肝細(xì)胞癌(HCC)是肝臟常見(jiàn)惡性腫瘤，多數(shù)HCC發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)到晚期，預(yù)后不良。研究發(fā)現(xiàn)

，轉(zhuǎn)錄基因的異常表達(dá)可能發(fā)揮重要的作用。microRNAs(miRs)是長(zhǎng)度22 nt的內(nèi)源性非編碼RNA，與靶基因相互作用后調(diào)控轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)

。有報(bào)道稱，miR-106b作為促癌基因，可促進(jìn)食管癌細(xì)胞的增殖、侵襲，抑制凋亡

。另外研究發(fā)現(xiàn)，miR-106b在乳腺癌組織中高表達(dá)，與臨床病理參數(shù)相關(guān)

。miR-30a屬于miR-30家族，與乳腺癌、肝癌及肺癌的惡性生物學(xué)行為有關(guān)

。但miR-106b、miR-30a是否與HCC患者預(yù)后有關(guān)的文獻(xiàn)較少。本研究觀察HCC患者外周血清中miR-106b、miR-30a表達(dá)情況，及其與臨床特征、預(yù)后的關(guān)系，以期為HCC患者預(yù)后評(píng)估提供新指標(biāo)。

問(wèn)卷回收經(jīng)篩查后，采用Epidata 3.1軟件錄入數(shù)據(jù)，導(dǎo)入SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。描述性統(tǒng)計(jì)分析采用頻數(shù)、百分比；知識(shí)部分答案有“是”“否”“不清楚”3個(gè)選項(xiàng)，回答正確得1分，錯(cuò)誤或不清楚得0分；態(tài)度和行為部分答案采用5分制的Likert量表評(píng)定；考慮知識(shí)分?jǐn)?shù)呈偏態(tài)分布，采用秩和檢驗(yàn)分析不同人口學(xué)特征下受訪者知識(shí)部分得分情況是否有顯著差異；采用Pearson相關(guān)法分析全科醫(yī)生抗生素相關(guān)知識(shí)、態(tài)度和行為之間的關(guān)系。顯著性水平α值設(shè)定為0.05。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究上報(bào)南充市中心醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。選取2013年6月至2017年2月南充市中心醫(yī)院收治的接受手術(shù)治療的HCC患者160例為研究對(duì)象。其中男117例，女43例；年齡為41～71歲，平均(55.79±11.16)歲；(Ⅰ+Ⅱ)期105例，(Ⅲ+Ⅳ)期55例；高分化31例，中分化33例，低分化為96例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有95例，無(wú)65例；肝內(nèi)轉(zhuǎn)移：有89例，無(wú)71例；腫瘤直徑：≥5 cm 86例，<5 cm 74例；肝硬化：有121例，無(wú)39例；Child-Pugh分級(jí)：A級(jí)106例，B級(jí)40例，C級(jí)14例；腫瘤數(shù)目：≥3個(gè)123例，<3個(gè)37例。40例同期體檢的正常人群作為對(duì)照組，其中男25例，女性15例，年齡36～71歲，平均(55.13±13.09)歲。兩組人群性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理明確診斷HCC；②符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》診斷標(biāo)準(zhǔn)；③排除肝臟其他疾病；④未接受手術(shù)、放化療、靶向藥物治療等抗腫瘤相關(guān)治療；⑤臨床病理資料完整；⑥預(yù)測(cè)生存時(shí)間>6個(gè)月；⑦簽訂知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他部位腫瘤；②合并其他肝臟其他腫瘤；③精神疾病患者。

中高職銜接“3+3”分段培養(yǎng)要取得較好的成效，政府、中職、高職、企業(yè)等合作多方必須對(duì)學(xué)生的培養(yǎng)全過(guò)程進(jìn)行有力監(jiān)控，只有這樣才能保障專業(yè)人才培養(yǎng)的質(zhì)量。但現(xiàn)實(shí)是中高職在分段培養(yǎng)過(guò)程中各自為營(yíng)、互不干涉，中高職之間沒(méi)有相互監(jiān)控的舉措，中高職雙方?jīng)]有制定合理的政策制度評(píng)價(jià)和調(diào)控對(duì)方的人才培養(yǎng)過(guò)程，無(wú)法保障對(duì)方人才培養(yǎng)的質(zhì)量，將導(dǎo)致專業(yè)人才培養(yǎng)水平大打折扣。

2.4 HCC患者3年總生存率影響因素分析 以Child-Pugh分級(jí)、肝硬化、腫瘤直徑、組織分化類型、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AFP水平、門靜脈癌栓、腫瘤數(shù)目、TNM分期、miR-30a及miR-106b表達(dá)水平為自變量，以患者3年總生存率為因變量，結(jié)果表明，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期(Ⅲ+Ⅳ)與miR-106b高表達(dá)水平是HCC患者隨訪3年期間預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素，而miR-30a高表達(dá)是保護(hù)性因素。見(jiàn)表3。

