王安萍，馮關(guān)萍，曾建忠，殷帥文,2

Illumina高通量測序分析百合內(nèi)生真菌群落多樣性

王安萍1，馮關(guān)萍1，曾建忠1，*殷帥文1,2

（1. 井岡山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江西，吉安 343009；2. 江西省生物多樣性與生態(tài)工程重點實驗室，江西，吉安 343009）

百合具有較高的藥用食用價值，研究發(fā)現(xiàn)它的許多內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物有進一步開發(fā)利用的潛能，深入了解百合內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)與多樣性，有助于發(fā)現(xiàn)新菌種以及具有特定功能的內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物。以ITS區(qū)的rDNA為靶標序列，采用Illumina MiSeq測序技術(shù)分別對百合葉片（bhy417)、百合莖稈（bhj417）和百合地下鱗莖（bhl417）三個樣品的內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)組成和多樣性進行測定分析。經(jīng)過分析有以下結(jié)果：三個樣品共得到用于后續(xù)樣品分析的436394條有效序列和122205709個堿基；樣品bhy417的內(nèi)生真菌群落豐富度最大；三個樣品之間的內(nèi)生真菌群落多樣性差異不顯著、群落結(jié)構(gòu)不同；球腔菌屬Mycosphaerella、外囊菌屬Taphrina、炭疽菌屬Colletotrichum、散斑殼屬Lophodermium、殼二孢屬Ascochyta、Zymoseptoria屬、Catenulostroma屬、Phaeophleospora屬、Endoconidiophora屬、Hormonema屬、烏氏霉屬Uwebraunia、Capnobotrylla屬、叢赤殼屬Neonectria、長毛盤菌屬Trichophaea等在樣品中豐度較高。FUNGuild功能預(yù)測結(jié)果顯示，百合內(nèi)生真菌包括以下功能菌群：植物病原菌、動物病原菌、腐生菌、未定義腐生菌、內(nèi)生菌、木材腐生菌、地衣寄生菌等。研究結(jié)果表明百合有豐富的內(nèi)生真菌定殖，其中的植物病原菌以及一些目前還未鑒定出來的菌將可能對百合生防菌以及具特定功能代謝產(chǎn)物的研發(fā)提供幫助。

百合；內(nèi)生真菌；高通量測序；群落結(jié)構(gòu)

百合最初載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，卷丹百合是百合其中的一個品種，是多年生草本宿根植物，其鱗莖可作為蔬菜食用與藥用植物栽培，其花芳香美麗，屬于名貴的觀賞花卉，百合可預(yù)防和治療肺結(jié)核、神經(jīng)衰弱、便秘、更年期綜合癥、痛風(fēng)等癥[1-2]。植物內(nèi)生菌是存在于植物器官組織內(nèi)部的一類微生物，對寄主植物不產(chǎn)生明顯致病性，其發(fā)酵次生代謝產(chǎn)物具有多種生物活性。目前國內(nèi)外開展的百合內(nèi)生菌的實驗有抗菌活性菌株的篩選鑒定、引起百合植物病害病原菌的分離等，已報道的百合內(nèi)生真菌有孟璐等報道的尖孢鐮刀菌[3]、李潤根等報道的假短孢彎孢和高粱附球菌[4-5]等等。有研究表明通過純培養(yǎng)獲得的微生物種類以及數(shù)量都很有限，只占非純培養(yǎng)微生物總數(shù)的0.1% ～ 10%，內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）是研究真菌的最常用的測序靶點，能較真實反映真菌群落結(jié)構(gòu)與多樣性[6]。本研究以江西蓮花種植卷丹百合的百合葉、百合鱗莖、百合梗莖為材料，采用Illumina測序技術(shù)對以上三個樣品的內(nèi)生真菌進行ITS 擴增子測序。通過深入研究百合內(nèi)生真菌群落組成與多樣性[7]，有助于更全面了解和鑒定百合內(nèi)生真菌，也為今后研制開發(fā)百合病蟲害生防菌和具實際應(yīng)用生物活性功能菌等提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

