晏菊姣，黃金秋，陳 蓉

（武漢藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)所，湖北 武漢 430075）

注射用艾司奧美拉唑鈉臨床多用于治療消化性潰瘍［1-2］，并對(duì)幽門螺旋桿菌有較好療效［3］。丁基膠塞是直接接觸藥品的橡膠密封件，不僅應(yīng)滿足包裝系統(tǒng)對(duì)密封性的要求，還應(yīng)與藥品具有良好的相容性，即不可引入存在安全性風(fēng)險(xiǎn)的浸出物，或浸出物水平應(yīng)符合安全性要求，且不會(huì)因?yàn)槲剿幤分械挠行С煞只蚬δ苄暂o料，影響藥品的質(zhì)量、療效和安全性［4-5］。丁基膠塞在生產(chǎn)過程中常添加棕櫚酸和硬脂酸作為增塑劑，兩者在藥品貯存過程中可能發(fā)生遷移，從而影響藥物的物理和化學(xué)性能，甚至危害身體健康［6］。故有必要根據(jù)藥品的劑型、給藥途徑及其與密封件發(fā)生相互作用的可能性，評(píng)估可能的安全性風(fēng)險(xiǎn)并進(jìn)行相應(yīng)的相容性研究。本研究中參考《藥品包裝材料與藥物相容性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》和《化學(xué)藥品與彈性體密封件相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，采用氣相色譜（GC）法［7-10］并以正己烷提取，經(jīng)甲酯化測定覆膜丁基膠塞中棕櫚酸和硬脂酸向注射用艾司奧美拉唑鈉中的遷移量，為藥物與藥包材的相容性試驗(yàn)中這兩種物質(zhì)遷移量的測定提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GC7890A型氣相色譜儀（美國Agilent公司）；XS105型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

1.2 試藥

注射用艾司奧美拉唑鈉（A 企業(yè)，批號(hào)分別為20171001，20171002，20171003，規(guī)格為每支40 mg）；棕櫚酸對(duì)照品（批號(hào)為FG48H-IR，含量97.0%），硬脂酸對(duì)照品（批號(hào)為U5ADJ-AP，含量98.0%），十七烷酸對(duì)照品（批號(hào)為4ZQ7I - IE，含量98.0%），均購自東京化成工業(yè)株式會(huì)社；三氟化硼- 甲醇溶液（美國Sigma -Aldrich 公司，批號(hào)為H1330048）；正己烷、二氯甲烷、丙酮均為色譜純，氯化鈉、磷酸均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：HP-5毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；載氣：氮?dú)?；流速?.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度：300 ℃；采用氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為300 ℃，程序升溫（初始溫度40 ℃，以20 ℃/min 的速率升至160 ℃，再以15 ℃/ min 的速率升至235 ℃，再以10 ℃/ min 的速率升至285 ℃，再以5 ℃/ min 的速率升至300 ℃，保持5 min）；不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1 μL。

2.2 溶液制備

內(nèi)標(biāo)溶液：取十七烷酸對(duì)照品60 mg，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加正己烷溶解并定容，精密量取適量，加正己烷稀釋，制成十七烷酸質(zhì)量濃度為3 μg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

混合對(duì)照品溶液：分別取棕櫚酸及硬脂酸對(duì)照品38，50 mg，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加正己烷溶解并定容，制得混合對(duì)照品貯備液；精密吸取2 mL，置20 mL容量瓶中，加正己烷定容，即得混合對(duì)照品溶液。

供試品溶液［11］：取樣品6支，分別加5 mL 0.9%氯化鈉溶液，置具塞管中混合均勻，加4%磷酸溶液調(diào)pH <3.5，再精密加入內(nèi)標(biāo)溶液3 mL，劇烈振搖1 min，靜置分層，取上層正己烷萃取液，即得。

空白對(duì)照溶液：取0.9%氯化鈉溶液5 mL，置具塞管中，用4%磷酸溶液調(diào)pH<3.5，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液3 mL，劇烈振搖1 min，靜置分層，取上層正己烷萃取液，即得。

脂肪酸甲酯化處理：精密量取正己烷萃取液2 mL，置20 mL 頂空瓶中，加入二氯甲烷1 mL，再加入三氟化硼-甲醇溶液（7︰50，V/V）0.5 mL，密封，于65 ℃條件下放置40 min，取出，放冷，加入飽和氯化鈉溶液5 mL，密塞，劇烈振搖15 s，放置分層，取上清液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取2.2 項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、空白對(duì)照溶液各適量，經(jīng)脂肪酸甲酯化處理，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置處有吸收峰，空白對(duì)照無干擾。詳見圖1。

線性關(guān)系考察：取混合對(duì)照品溶液20，40 μL，混合對(duì)照品貯備液10，20，40，80，100 μL，分別置已裝有2 mL 內(nèi)標(biāo)溶液和1 mL 二氯甲烷的不同20 mL 頂空瓶中，經(jīng)脂肪酸甲酯化處理，制得系列混合對(duì)照品溶液。按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以各待測成分峰面積/ 內(nèi)標(biāo)峰面積× 內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度的平均值（X）為橫坐標(biāo)、各待測成分質(zhì)量濃度（Y，μg/mL）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得棕櫚酸及硬脂酸回歸方程分別為Y1=0.954 3X1- 0.601 5（r= 0.999 8），Y2= 1.043 3X2-0.567 8（r=1.000 0）。結(jié)果表明，棕櫚酸及硬脂酸質(zhì)量濃度分別在0.38～18.81 μg/mL和0.49～24.34 μg/mL（r= 1.000 0）范圍內(nèi)與各待測成分峰面積/ 內(nèi)標(biāo)峰面積×內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度的平均值線性關(guān)系良好。

