孫雪瑩，田海霞，郭明杰

(1.上海螢火蟲(chóng)農(nóng)業(yè)科技中心，上海 201799；2.興農(nóng)藥業(yè)(中國(guó))有限公司，上海 201416)

氟啶蟲(chóng)酰胺(flonicamid)是一種高選擇性殺蟲(chóng)劑，主要用于防治刺吸式口器害蟲(chóng)，原理是通過(guò)抑制昆蟲(chóng)內(nèi)向整流鉀離子(Kir)通道，干擾昆蟲(chóng)細(xì)胞的離子穩(wěn)態(tài)與平衡電位，破壞馬氏管與唾液腺的正常分泌功能，從而影響昆蟲(chóng)的取食與排泄過(guò)程,最終導(dǎo)致害蟲(chóng)死亡[1]。噻蟲(chóng)啉(thiacloprid)是一種新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑，主要用于防治刺吸式口器和部分咀嚼式口器害蟲(chóng)，具有高效、廣譜、低毒和高選擇性等優(yōu)點(diǎn)[2]，對(duì)刺吸式口器害蟲(chóng)、鞘翅目等害蟲(chóng)具有十分突出的防治效果，成為當(dāng)今使用最為廣泛的殺蟲(chóng)劑之一。噻蟲(chóng)啉作為新煙堿類(lèi)殺蟲(chóng)劑中對(duì)蜜蜂較安全的藥劑成為吡蟲(chóng)啉、噻蟲(chóng)嗪、噻蟲(chóng)胺等的替代品，近幾年在我國(guó)大量生產(chǎn)并推廣使用[3]。將氟啶蟲(chóng)酰胺和噻蟲(chóng)啉復(fù)配，可有效防治蚜蟲(chóng)、粉虱、各種甲蟲(chóng)(如馬鈴薯甲蟲(chóng)、蘋(píng)果象甲、稻象甲)和鱗翅目害蟲(chóng)(如蘋(píng)果樹(shù)上潛葉蛾和蘋(píng)果蠹蛾)等，應(yīng)用前景廣闊。而關(guān)于氟啶蟲(chóng)酰胺和噻蟲(chóng)啉的檢測(cè)方法報(bào)道主要是氣相色譜法和液相色譜法[4-11]，本文采用反相高效液相色譜法，在同一色譜條件下對(duì)36%氟啶·噻蟲(chóng)啉懸浮劑有效成分進(jìn)行定量分析。該方法操作簡(jiǎn)便、快速，準(zhǔn)確度和精密度良好，適用于產(chǎn)品質(zhì)量的檢測(cè)分析。

1 試驗(yàn)方法

1.1 儀器與試劑

Agilent1260型高效液相色譜儀配有可變波長(zhǎng)檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器和Agilent色譜工作站。

水為新蒸二次蒸餾水；甲醇為色譜純；氟啶蟲(chóng)酰胺標(biāo)樣：純度≥98.0%；噻蟲(chóng)啉標(biāo)樣：純度≥98.0%；36%氟啶·噻蟲(chóng)啉懸浮劑(標(biāo)樣和樣品均由興農(nóng)藥業(yè)(中國(guó))有限公司提供)。

1.2 色譜條件

色譜柱：采用Zorbax Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm i.d.，5μm)；檢測(cè)波長(zhǎng)：260 nm；流動(dòng)相：甲醇∶水=45∶55(體積比)；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：5 μL；柱溫：30 ℃。在上述色譜條件下，噻蟲(chóng)啉和氟啶蟲(chóng)酰胺的保留時(shí)間分別約為3.7 min和7.2 min(圖1～2)。

圖1 噻蟲(chóng)啉+氟啶蟲(chóng)酰胺標(biāo)樣液相色譜 圖2 36%氟啶·噻蟲(chóng)啉懸浮劑試樣液相色譜

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱(chēng)取氟啶蟲(chóng)酰胺標(biāo)樣約0.05 g、噻蟲(chóng)啉標(biāo)樣約0.10 g(精確至0.000 1 g)置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，于超聲波中振蕩至完全溶解，取出，恢復(fù)至室溫后用甲醇定容至刻線搖勻，備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱(chēng)取36%氟啶·噻蟲(chóng)啉懸浮劑試樣0.41 g(精確至0.000 1 g)，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，于超聲波中振蕩至完全溶解，取出，恢復(fù)至室溫后用甲醇定容至刻線搖勻，用0.22 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后備用。

1.4 測(cè)定

在上述液相色譜操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相對(duì)響應(yīng)值的重復(fù)性，待相鄰兩針的相對(duì)響應(yīng)值變化小于1.0%，按下列順序進(jìn)樣分析：標(biāo)樣溶液，試樣溶液，試樣溶液，標(biāo)樣溶液。用外標(biāo)法計(jì)算各自含量。

1.5 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的氟啶蟲(chóng)酰胺(或噻蟲(chóng)啉)峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中氟啶蟲(chóng)酰胺(或噻蟲(chóng)啉)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω(%)按照公式(1)計(jì)算：

(1)

式中：A1為標(biāo)樣溶液中氟啶蟲(chóng)酰胺(或噻蟲(chóng)啉)峰面積的平均值；A2為試樣溶液中氟啶蟲(chóng)酰胺(或噻蟲(chóng)啉)峰面積的平均值；m1為標(biāo)樣質(zhì)量(g)；m2為試樣質(zhì)量(g)；P為標(biāo)樣中氟啶蟲(chóng)酰胺(或噻蟲(chóng)啉)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%(m/m)。

