非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）是與脂代謝異常有關(guān)的世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的慢性肝病。據(jù)估計(jì)全球NAFLD患病率約為25%，近幾十年來(lái)其患病率日益增長(zhǎng)。NAFLD疾病譜廣泛，從輕度脂肪變性（即肝細(xì)胞內(nèi)的脂滴沉積）到以脂肪變性、炎癥和肝細(xì)胞氣球樣變性為特征的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）。單純性肝脂肪變性是良性和可逆的；然而，NASH 是一種潛在的嚴(yán)重疾病，可進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化和肝細(xì)胞癌（HCC）。目前該病的發(fā)病機(jī)制還未完全闡明，多種理論的提出如：二次打擊學(xué)說(shuō)、多次打擊學(xué)說(shuō)、脂質(zhì)異位沉積、腸道菌群失調(diào)等都只是冰山一角。盡管其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，但NAFLD/NASH 的一個(gè)不變特征是它總是在肝脂肪變性的背景下發(fā)展，即肝細(xì)胞中異常脂滴的積累。當(dāng)各種細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外應(yīng)激事件與脂肪變性相結(jié)合時(shí)，肝細(xì)胞會(huì)經(jīng)歷應(yīng)激/損傷反應(yīng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞損傷和死亡，這是NAFLD 的關(guān)鍵特征。因此，探索脂質(zhì)代謝的相關(guān)機(jī)制對(duì)于了解NAFLD的病理生理學(xué)至關(guān)重要。

四跨膜蛋白8（TSPAN8）是一種具有四次跨膜結(jié)構(gòu)的小相對(duì)分子質(zhì)量的膜蛋白，其通過(guò)與自身和其他各種細(xì)胞信號(hào)分子相互作用形成TSPAN8 介導(dǎo)的蛋白質(zhì)復(fù)合物。這些蛋白質(zhì)復(fù)合物有助于構(gòu)建富含四跨膜蛋白的微域，可有效介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。生理?xiàng)l件下，TSPAN8 在調(diào)節(jié)生物功能方面起著至關(guān)重要的作用，包括白細(xì)胞運(yùn)輸、血管生成和傷口修復(fù)。以往的研究表明TSPAN8與2 型糖尿?。═2D）和肥胖相關(guān)。流行病學(xué)研究表明，NAFLD與包括T2D和肥胖在內(nèi)的代謝紊亂高度相關(guān)。臨床上，NAFLD 患者往往伴有肥胖、胰島素抵抗和/或T2D，據(jù)報(bào)道，超過(guò)76%的T2D患者患有NAFLD。此外，超過(guò)90%的接受減肥手術(shù)的重度肥胖患者患有NAFLD。與NAFLD 相似，肥胖也以脂質(zhì)代謝異常為特征。同時(shí)，我們前期通過(guò)蛋白組學(xué)的方法發(fā)現(xiàn)TSPAN8在人NAFLD肝臟組織的表達(dá)量明顯低于正常肝臟組織。所以我們推測(cè)TSPAN8可能與NAFLD的發(fā)生發(fā)展有著千絲萬(wàn)縷的聯(lián)系，然而目前尚無(wú)確切研究表明他們之間的直接關(guān)聯(lián)。本研究旨在觀察TSPAN8在NAFLD發(fā)生發(fā)展中的變化，探討TSPAN8對(duì)NAFLD成脂作用的機(jī)制。

（1）分析表格中淀粉量的變化情況，推測(cè)磷酸化酶的具體功能包括_______________________。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