檢測限和定量限確定：取2.2項(xiàng)下供試品溶液適量，共2份，分別加混合對(duì)照品溶液9 μL和30 μL，經(jīng)脂肪酸甲酯化處理，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以信噪比（S/N）3∶1和10∶1時(shí)的質(zhì)量濃度記作檢測限和定量限。結(jié)果棕櫚酸、硬脂酸的檢測限分別為0.01 μg/ mL 和0.01 μg/mL，定量限分別為0.03 μg/mL和0.04 μg/mL。

精密度試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液（2.0 μg/mL）適量，經(jīng)脂肪酸甲酯化處理，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，并計(jì)算各待測成分峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積×內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度值。結(jié)果棕櫚酸和硬脂酸的RSD分別為0.99%和0.87%（n=6），表明儀器精密度良好。

1.棕櫚酸甲酯 2.十七烷酸甲酯 3.硬脂酸甲酯A.空白對(duì)照溶液 B.混合對(duì)照品溶液 C.供試品溶液圖1 氣相色譜圖1.Methyl palmitate 2 Heptadecanoic acid methyl ester 3 Methyl stearateA.Blank reference solution B.Mixed reference solution C.Test solutionFig.1 GC chromatograms

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品（批號(hào)20171001）適量，加入混合對(duì)照品貯備液30 μL，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，經(jīng)脂肪酸甲酯化處理，分別于室溫下放置0，3，6，9，12，15，20，24，48 h 時(shí)按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算待測成分峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積×內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度值。結(jié)果棕櫚酸和硬脂酸的RSD分別為1.72%和1.23%（n=9），表明供試品溶液在室溫下放置48 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)20171001）適量，加入混合對(duì)照品貯備液30 μL，共6 份，經(jīng)脂肪酸甲酯化處理，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄棕櫚酸和硬脂酸的峰面積，并計(jì)算含量。結(jié)果棕櫚酸和硬脂酸的平均含量分別為103.1 μg/mL 和99.8 μg/mL，RSD分別為2.00%和1.10%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

回收試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)20171001），共9份，分別加入低、中、高濃度混合對(duì)照品溶液，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，經(jīng)脂肪酸甲酯化處理，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，并計(jì)算回收率。詳見表1。

表1 回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test（n=9）

2.4 樣品定量結(jié)果

提取試驗(yàn)［12］：取樣品，每支加0.9%氯化鈉溶液5 mL溶解后重新壓蓋密封，倒置于100 ℃烘箱中烘烤2 h，放冷，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，經(jīng)脂肪酸甲酯化處理，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果樣品中含棕櫚酸和硬脂酸分別為0.04 μg/mL和0.05 μg/mL。

遷移試驗(yàn)：按2020 年版《中國藥典（四部）》通則9001［13］項(xiàng)下條件，取溫度40 ℃、相對(duì)濕度75%條件下放置0，3，6 個(gè)月和陰涼處放置12 個(gè)月的3 批樣品各適量，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，經(jīng)脂肪酸甲酯化處理，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果均未檢出棕櫚酸和硬脂酸遷移。

3 討論

本研究中的注射用艾司奧美拉唑鈉使用的膠塞是覆膜膠塞，棕櫚酸和硬脂酸進(jìn)入藥液中的遷移量應(yīng)很小，試驗(yàn)中考慮了極端條件（倒置于100 ℃烘箱中烘烤2 h）下的藥液提取模擬試驗(yàn)，結(jié)果證明，在非正常條件下貯存的注射用艾司奧美拉唑鈉使用的覆膜膠棕櫚酸和硬脂酸仍會(huì)發(fā)生遷移，故有必要對(duì)注射用艾司奧美拉唑鈉中棕櫚酸和硬脂酸的遷移進(jìn)行監(jiān)測。本研究中進(jìn)行了耐用性考察，不同人員在不同時(shí)間制備的對(duì)照品溶液，色譜峰分離良好，棕櫚酸、硬脂酸均呈良好的線性關(guān)系，且均能滿足方法檢測限要求。

在加速試驗(yàn)的放置中，采取了正立、倒置、側(cè)放方法［14］，結(jié)果顯示，各批次注射用艾司奧美拉唑鈉包裝用膠塞中棕櫚酸和硬脂酸均未遷移，說明覆膜膠塞能較好地防止棕櫚酸和硬脂酸向藥物中遷移，與注射用艾司奧美拉唑鈉相容性較好，表明覆膜膠塞適用于注射用艾司奧美拉唑鈉的密封包裝［15］。

綜上所述，本研究中建立的方法靈敏度高，可用于注射用艾司奧美拉唑鈉包裝所用覆膜丁基膠塞中棕櫚酸和硬脂酸遷移量的監(jiān)測。