本研究所采用的三個樣品為百合葉片、百合地下鱗莖、百合莖稈，分別記為bhy417、bhl417、bhj417，樣品連帶泥土一起采集到實驗室備用。百合材料是從江西蓮花百合基地隨機采摘的無病害植株，江西蓮花縣位于江西省西部，屬亞熱帶季風(fēng)濕潤氣候，年平均氣溫17.5℃，無霜期平均284 d，平均降雨量1600 ～ 1700 mm，年平均日照為1697.4 h，氣候條件適合喜溫作物的栽培。

1.2 實驗方法

1.2.1 基因組DNA提取、PCR擴增及檢測

各個樣品依次使用70%乙醇溶液進行表面沖洗3遍，再使用1XPBS溶液沖洗3遍，晾干后用無菌的剪刀剪碎，再放入2 mL離心管中，加入適量鋼珠和裂解液，在組織破碎儀上進行破碎。經(jīng)過組織破碎儀破碎后，根據(jù)提取試劑盒操作說明書提取樣品總DNA。樣品提取DNA后利用Illumina Miseq軟件進行ITS文庫構(gòu)建和高通量測序。即以提取出來的總DNA為模板，利用真菌引物ITS1F (CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA)和ITS2R (GCTGCGTTCTTCATCGATGC)對樣品基因組DNA的ITS1-ITS2區(qū)進行PCR擴增，將所得的PCR產(chǎn)物混合后經(jīng)過Tris_HCl洗脫和2%瓊脂糖凝膠電泳檢測目的片段大小和完整性，并進一步進行精確定量和處理[8]。

1.2.2 測序數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

利用Illumina Miseq得到的原始數(shù)據(jù)文件經(jīng)堿基識別分析轉(zhuǎn)化為原始測序序列。由于下機測序得到的是雙端序列數(shù)據(jù)，且測序序列中含有標簽序列，以及測序時加入的引物和接頭序列，所以首先需要去除引物接頭，使用Cutadapt軟件去除測序引物接頭序列TGGAATTCTCGGGTGCCAAGGAACTC，再根據(jù)PE序列之間的重疊關(guān)系，使用PEAR軟件將成對的序列拼接成一條序列。根據(jù)各樣本標簽序列和引物序列，從拼接后數(shù)據(jù)中分割出各樣本數(shù)據(jù)，并校正序列方向，使用PRINSEQ軟件切除序列尾部質(zhì)量值20 bp以下的堿基，設(shè)置10 bp的窗口，如果窗口內(nèi)的平均質(zhì)量值低于20 bp，從窗口開始截去后端堿基，過濾質(zhì)控后的含N序列和短序列，最終過濾掉低復(fù)雜度的序列。

利用Usearch 軟件平臺在上述優(yōu)化序列中提取非重復(fù)序列，所有樣本去冗余序列合并后去除沒有重復(fù)的單序列，按照97%相似性對非重復(fù)序列 (不含單序列) 進行OTU聚類。采用RDP classifier貝葉斯算法對97%相似度水平的OTU代表序列進行分類學(xué)分析，在域、界、門、綱、目、科、屬、種各個分類學(xué)水平上進行每個樣本群落組成的統(tǒng)計，并使用SINTAX比對Unite數(shù)據(jù)庫，以得到每個OTU對應(yīng)的物種分類信息。采用Mothur軟件計算Alpha多樣性指數(shù)，以Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)反映百合內(nèi)生真菌群落的多樣性，以Chao1、Ace指數(shù)反映百合內(nèi)生真菌群落的豐富度；采用R語言工具繪制PCA分析圖進行Beta多樣性分析；通過比對FUNGuild數(shù)據(jù)庫，分析百合內(nèi)生真菌功能類群[9-10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 測序結(jié)果與Alpha多樣性分析

經(jīng)過分析共得到436394條有效序列和122205709個堿基，其中樣品bhj417得到117059條序列和35408781個堿基，樣品bhl417得到130431條序列和37043601個堿基，樣品bhy417得到188904條序列和49753327個堿基，所有序列的長度均在101-452bp之間。將得到的所有有效序列進行聚類處理和Alpha多樣性分析，得到結(jié)果如表1。