6～8 周齡健康C57BL/6J雄性小鼠（SPF 級(jí)）30只，體質(zhì)量18.9±2.77 g，購(gòu)于重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心（本研究符合重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)所制定的倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，動(dòng)物倫理批準(zhǔn)號(hào)為2021-514），實(shí)驗(yàn)環(huán)境為明暗周期12 h、恒溫26 ℃、小鼠自由飲水與進(jìn)食；人肝癌細(xì)胞株HepG2 細(xì)胞（廣州賽庫(kù)生物技術(shù)有限公司）；高脂飼料（Research Diets），普通飼料由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；棕櫚酸（PA）、油酸（OA）（Sigma-Aldrich）；牛血清白蛋白BSA-Ⅴ（不含脂肪酸）、油紅O染色試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）；甘油三酯（TG）測(cè)定試劑盒（邁瑞公司）；胎牛血清、高糖DMEM培養(yǎng)基、Opti-MEM?I 減血清培養(yǎng)基（Gibco）；TRIzol Reagent（Life Technologies）；反轉(zhuǎn)錄試劑PrimeScript?RT reagent Kit with gDNA Eraser、TB Green Premix Ex Taq II（TaKaRa）；SDS-PAGE凝膠快速配制試劑盒、PIPA裂解液、PMSF蛋白酶抑制劑、Western轉(zhuǎn)模液、TBS漂洗緩沖液、超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒、BeyoColor彩色預(yù)染蛋白相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）；蛋白含量檢測(cè)試劑盒（江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司）；β-actin抗體（艾比瑪特生物醫(yī)藥有限公司）；TSPAN8 抗體（Abcam）。TSPAN8 質(zhì)粒、空載質(zhì)粒、GFP質(zhì)粒（載體均為pcDNA3.1）（上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司）；Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染試劑盒（Invitrogen）。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 將30只小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為2組，普通飼料組（ND）和高脂飼料組（HFD）各15只。ND組使用普通飼料喂養(yǎng)，HFD組使用高脂飼料（60%脂肪、20%碳水化合物、20%蛋白質(zhì)）喂養(yǎng)。分別在1、3、6月末，隨機(jī)選出ND組與HFD組小鼠各5只，稱(chēng)量小鼠體質(zhì)量，禁食禁飲12 h后處死，迅速摘除小鼠眼球，取血分離血清后，放于-80 ℃保存，后續(xù)檢測(cè)血清TG含量。取出肝臟，稱(chēng)取肝臟濕重后迅速予以冰生理鹽水進(jìn)行漂洗，部分肝組織經(jīng)10%福爾馬林固定后石蠟包埋進(jìn)行常規(guī)HE染色；其余部分液氮速凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)與分組 HepG2 細(xì)胞用含10%胎牛血清的高糖DMEM 培養(yǎng)液，培養(yǎng)于37 ℃、含5%CO的恒溫培養(yǎng)箱中。當(dāng)6孔板內(nèi)的細(xì)胞密度達(dá)到40%～50%時(shí)，分成6組，分別給予不同處理。對(duì)照（CON）組：完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h；游離脂肪酸（FFA）組：終濃度為1 mmol/L FFA[FFA為OA和PA混合物（OA∶PA=2∶1）]溶液+完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h；TSPAN8 質(zhì)粒過(guò)表達(dá)（PCDNATSPAN8）組：轉(zhuǎn)染TSPAN8-PCDNA3.1質(zhì)粒24 h；過(guò)表達(dá)對(duì)照（PCDNA3.1）組：轉(zhuǎn)染PCDNA3.1 質(zhì)粒24 h；PCDNA-TSPAN8+FFA模型干預(yù)（PCDNA-TSPAN8+FFA）組：轉(zhuǎn)染TSPAN8-PCDNA3.1 質(zhì)粒24 h，換終濃度為1 mmol/L FFA 溶液+完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h；PCDNA3.1+FFA 模型干預(yù)對(duì)照（PCDNA3.1+FFA）組：轉(zhuǎn)染PCDNA3.1質(zhì)粒24 h，換終濃度為1 mmol/L FFA溶液+完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h。

