肺動脈高壓是一種罕見但危害極大的心肺血管疾病，被稱作心血管里的癌癥。其發(fā)病率低，但一旦發(fā)生會增加特發(fā)性肺纖維化、慢性阻塞性肺疾病和慢性心力衰竭的風(fēng)險。流行病學(xué)資料顯示特發(fā)性及遺傳性PAH患者在經(jīng)過常規(guī)治療后，5年生存率僅為20.8%。目前，臨床上用于治療肺動脈高壓的藥物不多，而且藥價昂貴，這使得肺動脈高壓面臨用藥尷尬，也是造成治療困境的原因之一。

丹參酮IIA是中國傳統(tǒng)中藥丹參的成分，報道認(rèn)為其對肺動脈高壓的治療起著重要的作用。研究證實，肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖是肺動脈高壓程度加重的原因之一，磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B-內(nèi)皮型一氧化氮合酶（PI3K/Akt-eNOS）信號通路在各種細(xì)胞生長、遷移及增殖的調(diào)節(jié)中起著重要作用，內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）受磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（PKB/Akt）的調(diào)控。目前尚未有實驗證據(jù)表明丹參酮IIA治療野百合堿所致大鼠肺動脈高壓與PI3K/Akt-eNOS信號通路有關(guān)。結(jié)合文獻調(diào)查及前期預(yù)實驗基礎(chǔ)，我們推測丹參酮IIA可能通過調(diào)控PI3K/Akt-eNOS信號通路發(fā)揮改善肺動脈高壓的作用，故本文進行了初步探索，現(xiàn)報道如下。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

雄性無特定病原體（SPF）級Sprague-Dawley（SD）大鼠100只，體質(zhì)量169～225 g，購自斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(京)2018-0044。SD大鼠飼養(yǎng)于25 ℃恒溫，相對濕度50%，常規(guī)飼料與自由飲水，以及12 h光照/黑暗交替循環(huán)的屏障環(huán)境中。所有動物處理和程序均經(jīng)南方醫(yī)科大學(xué)動物保護和使用委員會批準(zhǔn)。

1.2 試劑

野百合堿（MCT）（Sigma-aldrich）；PI3K 抑制劑LY294002（Sigma）；細(xì)胞核染料4'，6-diamidino-2-phenylindole （DAPI,Partec Flow Cytometry Technology）；RIPA裂解液（Cell SignalingTechnology）；超敏型電化學(xué)發(fā)光顯色（ECL）試劑盒（賽默飛世爾科技公司）。

1.3 儀器

蛋白電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀及Quantity One 1-D分析軟件購自Bio-Rad公司；BL-420S 生物機能實驗系統(tǒng)購自成都泰盟科技有限公司；HistoCore Arcadia 包埋機（EG1150H）與手動轉(zhuǎn)輪石蠟切片機（RM2235）購自上海萊卡儀器有限公司。

肺小動脈肌化程度如圖3所示。對照組完全肌化肺小血管比例為（12±2.46）%，而模型組大鼠完全肌化肺小血管比例高達（51.37±5.45）%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.001）。丹參酮IIA組完全肌化肺小血管比例較模型組顯著降低，約占（13.17±2.95）%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.001）。丹參酮IIA+PI3K抑制劑組為（48.25±4.13）%（=0.71），PI3K 抑制劑組為（47.39±3.14）%（=0.53），差異無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05）。

“一體化控制法”替代基于容量的啟/停循環(huán)（加載/卸載時序控制）。變速提供了更高效、更可靠的節(jié)能解決方案，它能在較寬的工作設(shè)計范圍內(nèi)隨著數(shù)據(jù)中心熱負(fù)荷的不斷變化而高效地響應(yīng)運行。同時，需要采用一種適用于變速設(shè)備工作特性的控制策略，使其能重新發(fā)揮所有變速設(shè)備的優(yōu)勢。在變速制冷系統(tǒng)中，所有電動設(shè)備的轉(zhuǎn)速隨負(fù)荷的增減而增減（此方案完全不同于在非全負(fù)荷條件下讓定速設(shè)備全速運轉(zhuǎn)同時采用機械限流的措施來控制流量）。壓縮機一旦使用了變頻器（VFD），泵和風(fēng)機在非滿負(fù)荷條件下的效率都會得到提高。由于泵和風(fēng)機的運行遵循“功率與轉(zhuǎn)速的立方成正比（P∝N3）”的定律，因此，節(jié)能的潛力是非常巨大的。

