郭春香，孫淑華

[鄂爾多斯市中心醫(yī)院（康巴什部）婦產(chǎn)科，內(nèi)蒙古 鄂爾多斯 017010]

人乳頭瘤病毒（HPV）感染是導(dǎo)致宮頸癌病變的主要原因，其存在多種亞型，根據(jù)其致病程度可分為低危型和高危型。而引發(fā)宮頸病變的主要是高危型HPV，其通過與宿主正常宮頸細(xì)胞DNA整合，調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄，繼而導(dǎo)致宮頸細(xì)胞發(fā)生惡性增殖，在宮頸病變及其進(jìn)展中發(fā)揮重要的作用[1]。HPV感染會影響機(jī)體免疫功能，其中高危型HPV感染與輔助性T細(xì)胞17（Th17） / 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）所介導(dǎo)的免疫應(yīng)答紊亂密切相關(guān)，在宮頸癌疾病的進(jìn)展中發(fā)揮了關(guān)鍵作用；Th17細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素-23（IL-23）能夠激活炎性通路，促使機(jī)體產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，并促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，使宮頸癌進(jìn)一步發(fā)展、惡化[2]。IL-2是主要由1型輔助性T細(xì)胞（Th1）細(xì)胞分泌的可調(diào)節(jié)免疫功能的細(xì)胞因子，其水平越低，提示患者機(jī)體免疫功能下降，可降低HPV感染宮頸病變患者抗病毒能力和抵抗力，宮頸病變隨之惡化；IL-10是由2型輔助性T細(xì)胞（Th2）細(xì)胞分泌的能夠抑制抗腫瘤免疫應(yīng)答的細(xì)胞因子，可增加癌細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸的風(fēng)險，同時可抑制Th1細(xì)胞分泌IL-2，進(jìn)一步抑制機(jī)體免疫功能。研究顯示，HPV感染患者機(jī)體Th1/Th2失衡，Th2細(xì)胞功能增強(qiáng)，而Th1細(xì)胞功能低下，參與機(jī)體宮頸炎性病變與宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展[3-4]。本研究旨在分析HPV感染宮頸病變患者細(xì)胞因子水平的變化及其臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2018年1月至2021年11月鄂爾多斯市中心醫(yī)院（康巴什部）收治的150例HPV感染宮頸病變患者的臨床資料，根據(jù)病變類型分為慢性宮頸炎（chroniccervicitis, CCS）組（26例）、宮頸癌（cervical cancer, CC）組（46例）、宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasias, CIN）組（78例）。CCS組患者年齡23～63歲，平均（42.99±8.94）歲；飲酒史5例，吸煙史11例，糖尿病史7例，高血壓史10例。CC組患者年齡23～63歲，平均（42.98±8.86）歲；飲酒史11例，吸煙史14例，糖尿病史13例，高血壓史16例。CIN組患者年齡22～63歲，平均（42.98±8.24）歲；飲酒史19例，吸煙史24例，糖尿病史20例，高血壓史21例。CCS組、CC組、CIN組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），組間可比。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《婦產(chǎn)科學(xué)（第3版）》[5]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)者；無子宮切除手術(shù)史者；近3個月內(nèi)未進(jìn)行過相關(guān)治療者；未合并其他婦科疾病等。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠期女性；伴有自身免疫性、血液系統(tǒng)疾病者；伴有肝、胃等惡性腫瘤疾病者等。本研究經(jīng)院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 分組方法 根據(jù)《婦產(chǎn)科學(xué)（第3版）》[5]中的CIN分級標(biāo)準(zhǔn)將CIN組患者分為CIN Ⅰ組（25例，細(xì)胞異型性輕，排列不整齊，但仍保持極性，異型細(xì)胞局限于上皮層下1/3），CIN Ⅱ組（27例，細(xì)胞異型性明顯，排列較紊亂，異型細(xì)胞占據(jù)上皮層下1/3至2/3），CIN Ⅲ組（26例，重度不典型增生異型細(xì)胞超過全層的2/3，難以與原位癌區(qū)別）。根據(jù)臨床特征對CC組患者進(jìn)行分組，通過CT腹部檢查觀察是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；通過宮頸活檢病理檢測觀察是否發(fā)生脈管浸潤，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例；脈管浸潤情況：有脈管浸潤24例，無脈管浸潤22例。

1.3 檢測方法 患者入院后，采取空腹靜脈血4 mL，取2 mL采用流式細(xì)胞儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，型號：BriCyte E6）檢測外周血Th17細(xì)胞水平，取剩余2 mL空腹靜脈血，離心（3 000 r/min，10 min）分離血清，采用全自動生化分析儀（江蘇英諾華醫(yī)療技術(shù)有限公司，型號：DF-403）檢測血清 IL-2、IL-10、IL-23 水平。