1.2.3 細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染 轉(zhuǎn)染前1d，將HepG2細(xì)胞用胰酶消化后按照約2.5×10/孔細(xì)胞在6孔板中進(jìn)行鋪板，24 h內(nèi)開(kāi)始轉(zhuǎn)染。對(duì)于每孔細(xì)胞，用125 μL無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋2.5 μg 質(zhì)粒DNA 與5 μL P3000，混勻；用125 μL無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋7.5 μL lipo3000，震蕩2～3 s混勻；將稀釋的DNA溶液加入稀釋的轉(zhuǎn)染試劑中，輕輕混勻，室溫孵育10～15 min。六孔板中每孔加入2 mL含10%血清的培養(yǎng)基，再每孔逐滴加入上訴250 μL轉(zhuǎn)染試劑-DNA混合液，輕搖培養(yǎng)板使其混勻，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 Western blot檢測(cè)TSPAN8的蛋白表達(dá)水平 使用RIPA裂解液與PMSF蛋白酶抑制劑的混合溶液從培養(yǎng)的細(xì)胞或小鼠肝組織中提取總蛋白質(zhì)，BCA法測(cè)定蛋白濃度，并用5×上樣緩沖液配平，置于100 ℃充分變性10 min，蛋白樣品上樣后，經(jīng)電泳、轉(zhuǎn)膜至PⅤDF 膜上；5%脫脂奶粉封閉1 h；4 ℃冷藏室搖床過(guò)夜孵育相應(yīng)一抗（TSPAN8抗體稀釋比例為1∶1000）；TBST 洗膜3次，10 min/次；室溫?fù)u床上孵育二抗1 h（β-actin抗體稀釋比例1∶2000）；TBST 洗膜3 次，10 min/次；超敏ECL試劑顯影。

在農(nóng)藥減量控害的基礎(chǔ)上，綠色創(chuàng)新發(fā)展才是重中之重。貴州大學(xué)教授陳卓介紹說(shuō)，我國(guó)農(nóng)藥科技創(chuàng)新平臺(tái)已經(jīng)初具規(guī)模，一批國(guó)家級(jí)、省部級(jí)農(nóng)藥科技創(chuàng)新平臺(tái)相繼建立，我國(guó)農(nóng)藥創(chuàng)制體系已從仿制為主向自主創(chuàng)新穩(wěn)步發(fā)展，科技創(chuàng)新基礎(chǔ)理論體系和方法已經(jīng)初步形成。

郭施亮（財(cái)經(jīng)名博，職業(yè)投資者）：2019年到底是炒房還是炒股？從實(shí)際情況出發(fā)，雖然國(guó)內(nèi)部分地區(qū)的房地產(chǎn)市場(chǎng)存在穩(wěn)中有升的預(yù)期，但考慮到價(jià)格風(fēng)險(xiǎn)、流動(dòng)性壓力以及政策不明朗等因素，實(shí)際上對(duì)于房地產(chǎn)的投資也應(yīng)該趨于理性與謹(jǐn)慎。至于股票投資，筆者認(rèn)為，可能呈現(xiàn)出先抑后揚(yáng)的表現(xiàn)，而對(duì)于2500點(diǎn)附近乃至以下的A股市場(chǎng)，實(shí)際上無(wú)需過(guò)分恐慌，當(dāng)市場(chǎng)估值水平以及平均價(jià)格水平得到大幅壓縮之際，或許更有利于提升市場(chǎng)自身的投資吸引力，同時(shí)也為以后股市的回升創(chuàng)造出更好的發(fā)揮空間。

女警官笑了，聰明人的話(huà)。送何良諸走出辦公室，沿樓道前行。警察找人談話(huà)，一般是不送的，更不會(huì)送這么遠(yuǎn)． 女警官很客氣。何良諸可不客氣，沒(méi)有說(shuō)“留步”。本來(lái)，一個(gè)電話(huà)打到文化廳，就能辦的事，卻興師動(dòng)眾地把他調(diào)來(lái)。你們的衙門(mén)口，太邪乎了。

睜開(kāi)雙眼時(shí)，小伊身穿病號(hào)服裹在白色被子里，迎面而來(lái)的是來(lái)自一些穿著制服的人探尋的目光。出乎意料的是，警察并沒(méi)有追究他的民事責(zé)任，只是指著病房外抽泣著的女人問(wèn)他是否認(rèn)識(shí)。本來(lái)毫不猶豫的“不認(rèn)識(shí)”三個(gè)字，不知為何無(wú)法說(shuō)出口，那女人頭上的發(fā)絲白的有些晃眼，刺痛了他的眼睛，熟悉的陣痛再次襲來(lái)。