1.4 動物分組及處理

HE染色結(jié)果見圖2。對照組大鼠肺組織血管厚度正常，肺小動脈（直徑＜100μm）血管中層約占血管總橫截面積（21.12±3.40）%，而模型組大鼠肺小動脈中膜厚度明顯增加，約占血管總橫截面積（46.37±2.29）%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.001）。與模型組比較，丹參酮IIA組肺小動脈中膜厚度較模型組顯著降低，約占血管總橫截面積（35.28±3.46）%（=0.006），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.01）。丹參酮IIA+PI3K抑制劑組為（43.17±3.56）%（=0.59），PI3K抑制劑組為（41.24±3.34）%（=0.23），差異無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05）。

1.5 大鼠右心室收縮壓和右心室肥厚指數(shù)的測定

各組大鼠飼養(yǎng)4周后，終止實驗，將大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉40 mg/kg進行麻醉，經(jīng)頸行正中切口，找到右頸外靜脈并分離出，采用經(jīng)頸靜脈右心導(dǎo)管插管的方法檢測右心室收縮壓（RⅤSP），記錄數(shù)值，立即處死大鼠取出心臟，剪去心房和心耳，分別稱量右心室、左心室和室間隔的質(zhì)量，采用濾紙吸干血液后稱質(zhì)量，右心室肥厚指數(shù)（RⅤHI）=右心室質(zhì)量/（左心室質(zhì)量+室間隔質(zhì)量）。

1.6 蘇木精-伊紅（HE）染色

取各組大鼠肺組織置于4%多聚甲醛中固定24 h，然后進行脫水、石蠟包埋和切片，最后再經(jīng)過蘇木精染色、1%鹽酸乙醇分化、返藍、伊紅染色、脫水、透明、中性樹膠封片等步驟即可觀察大鼠肺血管形態(tài)。

WT%=（2×WT/ED）×100%。

圖13-圖15所示的是小曲拐應(yīng)力、應(yīng)變最大的節(jié)點1 703(從圖7-圖9可以看出3個小曲拐的發(fā)生最大應(yīng)力、應(yīng)變的節(jié)點編號均為1 703)的應(yīng)力、應(yīng)變隨主軸轉(zhuǎn)動一周的變化情況。由圖中可以看出，3個小曲拐應(yīng)力應(yīng)變的變化規(guī)律基本一致，進一步說明了渦旋壓縮機3個小曲拐受力情況與運動規(guī)律基本相同，符合小曲拐平面四桿機構(gòu)的運動規(guī)律。由于渦旋壓縮機電動機剛開始驅(qū)動，因此圖中剛開始會出現(xiàn)一個突變狀況，由圖中看出3個小曲拐的最大應(yīng)力約為11N/mm2，而最大應(yīng)變約為7×10-5mm。由此可見，小曲拐的變形還很小的，因此選擇的小曲拐符合渦旋壓縮機防自轉(zhuǎn)的要求，并為小曲拐的進一步優(yōu)化設(shè)計提供重要的參考。

（WT：管壁厚度；ED：血管外徑）。

布萊德先生說：“南希是我們這里的一個病人，患乳腺癌，人很年輕，只有44歲。她在這里住了四周，剛住進來的時候，非常緊張，非?？謶?。經(jīng)過訓(xùn)練，她變得很平靜了。剛才去世的時候，她十分安詳?！?/p>