1.4 觀察指標(biāo) ①比較CCS組、CC組、CIN組患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-2、IL-10、IL-23水平。②比較CIN組不同分級患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-2、IL-10、IL-23水平。③比較CC組患者不同臨床特征（有/無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有/無脈管浸潤）患者外周血Th17細(xì)胞表達(dá)及血清 IL-2、IL-10、IL-23 水平。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 使用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以(±s)表示，兩組間比較行t檢驗，多組間比較采用重復(fù)測量方差分析。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CCS組、CC組、CIN組患者外周血Th17細(xì)胞及血清 IL-2、IL-10、IL-23水平 CCS組、CIN 組、CC 組患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-10、IL-23水平均逐漸升高，血清IL-2水平均逐漸降低，CC組患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-10、IL-23水平高于CCS組、CIN組，且CIN組高于CCS組；CC組患者血清IL-2水平低于CCS組、CIN組，且CIN組低于CCS組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表 1。

表1 CCS組、CC組、CIN組患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-2、IL-10、IL-23水平比較( ?±s)

表1 CCS組、CC組、CIN組患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-2、IL-10、IL-23水平比較( ?±s)

注：與CCS組比，*P＜0.05；與CIN組比，#P＜0.05。Th17：輔助性T細(xì)胞17；IL-2：白細(xì)胞介素-2；IL-10：白細(xì)胞介素-10；IL-23：白細(xì)胞介素-23。CCS：慢性宮頸炎；CIN：宮頸上皮內(nèi)瘤變；CC：宮頸癌。

組別 例數(shù) Th17細(xì)胞(%) IL-2(pg/mL) IL-10(pg/mL) IL-23(pg/mL)CCS 組 26 0.87±0.14 53.54±5.34 22.53±5.34 23.15±6.56 CIN 組 78 2.12±0.65* 38.56±1.87* 75.32±10.21* 65.56±8.43*CC 組 46 3.23±0.86*# 18.53±0.34*# 145.25±9.53*# 101.23±16.32*#F值 105.315 1 667.751 1 574.282 409.914 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.2 CIN組不同分級患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-2、IL-10、IL-23 水平 CIN Ⅰ組、CIN Ⅱ組、CIN Ⅲ組患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-10、IL-23水平均逐漸升高，血清IL-2水平均逐漸降低；CIN Ⅲ組患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-10、IL-23水平高于CIN Ⅰ組、CIN Ⅱ組，且CIN Ⅱ組高于CIN Ⅰ組；CIN Ⅲ組血清IL-2水平低于CINⅠ組、CIN Ⅱ組，且CIN Ⅱ組低于CIN Ⅰ組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表2。

表2 CIN組不同分級患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-2、IL-10、IL-23水平比較( ?±s)

表2 CIN組不同分級患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-2、IL-10、IL-23水平比較( ?±s)

注：與 CIN Ⅰ組比，△P＜0.05；與 CIN Ⅱ組比，▲P＜0.05。

組別 例數(shù) Th17細(xì)胞(%) IL-2(pg/mL) IL-10(pg/mL) IL-23(pg/mL)CIN Ⅰ組 25 0.34±0.09 47.35±2.56 23.53±5.43 22.46±5.78 CIN Ⅱ組 27 3.43±1.21△ 37.37±1.86△ 80.54±11.27△ 73.42±12.53△CIN Ⅲ組 26 4.34±1.41△▲ 34.53±0.56△▲ 115.32±12.42△▲ 94.01±15.43△▲F值 95.244 338.740 520.688 238.618 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 不同臨床特征CC組患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-2、IL-10、IL-23水平 與無脈管浸潤、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移CC患者比，有脈管浸潤、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移CC患者外周血Th17細(xì)胞水平及血清IL-10、IL-23水平均升高，血清IL-2水平均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表3。

表3 不同臨床特征CC組患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-2、IL-10、IL-23水平比較( ?±s)

表3 不同臨床特征CC組患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-2、IL-10、IL-23水平比較( ?±s)

臨床特征 例數(shù) Th17細(xì)胞(%) IL-2(pg/mL) IL-10(pg/mL) IL-23(pg/mL)脈管浸潤 有 24 3.42±0.34 17.56±0.32 183.76±8.65 128.76±14.54無22 1.12±0.17 34.54±3.65 109.65±9.11 77.43±7.43 t值 28.603 22.718 28.299 14.865 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有 27 3.51±1.02 17.76±0.45 177.98±8.69 132.54±14.96無19 0.98±0.32 33.54±2.87 111.87±8.65 72.43±6.89 t值 11.134 28.211 25.831 17.233 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 7.351

3 討論

當(dāng)機(jī)體發(fā)生高危型HPV感染后，其首先以游離態(tài)潛伏于宮頸的基底細(xì)胞層，并于細(xì)胞層內(nèi)大量增殖，HPV DNA基因組序列可整合宿主細(xì)胞基因組，增加基因組的不穩(wěn)定性，從而增加宮頸細(xì)胞鱗狀上皮增生的風(fēng)險；且在高危型HPV持續(xù)性感染過程中，宮頸細(xì)胞組織受到HPV抗原刺激，啟動包括適應(yīng)性免疫、固有免疫等局部黏膜免疫反應(yīng)，造成免疫抑制微環(huán)境，表現(xiàn)為Th17/Treg與Th1/Th2失衡，促進(jìn)CIN、CC的發(fā)生。