油紅O染色結(jié)果顯示：與CON組（圖3A1）比較，F(xiàn)FA組（圖3A2）細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴聚集明顯增多，呈較大的圓顆粒狀。全自動(dòng)生化儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TG含量結(jié)果顯示：FFA組細(xì)胞內(nèi)TG水平高于CON 組，約為CON 組5倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.001，圖3B），以上結(jié)果充分證明NAFLD體外細(xì)胞模型構(gòu)建成功。

1.2.7 油紅O染色 按照油紅O染色試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，于顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴沉積情況并拍照。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用GraphPad Prism 9軟件進(jìn)行分析，比較兩組間數(shù)據(jù)采用獨(dú)立樣本檢驗(yàn)，以＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠體質(zhì)量和血清TG含量檢測(cè)

與相同喂養(yǎng)時(shí)間ND組小鼠體質(zhì)量相比，1、3、6月末HFD組小鼠體質(zhì)量均有增長(zhǎng)（＜0.01），且隨著喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，兩種喂養(yǎng)方式的小鼠體質(zhì)量差距逐漸增大。與相同喂養(yǎng)時(shí)間ND組小鼠體質(zhì)量相比，1月末HFD組小鼠血清TG差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而3、6月末HFD組小鼠血清TG含量分別為同喂養(yǎng)時(shí)間ND組的1.7倍（＜0.05）、1.8倍（＜0.001），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表2）。

2.2 小鼠肝臟HE染色

將GFP 質(zhì)粒、TSPAN8 質(zhì)粒和空載質(zhì)粒（PCDNA3.1）分別轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞24 h，熒光顯微鏡下為綠色的即為轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)的GFP質(zhì)粒（圖5A）。同時(shí)通過(guò)qRT-PCR 的方法檢測(cè)TSPAN8質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果顯示該實(shí)驗(yàn)條件質(zhì)粒轉(zhuǎn)染24 h 后可以明顯增加TSPAN8質(zhì)粒在HepG2細(xì)胞中的表達(dá)水平（＜0.001，圖5B）。

2.3 TSPAN8在小鼠NAFLD模型中的表達(dá)

用qRT-PCR與Western blot法檢測(cè)CON組與FFA組兩組中HepG2細(xì)胞TSPAN8的表達(dá)情況。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：與CON組比較，F(xiàn)FA組TSPAN8的表達(dá)明顯下降，約為對(duì)照組的0.5 倍（＜0.01，圖4A）；Western blot 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與CON組比較，TSPAN8在FFA組中的蛋白表達(dá)降低（圖4B），用imagej軟件進(jìn)行半定量分析，F(xiàn)FA組TSPAN8的表達(dá)量約為CON組的0.5倍（＜0.001，圖4C），與qRT-PCR結(jié)果趨勢(shì)一致。

1.2.4 qRT-PCR 檢測(cè)TSPAN8 和成脂相關(guān)基因的mRNA 表達(dá)水平 TRIzol 法提取各組細(xì)胞總RNA，DEPC水溶解，用微量分光光度計(jì)檢測(cè)總RNA的濃度和純度，并用反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄為cDNA，反應(yīng)條件為37 ℃15 min，85 ℃5 s，4 ℃1 min。采用TB Green Premix II預(yù)混液于熒光定量PCR 儀上進(jìn)行測(cè)定，反應(yīng)條件為95 ℃30 s；95 ℃5 s，60 ℃30 s，40 個(gè)循環(huán)；繪制溶解曲線(xiàn)。β-actin基因作為內(nèi)參，mRNA 相對(duì)表達(dá)量通過(guò)公式2計(jì)算。β-actin引物由中國(guó)銳博公司設(shè)計(jì)并合成。其他qRT-PCR 引物均上海生工生物工程股份有限公司合成。qRT-PCR引物序列見(jiàn)表1。

2.4 NAFLD細(xì)胞模型驗(yàn)證

1.2.6 生物化學(xué)指標(biāo)的檢測(cè) 全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)小鼠血清和HepG2細(xì)胞內(nèi)TG含量。