表1 三個樣品內(nèi)生真菌群落alpha多樣性指數(shù)表（OTU水平）

Table 1 Alpha diversity index of endophytic fungi of three sample

Sample groupsNumberOTUsShannonSimpsonChao1AceCoverage bhj41711041418203.810.241849.051841.210.999348 bhl41712492917093.660.141754.241747.640.999152 bhy41718248818343.630.131956.891931.730.998838

Alpha多樣性可以反映微生物群落的豐富度和多樣性兩方面。OTUs表示實際觀測值；Number是有注釋信息的OTU數(shù)目；Coverage指各樣品文庫的覆蓋率；Chao1是估計樣本中所含OTU數(shù)目的指數(shù)，Ace指數(shù)可估計樣品的物種豐富度，其中Chao1和Ace指數(shù)的數(shù)值越大，表示群落豐富度越高；Simpson指數(shù)代表一個區(qū)域的生物多樣性，它的值越大，說明群落多樣性越低；Shannon常用于反映群落Alpha多樣性，數(shù)值越大，說明群落多樣性越高。根據(jù)表1可知，3個樣品的測序覆蓋率（Coverage）均大于99.8%，表明測序數(shù)據(jù)基本覆蓋了3個樣品中所有內(nèi)生真菌的生物信息；Ace和Chao1指數(shù)結(jié)果顯示，3個樣品的內(nèi)生真菌群落豐富度稍有差異，大小依次為：bhy417>bhj417> bhl417；但Shannon和Simpson指數(shù)表明不存在顯著性差異，即樣品間的內(nèi)生真菌群落多樣性大小差異不顯著。

另外利用各樣本在不同測序深度的序列進行隨機抽樣，以抽到的序列數(shù)與它們對應(yīng)的OTU數(shù)目來構(gòu)建稀釋性曲線，以統(tǒng)計這些序列對應(yīng)樣本的Alpha多樣性指數(shù)。圖1中，以抽取的數(shù)據(jù)量為橫軸，以Alpha多樣性指數(shù)值為縱軸繪制曲線，圖中曲線逐漸趨于平坦，表示測序數(shù)據(jù)量合理[11]。

圖1 Alpha指數(shù)稀釋性曲線圖

圖2 屬水平百合內(nèi)生真菌群落主成分分析

2.2 Beta多樣性分析

Beta多樣性分析主要是分析不同樣本之間群落結(jié)構(gòu)的相似性。通過在屬水平上對上述三個樣品的內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)進行主成分分析，來觀察本次樣本間的差異程度及差異變化規(guī)律。圖2顯示，PC1和PC2對樣品群落的貢獻率分別為82.26%和17.74%，是樣品內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)的主要影響因素，且PC1的影響明顯大于PC2。3個品種的樣品點分開明顯，表明內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)存在一定的差異性。在PC1的作用下，樣品bhy417點與其他二個品種點拉開距離，PC1是bhy417內(nèi)生真菌群落的主要影響因素，在PC2的作用下，樣品bhl417和樣品bhj417樣品點間拉開距離，PC2是形成樣品bhl417和樣品bhj417內(nèi)生真菌群落差異性的主要因素。Beta多樣性分析表明了本次三個樣本之間真菌群落結(jié)構(gòu)具有明顯差異。

2.3 各樣品內(nèi)生真菌組成分析

圖3是bhy417、bhj417、bhl417組樣品在門水平上的真菌群落組成柱形圖，其中除了部分沒有注釋信息的unclasssified組，Ascomycota群落是各個樣品中有注釋信息真菌群落中最大的類群，其次是Basidiomycota群落。而三個樣品相比，Ascomycota在bhy417樣品中豐度最高（52.61%），在bhj417樣品中最低（11%）；Basidiomycota在bhl417樣品中豐度最高（3.35%），在bhy417樣品中減少到2.08%，在bhj417樣品中最低（1.18%）。

