徐瑾，周霞，楊玉珍，李世鳳，余靜

信陽市中心醫(yī)院1腫瘤外科，2放射治療科，3腫瘤內(nèi)科，河南 信陽 464000

乳腺癌是一種發(fā)生于乳腺上皮組織且嚴重影響女性身心健康甚至危及生命的惡性腫瘤，其發(fā)病率和病死率在女性惡性腫瘤中均排名靠前[1]。目前乳腺癌常見的治療方案為手術(shù)、放化療、激素治療等[2]。盡管相關(guān)治療方法很多，但侵襲性乳腺癌患者的10年遠處轉(zhuǎn)移率超過50%，臨床治療效果不能令人滿意[3]。研究指出，乳腺癌具有一定的免疫原性，尤其是增殖性乳腺癌的免疫原性較高[4-5]。近年來乳腺癌的免疫治療發(fā)展迅速，通過靶向抑制乳腺癌免疫檢查點，能夠抑制腫瘤細胞發(fā)生免疫逃逸，臨床效果較好[6-7]。研究表明，T細胞中程序性死亡受體配體1（programmed cell death 1 ligand 1，PDCD1LG1，也稱PD-L1）高表達能夠促使T細胞的免疫作用減弱或誘導(dǎo)其凋亡進而引起免疫抑制，使腫瘤細胞發(fā)生免疫逃逸[8-9]。另有研究指出，PD-L1表達情況與乳腺癌的病情進展相關(guān)[10]。盡管有關(guān)PD-L1在乳腺癌中表達情況的研究很多，但是PD-L1表達與患者臨床特征（如分化程度、腫瘤分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等）關(guān)系的研究結(jié)論不一致，PD-L1高表達與乳腺癌不良結(jié)局是否有關(guān)仍存在爭議[11-12]。本研究探討PD-L1在乳腺癌中的表達及與患者臨床特征的關(guān)系，旨在揭示PD-L1表達對乳腺癌發(fā)生發(fā)展的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年7月至2019年7月信陽市中心醫(yī)院收治的乳腺癌患者。納入標準：①年齡≥18歲；②經(jīng)病理檢查確診為乳腺癌，根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（Union for International Cancer Control，UICC）及美國癌癥聯(lián)合會（American Joint Committee on Cancer，AJCC）乳腺癌TNM分期標準[13]，臨床分期為Ⅰ～Ⅲ期；③根據(jù)Bloom-Richardson分級標準[14]，組織學(xué)分級為Ⅰ～Ⅲ級；④術(shù)前無放療或化療史。排除標準：①合并嚴重免疫系統(tǒng)疾?。虎诜窃l(fā)性乳腺癌；③合并其他嚴重器質(zhì)性疾病。依據(jù)納入和排除標準，本研究共納入70例患者，收集70例乳腺癌組織和70例癌旁組織（距乳腺癌病灶3 cm）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組織化學(xué)染色法檢測PD-Ll的表達情況

制作乳腺癌組織和癌旁組織切片，切片厚度為2.5 μm，采用免疫組織化學(xué)染色法進行染色。將組織切片置于3%H2O2中室溫浸泡12 min，采用檸檬酸鈉伴高溫促進抗原修復(fù)，冷卻10 min后清洗，使用封閉液封閉乳腺癌和癌旁組織，采用鼠抗人PD-L1單克隆抗體（1∶100稀釋）4℃孵育過夜。清洗后37℃孵育二抗30 min。然后采用鏈霉親和素-生物素復(fù)合物孵育30 min，二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木素復(fù)染，然后脫水、封閉切片并觀察。

1.3 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定

PD-L1陽性表達主要位于細胞質(zhì)及細胞膜，鏡下呈棕褐色。依據(jù)陽性細胞比例及染色強度進行半定量分析并計分。染色強度評分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞比例評分：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強度評分與陽性細胞比例評分乘積≤1分為陰性，反之為陽性[15]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；采用非條件Logistic回歸模型進行多因素分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織與癌旁組織中PD-L1陽性表達率的比較

乳腺癌組織中PD-L1陽性表達率為25.71%（18/70），明顯高于癌旁組織的8.57%（6/70），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=7.241，P=0.007）。