2.5 TSPAN8在NAFLD體外模型中的表達(dá)

隨機(jī)選取ND與HFD組1、3、6月末的小鼠各3只，通過(guò)Western blot法分別檢測(cè)其肝臟TSPAN8表達(dá)情況（圖2A）。用imagej軟件進(jìn)行半定量分析示，與相同喂養(yǎng)時(shí)間ND組比較，HFD組TSPAN8相對(duì)表達(dá)量在喂養(yǎng)1月末差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05），3、6月末均明顯下調(diào)（＜0.05），3月末TSPAN8的相對(duì)表達(dá)量約為對(duì)照組的0.5倍，6月末約為0.4倍。與1月末HFD組相比較，3、6月末HFD組也均明顯下調(diào)（＜0.05）。與3月末HFD比較，6月末HFD差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05，圖2B）。

2.6 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染驗(yàn)證

小鼠肝臟HE染色結(jié)果示：1、3、6月末ND 組小鼠肝臟切片肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞大小正常、形態(tài)規(guī)整、無(wú)明顯脂肪變，無(wú)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)；而隨著高脂飼料喂養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，HFD組小鼠肝臟脂肪變逐漸增多，1月末未見(jiàn)明顯脂肪變，3月末可見(jiàn)少量脂肪變，6月末脂肪變較多（＞33%），均無(wú)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)（圖1）。以上結(jié)果提示6月末HFD組小鼠NAFLD模型構(gòu)建成功。

2.7 過(guò)表達(dá)TSPAN8 對(duì)HepG2細(xì)胞中脂質(zhì)蓄積的影響

油紅O染色法顯示：與PCDNA3.1+FFA組（圖6A1）相比，PCDNA-TSPAN8+FFA組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)堆積明顯減少（圖6A2）。肝細(xì)胞內(nèi)TG檢測(cè)結(jié)果表明：PCDNATSPAN8+FFA 組細(xì)胞內(nèi)TG 水平低于PCDNA3.1+FFA 組，約為PCDNA3.1+FFA組0.4倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.001，圖6B）。

明代王驥德尚詞之婉媚，貶蘇詞之豪放，其在《曲律》中云：“詞曲不尚雄勁險(xiǎn)峻，只一味嫵媚閑艷，便稱(chēng)合作。是故蘇長(zhǎng)公、辛幼安并置兩廂，不得入室。”［11］清代沈謙崇尚婉約之風(fēng)格，否定蘇軾“以詩(shī)為詞”，其云蘇詞“為填詞之變調(diào)，非詞之正宗也”（《答毛稚黃論填詞書(shū)》）。厲鄂以蘇詞不就聲律，故稱(chēng)其詞為“硬語(yǔ)”。

2.8 過(guò)表達(dá)TSPAN8對(duì)NAFLD體外模型中成脂基因的影響

qRT-PCR結(jié)果示，與PCDNA3.1 組比較，PCDNATSPAN8 組中的ACOX1、FABP1、SCD、PPARα、PPARγ mRNA表達(dá)無(wú)明顯差異（圖7），F(xiàn)ATP5 mRNA 的表達(dá)量則明顯低于PCDNA3.1組（圖7，＜0.01）。與CON組相比，F(xiàn)FA組FATP5 mRNA 水平明顯增加（＜0.001），與FFA 組相比PCDNA-TSPAN8+FFA 組mRNA 水平明顯降低（圖8，＜0.001）。