1.7 α-SMA免疫熒光染色

試劑盒購自研域（上海）化學(xué)試劑有限公司，操作按照試劑盒說明嚴(yán)格進行。

1.8 Western blot實驗

（1）提取大鼠肺組織總蛋白并取10 μL進行電泳，電泳條件：電壓先設(shè)為80 Ⅴ，當(dāng)溴酚藍泳動至分離膠后調(diào)升至120 Ⅴ至溴酚藍達分離膠底部；（2）轉(zhuǎn)膜：100 Ⅴ電壓水浴2 h，蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯（PⅤDF）膜；（3）封閉：PⅤDF膜浸泡于5%牛血清白蛋白（BSA），室溫下封閉2 h；（4）過夜：將磷酸化的信號通路抗體（PI3K、Akt、eNOS）用5%BSA稀釋至工作濃度4 ℃孵育過夜；（5）洗膜：將辣根過氧化物酶結(jié)合的二抗用5%BSA稀釋至工作濃度，與PⅤDF膜于室溫下作用1 h；再次洗膜，在PⅤDF膜上滴加適量的ECL發(fā)光試劑，室溫下作用1 min，用GelDocTM+系統(tǒng)進行曝光。用Quantity One 1-D分析軟件對條帶進行灰度掃描，并對其進行定量分析。

1.9 ELISA實驗

取各組大鼠肺組織置于4%多聚甲醛中固定24 h，然后進行脫水、石蠟包埋和切片，再經(jīng)過α-SMA免疫熒光染色以觀察大鼠肺血管形態(tài)。

1.10 統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用GraphPad Prism8軟件進行處理，所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組樣本間差異使用單因素方差分析比較，以＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。所有的實驗都是獨立重復(fù)3次。

培養(yǎng)學(xué)生的體育核心素養(yǎng)，可以使學(xué)生自主健身，這有利于提高學(xué)生的身體素質(zhì)，使學(xué)生掌握體育的基本知識、運動技能，掌握科學(xué)的鍛煉身體的方法，養(yǎng)成鍛煉的良好習(xí)慣，能夠提高自主鍛煉的能力，使學(xué)生的身體終身受益。提高他們的體育意識，增強學(xué)生的體質(zhì)健康水平?？梢耘囵B(yǎng)學(xué)生自我鍛煉、自我評價的能力，有助于培養(yǎng)終身體育，具有長遠(yuǎn)的意義。

2 結(jié)果

2.1 丹參酮IIA對MCT誘導(dǎo)大鼠右心室收縮壓和右心室肥厚指數(shù)的影響

PI3K、Akt、eNOS蛋白表達情況如圖4所示。與模型組比較，對照組大鼠肺組織PI3K、Akt、eNOS 蛋白磷酸化程度增加（＜0.001）；丹參酮IIA 組大鼠肺組織PI3K、Akt、eNOS蛋白磷酸化程度增加（＜0.001）；丹參酮IIA+PI3K 抑制劑組和PI3K 抑制劑組p-PI3K和p-Akt、p-eNOS 的表達與模型組相比無明顯差異（＞0.05）。

2.2 丹參酮IIA對MCT誘導(dǎo)大鼠肺動脈中膜厚度影響

將購買的100只SD大鼠（動物質(zhì)量合格證號：ZS-2020-0617）飼養(yǎng)1周后隨機分為5組（20只/組）。模型組（MCT）、丹參酮IIA組（TIIA）、丹參酮IIA+PI3K抑制劑組（TP）、PI3K 抑制劑組（PI）均先頸背部皮下注射MCT 60 mg/kg進行造模，對照組（Control）注射等體積的生理鹽水。造模2周后，丹參酮IIA組腹腔注射丹參酮IIA10 mg/kg、丹參酮IIA+PI3K抑制劑組腹腔注射丹參酮IIA 10 mg/kg+PI3K抑制劑1 mg/kg，PI3K抑制劑組注射PI3K抑制劑1 mg/kg，對照組和模型組腹腔注射等體積生理鹽水，連續(xù)2周。

2.3 丹參酮IIA對MCT誘導(dǎo)大鼠肺小動脈肌化影響

2018年7月21至22日在德國漢堡舉行了“漢堡作曲家國際比賽ICOM鋼琴比賽”。比賽結(jié)果如下：第一名是日本的Satona Sakaguchi；第二名是日本的Mariko Nogami；第三名是俄羅斯的Andrey Denisenko。