2.2 不同臨床特征乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1表達情況的比較

不同年齡、手術(shù)方式、乳腺癌家族史、絕經(jīng)情況乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。組織學(xué)分級為Ⅲ級、TNM分期為Ⅲ期、腫瘤直徑＞2 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽性表達率分別高于組織學(xué)分級為Ⅰ～Ⅱ級、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤直徑≤2 cm、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1表達情況的比較

2.3 乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1表達情況影響因素的多因素分析

多因素分析結(jié)果顯示，組織學(xué)分級為Ⅲ級、TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均是乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽性表達的獨立危險因素（P＜0.05）。（表2）

表2 乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1表達情況影響因素的多因素分析

3 討論

乳腺癌是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，其病死率也較高。乳腺癌的發(fā)病與遺傳因素密切相關(guān)[16-17]。乳腺癌的發(fā)病年齡主要集中于40～60歲，絕經(jīng)期前后女性乳腺癌的發(fā)病率較高[18-19]。乳腺癌早期通常無明顯臨床表現(xiàn)，發(fā)展至中晚期常出現(xiàn)乳房持續(xù)性疼痛和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，對患者的生活質(zhì)量和心理健康造成不良影響，而化療對乳腺癌轉(zhuǎn)移的控制效果欠佳，因此深入研究乳腺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)機制對控制乳腺癌進展及開發(fā)高效新療法至關(guān)重要[20]。研究指出乳腺癌具有免疫原性，T細胞中PD-L1通過抑制T細胞發(fā)揮免疫作用或誘導(dǎo)T細胞凋亡，從而引起免疫抑制，腫瘤細胞由于發(fā)生免疫逃逸可迅速增殖并發(fā)生轉(zhuǎn)移，加速病情進展[21]。PD-L1來自CD28家族，通過在T細胞、自然殺傷（natural killer，NK）細胞表面表達，調(diào)節(jié)其生長和凋亡[22]。PD-L1高表達可能與乳腺癌轉(zhuǎn)移和進展有關(guān)，現(xiàn)階段PD-L1抑制劑已用于乳腺癌患者的臨床治療中。

本研究結(jié)果顯示，PD-L1在乳腺癌患者乳腺癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁組織（P＜0.01）。正常細胞生長和凋亡處于動態(tài)平衡，達到一定的分裂次數(shù)就會出現(xiàn)衰老和凋亡，但腫瘤細胞卻可以無限制地復(fù)制、增殖、分化而不凋亡，主要原因是發(fā)生了免疫逃逸，即免疫反應(yīng)被削弱，使免疫系統(tǒng)不能及時發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞的異常增殖和分化，從而使腫瘤細胞迅速增殖和轉(zhuǎn)移。PD-L1過表達能夠促進免疫細胞凋亡，抑制免疫系統(tǒng)對腫瘤細胞的監(jiān)視作用，促進腫瘤細胞增殖和分化，因此乳腺癌組織中PD-L1陽性表達率明顯高于癌旁組織。

本研究結(jié)果顯示，組織學(xué)分級為Ⅲ級、TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽性表達率分別高于組織學(xué)分級為Ⅰ～Ⅱ級、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。可能是因為PD-L1過表達使腫瘤細胞失去了免疫系統(tǒng)的調(diào)控，從而導(dǎo)致腫瘤細胞迅速增殖和分化，進而促進腫瘤進展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本研究中腫瘤直徑＞2 cm乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽性表達率高于腫瘤直徑≤2 cm的患者，與王立東等[23]的研究結(jié)果一致。本研究結(jié)果還顯示，乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽性表達率與乳腺癌家族史無關(guān)，與既往研究顯示乳腺癌具有遺傳易感性的結(jié)論不一致，可能是因為本研究中具有乳腺癌家族史的患者比例較少[24]。多因素分析結(jié)果顯示，組織學(xué)分級為Ⅲ級、TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均是乳腺癌患者乳腺癌組織中PD-L1陽性表達的獨立危險因素（P＜0.05），與邱志敏[15]的研究結(jié)果相似，說明PD-L1表達情況與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

綜上所述，PD-L1在乳腺癌組織中高表達，且與乳腺癌患者的臨床特征密切相關(guān)。