表2展示的是基于屬水平上不同樣品中的真菌菌屬結(jié)果。由表2可知，屬水平上三個樣品內(nèi)生真菌群落間差異明顯，優(yōu)勢菌落各不相同，這和上述研究對三個樣品進行內(nèi)生真菌群落Beta多樣性分析結(jié)果一致。其中，bhl417樣品中屬水平上被鑒定出的有炭疽菌屬（13.90%）、土赤殼屬（5.07%）、外瓶霉屬（1.10%），77未被鑒定出的有叢赤殼科的一種真（6.15%）、火絲菌科的一種真菌（4.46%）、角擔菌科的一種真菌（2.67%）；bhy417樣品中屬水平上被鑒定出來的有屬（1.23%），這是屬水平上未被鑒定出的有座囊菌目的一種真菌（31.90%）子囊菌門的一種真菌（9.17%）球腔菌科的一種真菌（2.12%）；樣品bhj417屬水平上未鑒定出，只鑒定出子囊菌門的一種真菌（4.08%）和腔菌目的一種真菌（3.63%）。

（Unclassified_Fungi：沒有注釋信息的類群；Other：豐度較低的類群）

從表2中還可以看出，在3份樣品中，屬水平上樣品bhl417能被檢測出來的屬種類更多，其中炭疽菌屬豐度占比達到13.90%，三個樣品中豐度占比分別為bhj417（87.8%）、bhl417（64.6%）、bhy417（44.99%），因此，雖然結(jié)果還需要后續(xù)加大樣本量和重復(fù)實驗以進一步驗證，但我們知道百合中還有很多未知真菌以及它們的代謝產(chǎn)物功能可以探討研究，百合內(nèi)生真菌的豐富性以及可研究空間還很大。

2.4 內(nèi)生真菌FUNGuild功能預(yù)測

通過比對FUNGuid( Fungi Functional Guild)數(shù)據(jù)庫可以對真菌群落進行分類分析，從而了解和預(yù)測內(nèi)生真菌群落功能。FUNGuild首先根據(jù)真菌的營養(yǎng)方式將真菌分為三大類：病理營養(yǎng)型(pathotroph)；共生營養(yǎng)型(symbiotroph)；腐生營養(yǎng)型(saprotroph)?；?大營養(yǎng)方式，又進一步細分為若干個guilds(guilds是微生態(tài)學(xué)中的概念)：動物病原菌、叢枝菌根真菌、外生菌根真菌、杜鵑花類菌根真菌、葉內(nèi)生真菌、地衣寄生真菌、地衣共生真菌、菌寄生真菌、植物病原菌、未定義根內(nèi)生真菌、未定義腐生真菌和木質(zhì)腐生真菌等。

表2 不同樣品內(nèi)生真菌優(yōu)勢種群分布（基于屬的水平）

Table 2 Distribution of dominant fungi from different sample based on the classification level of genus

SampleGenusPer(%) bhl417Colletotrichum13.9 Exophiala1.1 Ilyonectria5.07 unclassfied_Nectriaceae6.15 unclassfied_Pyronemataceae4.46 unclassfied_Ceratobasidiaceae2.67 unclassfied_Fungi64.6 Other2.04 bhy417Capnobotryella1.23 unclassfied_Dothideales31.9 unclassfied_Ascomycota9.17 unclassfied_Mycosphaerellaceae2.12 unclassfied_Fungi44.99 Other10.59 bhj417unclassfied_Ascomycota4.08 unclassfied_Pleosporales3.63 unclassfied_Fungi87.8 Other4.49

本次FUNGuild 功能預(yù)測置信水平僅選用probable和highly probable，以保證預(yù)測的準確性。比對預(yù)測結(jié)果顯示：本次三個樣品中的真菌類群主要預(yù)測得到腐生營養(yǎng)型、病理營養(yǎng)型、共生營養(yǎng)型、病理-腐生營養(yǎng)型、病理-共生營養(yǎng)型、腐生-共生營養(yǎng)型、病理-腐生-共生營養(yǎng)型共7個營養(yǎng)型。不同的樣品其主要營養(yǎng)型不同，樣品bhj417和樣品bhy417中，病理、腐生、病理-腐生3種營養(yǎng)型的相對豐富度較高，在二個樣品中的相對豐富度總和分別達到80.72%和95.86%，而樣品bhl417中，病理、共生、病理-共生3種營養(yǎng)型的相對豐富度較高，相對豐富度總和達到77.65%。

