。結(jié)合本研究，我們猜測HMGB1可能在DHM抑制2型糖尿病心功能不全中發(fā)揮一定的作用。我們構(gòu)建高脂高糖飲食加小劑量STZ誘導2型糖尿病大鼠模型，WB 檢測大鼠心臟組織中HMGB1及NF-κB p65及其磷酸化蛋白的表達，ELISA檢測大鼠血漿中HMGB1的含量結(jié)果發(fā)現(xiàn)，糖尿病大鼠能夠明顯增強HMGB1及磷酸化NF-κB p65的表達，增加HMGB1的釋放。而DHM治療的糖尿病大鼠HMGB1表達及釋放被顯著抑制，NF-κB p65磷酸化蛋白的表達的也顯著下調(diào)，而陽性對照藥MET對HMGB1的抑制作用并不明顯。綜合上述研究結(jié)果，我們認為，DHM可能通過抑制高血糖所致的HMGB1表達及釋放，改善糖尿病心功能不全的現(xiàn)象，MET改善糖尿病大鼠心功能的作用與HMGB1的表達與釋放可能無關。

（3）水資源論證企業(yè)。論證企業(yè)的水平參差不齊。受地域影響和人才流動，有些企業(yè)擁有專業(yè)技術(shù)人員的人數(shù)多、素質(zhì)高，技術(shù)力量雄厚；有些企業(yè)經(jīng)常在某地做論證，區(qū)域水文地質(zhì)條件了解，數(shù)據(jù)更為詳實，基礎工作也比較全面。

在2型糖尿病心肌病中，促炎因子增加以及自主神經(jīng)的病變也均可促進心臟纖維化，導致心臟結(jié)構(gòu)和功能異常。有文獻證明，2型糖尿病大鼠勻漿的心臟組織中膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(副交感神經(jīng)活性的標志)明顯低于對照組，說明糖尿病時心臟會發(fā)生自主神經(jīng)病變，副交感神經(jīng)活性下降，心率應該增快。而我們的實驗在給2型糖尿病大鼠做心臟彩超時發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠的心率反而降低，這與報道相悖，于是我們進一步對大鼠進行心電圖觀察發(fā)現(xiàn)，在模型組大鼠心臟心電圖結(jié)果中顯示有明顯的房顫現(xiàn)象。因此，考慮糖尿病大鼠心率減慢的原因可能是隨著模型組心衰時間延長，心肌纖維化會影響到心臟傳導，心率會越來越慢。新近有研究提示在糖尿病動物中，發(fā)現(xiàn)血漿腫瘤壞死因子α和白細胞介素-1β水平升高，而在2型糖尿病代謝模型中，這些循環(huán)促炎因子是心室復極受損的原因，而心室復極受損是導致心律失常易感性較高的原因。在我們的研究中證實，糖尿病大鼠血漿中促炎因子HMGB1釋放增加，心肌組織中的HMGB1及磷酸化NF-κB p65蛋白的表達上調(diào)，糖尿病心臟組織的病理圖片中也顯示明顯的炎癥浸潤，提示糖尿病大鼠心律失常的原因也可能是由于HMGB1通過激活NF-κB p65促進心臟的炎癥反應所導致的。給予了DHM治療的糖尿病大鼠，心電圖中房顫明顯改善，心率也恢復正常，同時心肌組織中的HMGB1及磷酸化NF-κB p65蛋白的表達下調(diào)，極大程度改善了心肌組織的炎癥浸潤，提示DHM可能通過抑制HMGB1改善糖尿病引起的心臟傳導異常。

綜上所述，本研究通過構(gòu)建T2DM模型探討DHM對T2DM心功能不全的影響。結(jié)果顯示DHM能夠通過下調(diào)HMGB1及抑制NF-κB p65磷酸化，改善糖尿病引起的心臟舒張期和收縮期收縮功能降低及傳導異常的現(xiàn)象，緩解T2DM心功能不全。以上研究結(jié)果初步證實了DHM在糖尿病心肌病中的治療作用與炎癥因子HMGB1有關，為后期治療糖尿病心肌病的藥物開發(fā)提供了實驗依據(jù)。