在評(píng)估刑事立法政策時(shí)，也應(yīng)當(dāng)按照刑事立法價(jià)值的三個(gè)層次的梯級(jí)結(jié)構(gòu)逐步逐層進(jìn)行。首先必須具有現(xiàn)實(shí)指導(dǎo)性和可行性，其次要有利于維持社會(huì)秩序，維護(hù)社會(huì)穩(wěn)定。而最終要評(píng)價(jià)這一政策是否更多地從社會(huì)個(gè)體的角度去考慮政策施行的目的性和有效性，有利于維護(hù)社會(huì)和諧。如果特定的刑事立法政策有助于社會(huì)秩序的維護(hù)和公民權(quán)利的保障，使人們?cè)谌粘Ｉ钪芯哂邪踩?，?duì)自己及家人的人身及財(cái)產(chǎn)方面沒(méi)有擔(dān)憂，能夠正常地開(kāi)展日常生活和工作，社會(huì)管理井然有序地進(jìn)行，那么這樣的刑事立法政策就是一個(gè)“良策”，反之，則為“惡策”。

1.4 血清miR-30a、miR-106b檢測(cè) 兩組人群清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集外周血5 ml于抗凝管中，3 000 r/min離心20 min，取上層血清，-80℃保存。按miRNeasy Mini Kit提取分離試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行miRNA提取，分光光度計(jì)檢測(cè)其濃度及純度。按照cDNA合成試劑盒說(shuō)明書(shū)合成cDNA，反應(yīng)體系10 μl：總RNA 7 μl，5×Prime Script Buffer 2 μl，Prime Script Enzyme Mix I 0.5 μl，RT Primer 0.5 μl，-20℃保存?zhèn)溆谩Ｒ訳6作為內(nèi)參，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系總體積20 μl：cDNA 4 μl，SYBR Premix Ex Taq Ⅱ 10 μl，PCR Forward Primer(10 μmol/L)0.8 μl，PCR Reverse Primer 0.8 μl(10 μmol/L)，Rnase-Free Water 4.4 μl，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 min，95℃ 15 s，60℃ 60 s，共40個(gè)循環(huán)。結(jié)果使用2

表示。引物序列見(jiàn)表1。根據(jù)miR-30a、miR-106b表達(dá)水平中位數(shù)，將HCC患者分為miR-30a低表達(dá)組、miR-30a高表達(dá)組，miR-106b低表達(dá)組、miR-106b高表達(dá)組。

1.5 隨訪 以患者出院日期作為隨訪起點(diǎn)，截止2020年10月1日，隨訪中位時(shí)間45.2(36.5～63.7)個(gè)月。失訪2例，失訪率2.5%。隨訪方式選擇電話、門診復(fù)查等。使用3年總生存率(OS)對(duì)患者進(jìn)行預(yù)后生存評(píng)價(jià)，OS是指從組織病理學(xué)確診日期至最后一次隨訪或死亡日期。

2.1 兩組人群血清miR-30a、miR-106b表達(dá)情況 HCC患者血清miR-30a表達(dá)水平(1.02±0.02)低于正常人群(5.18±0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

=33.64，

<0.01)；HCC患者血清miR-106b表達(dá)水平(2.65±0.35)高于正常人群(1.15±0.06)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

=5.41，

<0.01)。

2 結(jié)果

2.3 不同血清miR-30a、miR-106b表達(dá)水平HCC患者的生存分析 miR-30a低表達(dá)組患者3年總生存率(39.8%)低于miR-30a高表達(dá)組(64.6%)(

=0.002)；miR-106b低表達(dá)組患者3年總生存率(75.8%)高于miR-106b高表達(dá)組(51.2%)(

=0.003)。見(jiàn)圖1。

2.2 HCC患者血清miR-30a、miR-106b表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 HCC患者血清中miR-30a、miR-106b表達(dá)與患者腫瘤直徑、組織分化類型、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AFP水平、門靜脈癌栓、腫瘤數(shù)目及TNM分期有顯著相關(guān)性(均

<0.05)。見(jiàn)表2。

贛南燈彩歌舞文化發(fā)展迅速，但是距離產(chǎn)業(yè)化還具有一定的差距。需要旅游開(kāi)發(fā)者和管理者共同努力，實(shí)施多渠道、多角度的資源開(kāi)發(fā)，建立旅游產(chǎn)品品牌效應(yīng)，體現(xiàn)產(chǎn)品背后的文化特征，以獲得民眾認(rèn)可。挖掘贛南燈彩歌舞品牌背后的文化元素，應(yīng)基于贛南燈彩歌舞內(nèi)容，將其拍攝成電影或者電視宣傳片，對(duì)民俗文化藝術(shù)和贛南物質(zhì)文化進(jìn)行宣傳與保護(hù)，促進(jìn)其良性發(fā)展。