2015 年7月至 2015年12月，3 名參加培訓(xùn)的醫(yī)師均順利完成基礎(chǔ)操作訓(xùn)練和吻合模擬訓(xùn)練。經(jīng)過 20 次吻合訓(xùn)練后，總體評分由訓(xùn)練前的（65.0±10.8）分提高至（92.7±3.5）分，平均吻合時間由（279.0±48.0）s 縮短至（119.3±12.5）s，運動距離由（459.0±59.2）cm 縮短至（239.3±33.9）cm，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P 均＜0.05）。器械碰撞次數(shù)、器械離開視野次數(shù)、脫離目標(biāo)次數(shù)在訓(xùn)練前后無明顯變化（P 均＞0.05）。詳見表1。

2.4 丹參酮IIA抑制PI3K/Akt-eNOS信號通路

對照組大鼠右心室收縮壓和右心室肥厚指數(shù)正常，分別為（13.1±0.55）和（0.21±0.02），而模型組大鼠右心室收縮壓和右心室肥厚指數(shù)明顯增加，分別為（28.9±1.35）和（0.53±0.03），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.001）。丹參酮IIA組右心室收縮壓和右心室肥厚指數(shù)較模型組顯著降低，分別為（17.9±0.75）和（0.35±0.02），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.001）。丹參酮IIA+PI3K抑制劑組為（27.3±0.76，=0.18）和（0.5±0.02，=0.25），PI3K抑制劑組為（27.6±1.05，=0.32）和（0.49±0.02，=0.10），差異無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05，圖1）。

2.5 丹參酮IIA降低MCT誘導(dǎo)大鼠血清中eNOS、NO含量

對照組大鼠血清中eNOS、NO含量分別為（12.11±1.48）μmol/L和（33.61±4.03）μmol/L，模型組大鼠血清中eNOS、NO 含量降低，分別為（3.69±0.36）μmol/L 和（7.37±1.05）μmol/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.001）；而丹參酮IIA組大鼠血清中eNOS、NO含量增加，分別為（10.78±2.37）μmol/L和（32.45±3.98）μmol/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.001）；丹參酮IIA+PI3K 抑制劑組和PI3K抑制劑組與模型組比較，大鼠血清中eNOS、NO含量降低輕度增加，丹參酮IIA+PI3K抑制劑組大鼠血清中eNOS、NO含量分別為（4.12±2.06）μmol/L（=0.99）和（8.18±2.18）μmol/L（=0.99），PI3K抑制劑組大鼠血清中eNOS、NO 含量分別為（4.08±1.13）μmol/L（=0.99）和（7.98±1.12）μmol/L（=0.99），差異無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05，圖5）。

3 討論

PAH被稱作心血管里的癌癥，是一種罕見的致命的高危心肺血管疾病，會引起各種各樣的并發(fā)癥，如缺氧導(dǎo)致的呼吸困難，甚至是呼吸功能不全以及紫紺，右心房功能不全導(dǎo)致的肝硬化、房顫、水腫、發(fā)育不良、急性心臟病等，在嚴(yán)重的時候還會導(dǎo)致意外的猝死。因此，采用積極有效的治療措施是預(yù)防和治療PAH的關(guān)鍵。

目前，PAH治療在用藥方面存在一定的困難，一方面是無特效治療藥物，另一方面是目前絕大部分治療藥物未納入醫(yī)保，這給患者帶來極大的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。丹參是一種中藥制劑，在市場上比較受歡迎，并且在治療肺動脈高壓中有著較好的療效，而丹參酮IIA是其主要有效成分之一，且野百合堿誘導(dǎo)的肺動脈高壓模型簡單、可靠且在經(jīng)濟上適用。因而，本研究擬探究丹參酮IIA治療野百合堿誘導(dǎo)大鼠肺動脈高壓的作用機制。