2 實(shí)驗(yàn)過(guò)程及步驟

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 流動(dòng)相的選擇

流動(dòng)相的選擇是決定液相色譜分離效果的關(guān)鍵所在。通過(guò)試用不同比例的甲醇、水，甲醇、水作為流動(dòng)相對(duì)試樣進(jìn)行分離檢測(cè)。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，采用甲醇、水作為流動(dòng)相分離效果好，出峰時(shí)間短，且峰型尖銳，最終選定流動(dòng)相的比例為甲醇∶水=45∶55(體積比)。

2.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

通過(guò)對(duì)氟啶蟲(chóng)酰胺和噻蟲(chóng)啉進(jìn)行紫外掃描，得到其相應(yīng)的吸收波長(zhǎng)與響應(yīng)值的紫外吸收光譜圖。當(dāng)選用260 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，氟啶蟲(chóng)酰胺和噻蟲(chóng)啉均有較強(qiáng)吸收峰，同時(shí)雜質(zhì)響應(yīng)值小，流動(dòng)相無(wú)吸收。因此，為兼顧兩者均有較好的吸收，將檢測(cè)波長(zhǎng)選為260 nm。

2.2 特異性的測(cè)定

本試驗(yàn)方法采用HPLC-DAD峰純度分析法來(lái)鑒別。氟啶蟲(chóng)酰胺HPLC-DAD中的最小峰純度相似度均為0.999 846，最小峰純度閾值為0.999 964，最小峰純度指數(shù)為正值，說(shuō)明樣品色譜峰中不含有雜質(zhì)峰；噻蟲(chóng)啉HPLC-DAD中的最小峰純度相似度為0.999 999，最小峰純度閾值為0.999 999，最小峰純度指數(shù)為正值，說(shuō)明樣品色譜峰中不含有雜質(zhì)峰。標(biāo)樣液相色譜峰與試樣液相色譜峰出峰時(shí)間差在1.0%以內(nèi)，如圖1～2所示。制劑中峰純度色譜圖如圖3～4所示。

圖3 制劑中氟啶蟲(chóng)酰胺HPLC-DAD峰純度色譜

圖4 制劑中噻蟲(chóng)啉HPLC-DAD峰純度色譜

2.3 線性相關(guān)性測(cè)定

在一定質(zhì)量范圍內(nèi)，按照濃度遞增的順序配制數(shù)個(gè)標(biāo)樣，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的操作步驟進(jìn)行分析，測(cè)定氟啶蟲(chóng)酰胺/噻蟲(chóng)啉的峰面積，取兩次測(cè)定的平均結(jié)果。以氟啶蟲(chóng)酰胺/噻蟲(chóng)啉標(biāo)樣溶液之濃度(mg·L-1)為橫坐標(biāo)，峰面積(mAU)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而得到氟啶蟲(chóng)酰胺和噻蟲(chóng)啉的線性相關(guān)性曲線。氟啶蟲(chóng)酰胺線性方程是：y=4.6863x-24.303(圖5)，相關(guān)系數(shù)為1.000 0；噻蟲(chóng)啉的線性方程是：y=13.031x-8.51(圖6)，相關(guān)系數(shù)為1.000 0。

圖5 氟啶蟲(chóng)酰胺線性關(guān)系

圖6 噻蟲(chóng)啉線性關(guān)系

2.4 分析方法的精密度測(cè)定

在上述色譜操作條件下，對(duì)同一36%氟啶·噻蟲(chóng)啉懸浮劑樣品平行測(cè)定5次，氟啶蟲(chóng)酰胺和噻蟲(chóng)啉的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.001 4和0.002 2，變異系數(shù)分別為1.16%和1.66%，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 36%氟啶·噻蟲(chóng)啉懸浮劑分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.5 分析方法的準(zhǔn)確度測(cè)定

制劑空白：按配方比例要求，除氟啶蟲(chóng)酰胺原藥、噻蟲(chóng)啉原藥外將所有助劑混合均勻。在制劑空白樣品中分別加入不同質(zhì)量已知含量的氟啶蟲(chóng)酰胺標(biāo)樣、噻蟲(chóng)啉標(biāo)樣至4個(gè)于100 mL容量瓶中，加入60 mL甲醇，置于超聲波中超聲振蕩至完全溶解，取出，恢復(fù)至室溫后用甲醇定容至刻線，搖勻，用0.22 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后備用。

按照上述色譜條件測(cè)定樣品的氟啶蟲(chóng)酰胺和噻蟲(chóng)啉總濃度，并計(jì)算其平均回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。氟啶蟲(chóng)酰胺和噻蟲(chóng)啉的平均回收率分別為99.88%和99.91%。

表2 36%氟啶·噻蟲(chóng)啉懸浮劑分析方法的回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.6 非分析物干擾的試驗(yàn)

在評(píng)價(jià)準(zhǔn)確度時(shí)，通常需要包含非分析物質(zhì)的干擾，因?yàn)橛行С煞种械娜魏胃蓴_物都會(huì)導(dǎo)致分析方法出現(xiàn)系統(tǒng)誤差。而且，在分析時(shí)應(yīng)同時(shí)測(cè)定不帶有效成分的空白樣品，或證明其無(wú)干擾。

通過(guò)對(duì)空白樣品(不含有效成分的助劑)、原藥等按分析方法1.2進(jìn)行分析，如圖7～9所示，各助劑與原藥無(wú)相互干擾，對(duì)分析無(wú)干擾，均不影響相互定性定量分析，因此本文的分析方法未受到非分析物干擾。

圖7 空白樣品液相色譜 圖8 氟啶蟲(chóng)酰胺原藥液相色譜

圖9 噻蟲(chóng)啉原藥液相色譜

3 結(jié) 論

本文建立了36%氟啶·噻蟲(chóng)啉懸浮劑中有效成分的分析方法，此方法具有高精密度和高準(zhǔn)確度的特點(diǎn)，其線性關(guān)系良好，試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便，是進(jìn)行在線產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)較理想的分析方法。