不同樣品的主要生態(tài)功能群也存在顯著差異，樣品bhj417內(nèi)生真菌功能類群主要是植物病原菌(30.21%)、未定義的腐生菌（41.99%）、內(nèi)生真菌—植物病原菌（4.91%）、植物病原菌—未定義的腐生菌（2.58%），其中未定義腐生菌在屬水平上包括屬（1OTU）、屬(3OTU)等，植物病原菌在屬水平上包括球腔菌屬（3OTU）、外囊菌屬（4OTU）等，內(nèi)生真菌—植物病原菌有炭疽菌屬（1OTU）等，植物病原菌—未定義的腐生菌在科水平上主要屬于球腔菌科（3OTU）。樣品bhy417內(nèi)生真菌功能類群中植物病原菌相對豐度高達67.81%，是bhy417中最主要的功能類群，在科水平上主要有核盤菌科（1OTU），另有球腔菌屬（4OTU）、外囊菌屬（5OTU）、散斑殼屬（6OTU）、殼二孢屬（2OTU）以及一些新屬種屬（1OTU）、屬（2OTU）、屬（1OTU）、屬（1OTU）等；樣品bhy417中，未定義腐生菌類群也是樣品bhy417內(nèi)生真菌主要功能類群，相對豐度達18.18%，其在屬水平上包括屬（1OTU）、烏氏霉屬（2OTU）、屬(3OTU)等以及只在樣品bhy417中檢測到的雙毛座孢屬（1OTU）、屬（1OTU）、黑孢霉屬（1OTU）、隱盤芹屬（1OTU）等。樣品bhl417內(nèi)生真菌功能類群主要是內(nèi)生真菌—植物病原菌（相對豐度為53.44%）、植物病原菌（相對豐度為23.91%），動物病原菌—未定義腐生（4.22%）、叢枝菌根(0.40%)等，其中叢枝菌根共7個OTU，占樣品bhl417總OTU數(shù)量的18.92%，屬水平上有炭疽菌屬（1OTU）、叢赤殼屬（1OTU）、長毛盤菌屬（1OTU）、外瓶霉屬（3OTU）、根生孢子屬（2OTU）、馬利亞霉屬（1OTU）、斑替支孢瓶霉屬（1OTU）等。

3 討論與小結(jié)

3.1 Illumina高通量測序研究百合內(nèi)生真菌的可行性

利用高通量測序技術(shù)研究百合內(nèi)生真菌，是目前國內(nèi)外檢測生物信息量和內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)完整性最大的保證限度。本研究利用Illumina高通量測序技術(shù)研究百合內(nèi)生真菌，共獲得了ITS1-ITS2 區(qū)436394條有效序列以及196個置信水平選用probable和highly probable的OTU，涵蓋了189個真菌屬，其中包括很多不確定的新屬種，證實了百合中有數(shù)量和種類都豐富的內(nèi)生真菌以及Illumina高通量測序技術(shù)研究百合內(nèi)生真菌的可行性。

3.2 百合樣品內(nèi)生真菌群落差異及群落功能

此次研究中百合內(nèi)生真菌能被鑒定出來的主要有炭疽菌屬、土赤殼屬、外瓶霉屬、叢赤殼屬、球腔菌屬以及未經(jīng)分類的核盤菌科、火絲菌科、角擔菌科、球腔菌科，不同樣品的主要菌群差異明顯。另外本次FUNGuild功能預(yù)測結(jié)果表明，百合內(nèi)生真菌大部分都被定義為植物病原菌、未定義腐生菌、內(nèi)生菌-植物病原菌等類群，病原菌與腐生菌類群豐度較高表明了較多病原菌和腐生菌寄生于百合內(nèi)，在健康百合植株中以內(nèi)生菌方式在植物體內(nèi)生長，不會引起寄主引起病害癥狀，但當條件適當時可能會變成病原菌而使寄主發(fā)生病害或腐變[12]。炭疽菌屬中的百合炭疽病就是其中一種植物病原菌，本研究中發(fā)現(xiàn)其在百合葉片、百合莖稈、百合地下鱗莖中以病理-共生的營養(yǎng)方式都有分布，其中百合地下鱗莖bhl417樣品內(nèi)百合炭疽菌豐度特別高，且是bhl417所有可鑒定內(nèi)生真菌中分布最多的菌屬，百合鱗莖中百合炭疽菌的高豐度表明百合地下鱗莖受百合炭疽病田間病害很大，鱗莖在儲藏過程中可發(fā)病引致鱗片變黑干縮，造成較大的經(jīng)濟損失，應(yīng)加速抗炭疽病資源篩選及抗病優(yōu)良品種選育工作、開發(fā)適合大田生產(chǎn)的生防微生物[13]；土赤殼屬是從廣義的新叢赤殼屬中獨立出來的，廣泛分布在木本和草本植物的根內(nèi)以及土壤中，屬于腐生真菌或弱寄生真菌，該屬大多數(shù)種類為植物病原菌，可引起植物根腐病和黑腐病等[14]，本研究發(fā)現(xiàn)其在百合地下鱗莖中大量存在；散斑殼屬能引起植物黑皮病，有研究發(fā)現(xiàn)茉莉酸甲酯對由于散斑殼屬真菌造成的黑皮病有響應(yīng)[15]。