1.3 主要試劑及儀器 Trizol試劑(廣東凱普生物科技公司)；DNA 提取、cDNA合成、半定量PCR試劑盒(美國(guó)Sigma公司)；PCR引物(武漢博士德生物工程有限公司)；倒置相差顯微鏡(上海美谷分子)；低溫高速離心機(jī)(長(zhǎng)沙東旺實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；ABI 7900PCR擴(kuò)增儀(上海美谷分子)。

3 討論

HCC的發(fā)生與多基因、多因素共同參與有關(guān)，早期易發(fā)生轉(zhuǎn)移，惡性程度高，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。目前關(guān)于HCC預(yù)后評(píng)估尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，AFP、分化程度、腫瘤大小、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等均與預(yù)后有關(guān)，但無(wú)法通過(guò)上述諸因素準(zhǔn)確評(píng)估，因而尋找到有效的高敏感度和特異性的診斷和預(yù)后判斷因子，對(duì)準(zhǔn)確評(píng)估患者預(yù)后、延長(zhǎng)患者生存期有重要的價(jià)值。

miRs是長(zhǎng)度22nt的內(nèi)源性非編碼RNA，研究發(fā)現(xiàn)，多種miRNA在HCC組織或患者外周血中差異性表達(dá)，參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲等生物學(xué)行為

。miR-30a的表達(dá)與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切，在多種腫瘤中表達(dá)也明顯下調(diào)，推測(cè)其在不同類型惡性腫瘤中發(fā)揮抑癌或促癌效益不同

。miR-106b在多種腫瘤組織中差異性表達(dá)，與腫瘤的惡性生物學(xué)行為有關(guān)

。研究發(fā)現(xiàn)，miR-106b在非小細(xì)胞肺癌組織中高表達(dá)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)

。另外研究顯示，肝癌組織高表達(dá)miR-106b，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)

。本研究結(jié)果表明，HCC患者血清miR-30a表達(dá)水平低于正常人，而miR-106b表達(dá)水平高于正常人，說(shuō)明miR-30a低表達(dá)和miR-106b高表達(dá)可能參與了HCC的發(fā)生、發(fā)展。進(jìn)一步分析其表達(dá)水平與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系，兩者的表達(dá)水平與腫瘤的惡性生物學(xué)行為有顯著相關(guān)性，說(shuō)明腫瘤直徑越大、TNM分期越晚、淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移及分化程度越低，miR-30a表達(dá)水平越低及miR-106b表達(dá)水平越高。研究表明，miRNA與癌細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān)，有研究指出，miR-30a可通過(guò)Ras/Raf/MEK/ERK通路抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及遷移能力。另外研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-30a可通過(guò)失活PI3K通路抑制非小細(xì)胞肺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移。Sun等研究發(fā)現(xiàn)，miR-106b可靶向DAB2促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增強(qiáng)、侵襲等。我們推測(cè)miRNA-30a下調(diào)及miR-106b上調(diào)后可能通過(guò)調(diào)控一系列通路促進(jìn)了細(xì)胞的侵襲能力，臨床表現(xiàn)為惡性病理學(xué)特征，如淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、低分化及周圍組織的侵襲等。

有文獻(xiàn)報(bào)道稱，miRNA可作為肝癌診斷及預(yù)后標(biāo)志物

。目前關(guān)于miR-30a、miR-106b與HCC患者預(yù)后的關(guān)系文獻(xiàn)報(bào)道較少，本研究對(duì)患者進(jìn)行了隨訪，結(jié)果顯示，miR-30a低表達(dá)組患者3年總生存率更低；miR-106b低表達(dá)組患者的3年總生存率更高，這表明miR-30a具有抑癌作用，miR-30a高表達(dá)能改善HCC患者預(yù)后，miR-106b低表達(dá)也具有改善HCC患者預(yù)后效應(yīng)；進(jìn)一步多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，miR-106b高水平、miR-30a低水平是HCC患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素，提示miR-30a、miR-106b與患者的預(yù)后關(guān)系密切，在控制治療后的腫瘤的生物學(xué)行為中具有重要作用。

綜上所述，miR-30a、miR-106b在HCC組織中分別低表達(dá)、高表達(dá)，與腫瘤的進(jìn)展、預(yù)后有關(guān)，為HCC的診斷治療提供了思路。

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