張慧莉等[6]研究顯示，高危型HPV患者存在明顯的Th17/Treg細(xì)胞比例失衡，Th17細(xì)胞大量分泌白細(xì)胞介素-17（IL-17）和IL-23等因子，干擾抗原提呈細(xì)胞將HPV抗原提呈給相關(guān)的T淋巴細(xì)胞，從而促成HPV逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)的攻擊，導(dǎo)致宮頸病變逐步進(jìn)展。本研究結(jié)果中，CCS組、CIN組、CC組患者外周血Th17細(xì)胞及血清IL-23水平均逐漸升高，提示Th17/Treg細(xì)胞失衡與宮頸病變過程相關(guān)，參與了CC的發(fā)生與發(fā)展。CIN及宮頸癌的發(fā)病機(jī)制通常受到機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響，能夠表現(xiàn)出免疫耐受情況，在HPV感染患者抗腫瘤免疫中以Th1細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)為主，典型細(xì)胞因子為IL-2，其可活化T細(xì)胞并誘導(dǎo)促進(jìn)NK細(xì)胞增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤活性；但大多數(shù)腫瘤患者機(jī)體相關(guān)免疫因子會發(fā)生漂移，偏向Th2型細(xì)胞因子，以IL-10為代表，其可抑制巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞活性，通過多途徑抑制抗腫瘤免疫應(yīng)答，表現(xiàn)為免疫抑制，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能低下，這也是HPV感染宮頸病變患者發(fā)生免疫逃逸的主要機(jī)制，促進(jìn)患者病情進(jìn)展，逐步發(fā)展為CC[7]。本研究結(jié)果顯示，CCS組、CIN組、CC組患者血清IL-10水平均逐漸升高，IL-2水平均逐漸降低，提示HPV感染的宮頸病變患者發(fā)生了Th1/Th2漂移，且隨著病變程度的加重，漂移越來越明顯，不利于HPV的清除。

CIN為CC的癌前病變，其存在3個階段：自然逆轉(zhuǎn)、持續(xù)不變、進(jìn)展為宮頸癌；機(jī)體免疫失衡后會導(dǎo)致患者出現(xiàn)自身免疫性疾病與腫瘤的發(fā)生，且隨著CIN分級的增加，患者的癌變風(fēng)險逐步增加[8]。本研究結(jié)果中，CIN Ⅰ組、CIN Ⅱ組、CIN Ⅲ組患者外周血Th17細(xì)胞水平及血清IL-10、IL-23水平均逐漸升高，血清IL-2水平均逐漸降低，提示CIN患者呈現(xiàn)出明顯的Th2、Th17細(xì)胞因子高分泌現(xiàn)象，機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)，且隨著病情加重，上述現(xiàn)象越明顯，最終導(dǎo)致CC的發(fā)生。受HPV感染的影響，患者機(jī)體Th17細(xì)胞活性增強(qiáng)，促使機(jī)體血管表皮生長因子的分泌，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤微血管生成，從而促進(jìn)CC疾病進(jìn)展，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；同時其分泌的IL-23對Th17細(xì)胞的存活和增殖有重要意義，可間接促進(jìn)CC的轉(zhuǎn)移與浸潤[9]；此外，CC患者中T細(xì)胞中出現(xiàn)Th1/Th2漂移，且明顯向Th2偏離時，則會引發(fā)NK細(xì)胞中抑制性受體和殺傷性受體發(fā)生明顯失衡，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤進(jìn)一步發(fā)展和轉(zhuǎn)移，促進(jìn)CC進(jìn)展[10]。本研究中，與無脈管浸潤、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移CC患者比，有脈管浸潤、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移CC患者外周血Th17細(xì)胞水平及血清IL-10、IL-23水平均升高，血清IL-2水平均降低，提示高危型HPV感染可影響機(jī)體免疫應(yīng)答，且隨著CIN向?qū)m頸癌方向進(jìn)展，Thl7/Treg與Th1/Th2平衡開始偏離，繼而導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)展與進(jìn)一步惡化。

綜上，隨著HPV感染宮頸病變患者病情進(jìn)展，外周血Th17細(xì)胞及血清IL-10、IL-23水平逐漸升高，血清IL-2水平逐漸降低，檢測其水平有助于臨床HPV感染宮頸病變患者的病情評估。因此臨床需針對HPV感染宮頸病變患者嚴(yán)密監(jiān)測Th1/Th2以及Th17/Treg相關(guān)細(xì)胞因子分布情況，評估患者病情，并予以及時治療恢復(fù)患者免疫平衡，有效抑制CIN及CC的發(fā)生，改善HPV感染宮頸病變患者的預(yù)后。