我們總結(jié)分析本次研究，還發(fā)現(xiàn)百合中有潛在有益內(nèi)生真菌，外瓶霉屬（）真菌是礦區(qū)特殊生境中的優(yōu)勢類群，它們在礦區(qū)植物根部具有較高的定殖率。通過一定的篩選技術(shù)對外瓶霉菌株進行重金屬抗性篩選，能得到部分重金屬高抗菌株和敏感菌株[16-17]；叢赤殼屬菌株發(fā)酵產(chǎn)物初提物對煙曲霉菌具有抑制活性和一定的抗稻瘟霉活性[18]；球腔菌屬菌株具有α-葡萄糖苷酶抑制活性的次生代謝產(chǎn)物[19]；角擔菌科的真菌中提取的凝集素對菜青蟲有影響[20]；火絲菌科、核盤菌科、屬的真菌在百合中的功能還有待于進一步的研究探究。

[1] 張瑞賢,張衛(wèi),劉更生.神農(nóng)本草經(jīng)譯釋[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社, 2018: 324.

[2] 游力剛,井亞莉. 卷丹百合的功效及高產(chǎn)栽培技術(shù)[J]. 吉林蔬菜,2008(6):67-68.

[3] 孟璐,周劍忠,等. 百合內(nèi)生真菌中抗茵活性菌株的篩選與鑒定[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(6): 242-244.

[4] 尹樂斌,李立才,孟慶霞,等.龍牙百合腐敗菌的分離鑒定、生物學(xué)特性及抑制劑篩選[J].食品與機械,2019,35(6):79-84.

[5] 李潤根,盧其能,何咪,等.百合新病原菌假短孢彎孢生物學(xué)特性及其對殺菌劑的敏感性[J].植物保護,2020,46(6): 41-46.

[6] 謝紅煉,汪漢成,等.煙草種子內(nèi)生真菌群落結(jié)構(gòu)和多樣性分析[J].中國煙草科學(xué),2021,42(2): 28-36.

[7] 文永均,黃璜,馬中剛,等. Illumina高通量測序分析健康三七與患根腐病三七根際土和根內(nèi)生真菌多樣性[J].食品與發(fā)酵科技,2020,56(6): 23-30.

[8] 尹麗,劉仁綠,廖永輝,等.鋁脅迫對酸性紅壤古菌amoA基因多樣性的影響分析[J].井岡山大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2021,42(4):53-58.

[9] McMurdie PJ, Holmes S. phyloseq: an R package for reproducible interactive analysis and graphics of microbiome census data[J].PLoS One,2013, 8(4):e61217.

[10] Nguyen N H, et al. FUNGuild: an open annotation tool for parsing fungal community datasets by ecological guild[J]. Fungal Ecology,2016,20(1):241-248.

[11] 盧美西. 蛇紋石礦區(qū)微生物群落特征及其固碳作用潛力[D].南京:南京師范大學(xué), 2020.

[12] 姜道宏.植物內(nèi)生真菌及其展望[J].中國生物防治學(xué)報, 2015, 31(50): 742-749.