3 討論

在NAFLD 的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，肝臟中過(guò)多的脂肪堆積是對(duì)正常肝細(xì)胞的首要打擊。因此，抑制NAFLD 早期過(guò)度脂質(zhì)積累是對(duì)抗NAFLD 的重要策略。以往的一項(xiàng)TSPAN8敲除鼠研究表明TSPAN8與肥胖和脂質(zhì)代謝有關(guān)，TSPAN8基因的缺失會(huì)導(dǎo)致正常飲食和高脂肪高碳水化合物飲食雄性小鼠的體質(zhì)量以及血漿游離脂肪酸水平降低，定量核磁共振顯示其總體質(zhì)量減少是脂肪組織質(zhì)量和瘦組織質(zhì)量（分別為16.9%和10.9%）減少導(dǎo)致。但是具體的機(jī)制并未闡明，也沒(méi)有說(shuō)明這種現(xiàn)象是否與肝臟的脂質(zhì)代謝功能相關(guān)。我們的研究發(fā)現(xiàn)TSPAN8在NAFLD的動(dòng)物和細(xì)胞模型中表達(dá)降低，過(guò)表達(dá)TSPAN8會(huì)降低NAFLD細(xì)胞中的脂質(zhì)蓄積，似乎與之前的研究矛盾。我們推測(cè)可能是小鼠肝臟中的TSPAN8缺失，導(dǎo)致其肝臟攝入游離脂肪酸增多合成TG的能力增加，導(dǎo)致肝內(nèi)TG蓄積，脂肪重新分布。事實(shí)上已經(jīng)有相關(guān)研究表明基因驅(qū)動(dòng)的NAFLD可能會(huì)導(dǎo)致“瘦”體質(zhì)量，實(shí)際上是一種“脂肪營(yíng)養(yǎng)不良NAFLD”表型，其特征是外周脂肪減少但中央脂肪積累增加，循環(huán)血脂正常或低。

FATP5是一種肝臟特異性蛋白質(zhì)，主要由肝細(xì)胞表達(dá)，并定位于基底膜。FATP5 蛋白在脂肪酸的攝取中起重要作用。而脂肪酸代謝的改變是包括NAFLD在內(nèi)的許多代謝疾病和病理狀況的標(biāo)志。一項(xiàng)小鼠FATP5因敲除實(shí)驗(yàn)表明，該基因的缺失可以防止肝臟TG積聚，顯著降低脂質(zhì)攝取，提高胰島素敏感性。通過(guò)基于氣相色譜/質(zhì)譜的分析，分別在KO小鼠中檢測(cè)發(fā)現(xiàn)肝臟TG含量減少了59%，長(zhǎng)鏈脂肪酸的攝取量減少了50%，同時(shí)該研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ATP5 的缺失會(huì)改變肝臟脂質(zhì)攝取和輸出的調(diào)節(jié)，導(dǎo)致脂質(zhì)從肝臟重新分布到其他FFA 代謝組織。另一項(xiàng)研究表明，在NAFLD的晚期NASH階段，肝臟FATP5 表達(dá)與NAFLD 組織學(xué)變化呈負(fù)相關(guān)，這與NASH 進(jìn)展為肝硬化期間的肝臟脂肪減少有關(guān)。我們的研究表明，與細(xì)胞對(duì)照組相比，F(xiàn)ATP5在由FFA誘導(dǎo)的NAFLD模型中表達(dá)顯著升高，在細(xì)胞中過(guò)表達(dá)TSPAN8會(huì)導(dǎo)致FATP5的表達(dá)降低，此時(shí)油紅O染色以及細(xì)胞內(nèi)TG檢測(cè)提示細(xì)胞中的TG明顯減少。結(jié)合之前的研究結(jié)果，所以我們推測(cè)TSPAN8過(guò)表達(dá)引起的細(xì)胞內(nèi)脂滴的減少可能是通過(guò)抑制FATP5的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。

綜上，本研究探索了TSPAN8在NAFLD 動(dòng)物模型形成過(guò)程中的變化，以及在體外細(xì)胞模型中對(duì)脂滴生成的影響。研究發(fā)現(xiàn)TSPAN8在NAFLD動(dòng)物和細(xì)胞模型中表達(dá)均下降，TSPAN8過(guò)表達(dá)可使NAFLD細(xì)胞模型中的脂滴減少,而這種作用可能是通過(guò)影響下游PAFT5基因的表達(dá)，從而改變肝臟對(duì)脂肪酸的攝入引起的。這些發(fā)現(xiàn)表明TSPAN8 可能在NAFLD 的發(fā)生和發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用，為NAFLD脂代謝提供新的作用機(jī)制，通過(guò)干預(yù)TSPAN8抑制肝臟中FATP5 介導(dǎo)的脂肪酸的攝取似乎是治療NAFLD 的潛在途徑。