丹參酮ⅡA是一種含量在丹參中最豐富，效果最佳的水溶性衍生物，廣泛用于心血管疾病的治療。劉禮姣等通過研究發(fā)現(xiàn)丹參酮IIA可通過調(diào)控低氧肺動脈平滑肌細(xì)胞中PI3K/Akt信號通路從而改善PAH中肺血管重構(gòu)，但尚沒有研究證實丹參酮IIA在野百合堿誘導(dǎo)大鼠肺動脈高壓中的作用機制。PI3K/Akt-eNOS信號通路在調(diào)控炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激中起著重要的作用，也參與野百合堿誘導(dǎo)的大鼠PAH的發(fā)生和發(fā)展中，可阻止疾病的進程。有研究報道，PI3K和Akt是涉及細(xì)胞生長、生存的關(guān)鍵蛋白，PI3K/Akt-eNOS通路激活能夠?qū)е翧kt的473位絲氨酸及eNOS的1179位絲氨酸磷酸化，可影響肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖，從而抑制肺血管壁重構(gòu)，舒張血管，促進NO 的合成與分泌，改善右心功能的作用，治療肺動脈高壓。李敏靜等通過研究發(fā)現(xiàn)血府逐瘀湯治療PAH 可能是通過抑制PI3K/AKT/mTOR信號通路活化從而減輕肺血管重構(gòu)有關(guān)。王立鶴等通過研究發(fā)現(xiàn)N-乙酰半胱氨酸可通過激活PI3K-Akt-eNOS-NO通路實現(xiàn)對慢性阻塞性肺疾病肺動脈高壓大鼠的臨床癥狀。

本研究通過測量不同組別大鼠的肺動脈壓力，發(fā)現(xiàn)丹參酮IIA能降低MCT誘導(dǎo)的肺動脈高壓。通過對各組大鼠肺動脈中膜厚度進行研究，發(fā)現(xiàn)丹參酮IIA組肺小動脈中膜厚度較模型組顯著降低，而丹參酮IIA+PI3K抑制劑組和PI3K抑制劑組肺小動脈中膜厚度與模型組無顯著差異，這提示丹參酮IIA可能是通過調(diào)控PI3K信號通路降低MCT誘導(dǎo)大鼠肺動脈中膜厚度。且通過同樣的方法研究丹參酮IIA對MCT誘導(dǎo)大鼠肺小動脈肌化的影響，通過對比各組大鼠完全肌化肺小血管比例，發(fā)現(xiàn)丹參酮IIA對MCT誘導(dǎo)大鼠肺小動脈肌化的影響與丹參酮IIA對MCT誘導(dǎo)大鼠肺動脈中膜厚度影響一致，進一步證實丹參酮IIA可能是通過調(diào)控PI3K信號通路治療肺動脈高壓。

雖然本文只是從黃老師的教學(xué)語言特點來分析，但黃老師的課堂全程滲透著黃老師“本色語文，共生教學(xué)”的教學(xué)理念和“以人為本”的學(xué)生觀，“本色語文”教學(xué)理念最核心的主張就是“把語文課上成語文課，用語文的方法教語文”在此可見一斑。

此外，通過對不同組別的肺動脈高壓大鼠PI3K、Akt、eNOS蛋白表達進行分析，發(fā)現(xiàn)與模型組大鼠相比，丹參酮IIA組大鼠肺組織PI3K、Akt、eNOS蛋白磷酸化程度顯著增加，而丹參酮IIA+PI3K抑制劑組和PI3K抑制劑組與模型組比較無顯著性差異，這提示丹參酮IIA可能是通過激活PI3K/Akt-eNOS 信號通路發(fā)揮治療PAH的作用，且這一作用可被PI3K 抑制劑LY294002所阻斷。

肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞能夠調(diào)節(jié)肺血管收縮與舒張，其結(jié)構(gòu)在缺氧、炎癥等因素的作用下易受損，使NO、前列環(huán)素等合成和分泌失衡，從而導(dǎo)致血管中膜層增厚，非肌型小動脈肌化，最終導(dǎo)致肺血管重構(gòu)。在肺細(xì)小血管的重建中，NO起著重要作用，而在內(nèi)皮細(xì)胞中下調(diào)eNOS表達可減少NO的生成。從本研究結(jié)果對各組大鼠血清中eNOS、NO含量的比較中可以看出，丹參酮IIA可以上調(diào)eNOS、NO的表達，擴張血管，利于肺動脈高壓的治療。

綜上所述，本研究首次證明丹參酮IIA對野百合堿誘導(dǎo)大鼠肺動脈高壓起著良好治療效果的原因主要在于通過介導(dǎo)PI3K/Akt-eNOS信號通路實現(xiàn)的，這為進一步研究肺動脈高壓的發(fā)病機制和治療方法提供了科學(xué)依據(jù)。