[13] 程維舜,祝菊紅,蔡翔,陽永學(xué),等.百合炭疽病研究進展[J].中國植保導(dǎo)刊,2020,40(2): 33-36.

[14] 王玉君,張麗春,郭順星.土赤殼屬三個中國新記錄種[J].菌物學(xué)報,2015,34(6):1209-1214.

[15] ??epste Ilze,Krivmane Baiba,??ipars Vilnis,et al. Induction of defense responses in pinus sylvestris seedlings by methyl lasmonate and response to heterobasidion annosum and lophodermium seditiosum inoculation[J]. Forests,2021,12(5):628-628.

[16] 刁玉華.深色有隔內(nèi)生真菌(DSE)抗鋅菌株的篩選及其抗性機理的初步研究[D]昆明:云南大學(xué),2012.

[17] DiaoYu-Hua ,Li Tao ,Zhao Zhi-Wei. Zinc accumulation characteristics of two exophiala strains and their antioxidant response to Zn2+stress[J].Journal of Environmental Protection, 2013,4(4A):12-19.

[18] 唐潮,葉科元,方莎莎,等.北極真菌Nectria sp.B-13中酚醛倍半萜烯類化合物的研究[J].中國海洋藥物,2016,35(5): 35-39.

[19] Qiu Pei, Liu Zhaoming,Chen Yan, at al. Secondary metabolites with α-Glucosidase inhibitory activity from the mangrove fungus mycosphaerella sp.SYSU-DZG01[J] Marine Drugs, 2019, 17(8): 483-483.

[20] Alborzi Zeynab, Zibaee Arash, Sendi Jalal, et al. Effects of the agglutinins extracted from rhizoctonia solani(cantharellales:Ceratobasidiaceae)on pieris brassicae (lepidoptera: Pieridae)[J].Journal of Economic Entomology, 2016, 109(3): 1132-1140.

COMMUNITY DIVERSITY ANALYSIS OF ENDOPHYTIC FUNGI INBY ILLUMINA HIGH-THROUGHPUT SEQUENCING

WANG An-ping1, FENG Guan-ping1, ZENG Jian-zhong1,*YIN Shuai-wen1,2

（1.School of Life Sciences, Jinggangshan University, Ji’an, Jiangxi 343009, China;2. The Key Laboratory of Biodiversity and Ecological Engineering of Jiangxi Province, Ji’an, Jiangxi 343009, China）

has high medicinal and edible values, and many endophytic metabolites fromhave been found to have potential for further development and utilization. An in-depth understanding of the community structure and diversity of endophytic fungi fromcan help to discover new strains and endophytic metabolites with specific functions. Using the rDNA of ITS region was as the target sequence, Illumina Miseq sequencing technology was used to determine the community structure and diversity of endophytic fungi in lily leaf (bhy417), stem (bhj417) and bulb (bhl417). The results showed that a total of 436394 effective sequences and 122205709 bases were obtained from the three samples for subsequent analysis; The endophytic fungi community richness of sample bhy417 was the highest; There was no significant difference in the diversity of endophytic fungi community among the three samples, but the community structure was different;,,,,,,,,,,,,,was more abundant in the samples. The FUNGuild function prediction analysis showed that the endophytic fungi inincluded the following functional groups: plant pathogens, animal pathogens, saprophytes, undefined saprophytes, endophytes, wood saprophytes, lichen parasites and so on. The results indicated there were abundant endophytic fungi colonized in, and among which plant pathogens and some unknown bacteria will provide some reference value for the research and development of biocontrol bacteria and specific functional metabolites of.

; endophytic fungi; high-throughput sequencing; community structure

1674-8085（2022）04-0030-07

Q93-331；S644.1

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2022.04.005

2021-11-27；

2022-04-16

國家自然科學(xué)基金項目(31260076，31760332)

王安萍(1971-），女，江西吉安人，實驗師，碩士，主要從事天然產(chǎn)物研究與開發(fā)(E-mail: jskwangap@126.com)；

*殷帥文(1978-)，男，湖南寧鄉(xiāng)人，副教授，博士，主要從事天然產(chǎn)物研究與開發(fā)(E-mail: shwyin@126.com).