羅鳴

（江西省吉安市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，吉安 343000）

臨床在進(jìn)行藥物、食品檢測時(shí)，常用超高效液相色譜法實(shí)施檢測， 其屬于一種化學(xué)成分分離技術(shù)，應(yīng)用原理與高效液相色譜法一致，能夠快速檢測小顆粒物質(zhì)，分離速度快、自動(dòng)化程度高，且適用范圍較廣[1]。 當(dāng)前在進(jìn)行藥物檢驗(yàn)分析時(shí)，相比高效液相色譜法， 超高效液相色譜法具有更加突出的優(yōu)勢， 不僅可以將藥物中的復(fù)雜成分進(jìn)行有效分析，且檢驗(yàn)分離速度快，使用較為廣泛[2]。

1 儀器與方法

1.1 儀器選取 使用超高效液相色譜儀， 選取48片三七傷藥片（生產(chǎn)廠家：山西和豐大來制藥有限公司；國藥準(zhǔn)字：Z20003048），隨機(jī)分為對照組與研究組，各24 例。

1.2 方法 隨機(jī)擇48 片三七傷藥片，實(shí)施檢測。 對照組：高效液相色譜法檢測。 將藥片進(jìn)行研磨，直到其呈現(xiàn)粉末狀，將藥粉置入量瓶中，增加流動(dòng)溶解，進(jìn)行稀釋與濾過后，放置紫外線中掃描（200～400 nm），其中末端吸收210 nm，對波長進(jìn)行檢測。隨后吸取20 μL 稀釋液注入液相色譜儀， 并且記錄以及觀察色譜圖。 研究組：超高效液相色譜法檢測。 將藥片進(jìn)行研磨，直到其呈現(xiàn)粉末狀，隨后增加流動(dòng)溶解，進(jìn)行稀釋以及過濾后，在超高效液相色譜法儀中注入20 μL 稀釋液， 對色譜圖進(jìn)行觀察與記錄。

1.3 觀察指標(biāo) 分析兩組藥物檢驗(yàn)分析時(shí)間以及徹底分離率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 以SPSS 19.0 軟件分析資料。 χ2檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料，t 檢驗(yàn)計(jì)量資料。 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 分析時(shí)間對比 對比分析時(shí)間， 研究組更短，P＜0.05，見表1。

表1 分析時(shí)間（±s，min）

表1 分析時(shí)間（±s，min）

組別 例數(shù) 分析時(shí)間研究組對照組t 值P 值24 24 2.41±0.11 15.34±1.47 42.971＜0.001

2.2 徹底分離率 對比徹底分離率， 研究組更高，P＜0.05。 見表2。

表2 徹底分離率（n，%）

3 討論

3.1 藥物檢驗(yàn)相關(guān)概述 在實(shí)施藥物檢驗(yàn)時(shí)，部分樣品由于含量比較少，因此分離時(shí)難度大，時(shí)間長，結(jié)果不理想。因此當(dāng)前臨床需要一種分析速度快且分離效率高的方式，而超高效液相色譜法則可以滿足上述條件。 超高效液相色譜法具有靈敏度、精確度高的優(yōu)勢，因此在臨床進(jìn)行藥物檢驗(yàn)中使用較為廣泛。 由于超高效液相色譜法分辨率、自動(dòng)化程度高，檢測速度快，所以在實(shí)施檢測后，能夠有效分辨出假冒偽劣藥物，提高用藥的安全性。 在進(jìn)行藥物分析時(shí)，相比高效液相色譜法，使用超高效液相色譜法分離能力更高，可以在較快的流速、線速以及反壓下實(shí)施分離，結(jié)果較為優(yōu)異。 因此現(xiàn)階段臨床在對原料藥、成藥、中間體各組分以及雜質(zhì)含量檢測時(shí)，常選擇使用超高效液相色譜法，具有快速、準(zhǔn)確且高效的優(yōu)勢[3]。

超高效液相色譜是由細(xì)粒徑填料和細(xì)內(nèi)徑柱子而獲得的高效液相色譜技術(shù)， 對色譜柱性能產(chǎn)生影響的主要因素是固定相的顆粒度。 顆粒度越小其色譜柱的效率越高， 顆粒度的降低能夠提升色譜柱的效率， 同時(shí)還能提高分析的靈敏度和速度。 為了能夠顯著提升分離速度和分離效率，則需要在超高效液相色譜的色譜技術(shù)上進(jìn)行改進(jìn)，需要?jiǎng)?chuàng)新的技術(shù)有4 點(diǎn)：（1）使用雜化顆粒技術(shù)來合成新型色譜填料。 新型的全多孔球形反相固定相色譜填料的粒徑大小為17 μm，同時(shí)在填料技術(shù)上也進(jìn)行改進(jìn)，制備高效率的色譜柱。 （2）制造超高效液相色譜輸液泵。 如裝填的色譜柱較長，為提升柱效的流速，應(yīng)先將其柱壓進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)算，再使用輸液泵將溶劑進(jìn)行直接傳送。 （3）超高效液相色譜高速檢測器。 當(dāng)色譜峰通過檢測器時(shí)，一般會(huì)有一個(gè)非常小和非常高的時(shí)間常數(shù)， 這樣可以幫助檢測器在整個(gè)色譜峰內(nèi)撲捉到更多的數(shù)據(jù)點(diǎn)， 能夠獲得準(zhǔn)確的保留時(shí)間和峰面積。 （4）自動(dòng)進(jìn)樣器。進(jìn)樣系統(tǒng)是超高效液相色譜非常關(guān)鍵的因素，在超高效液相色譜中確保極端高壓力波動(dòng)的影響，所以進(jìn)樣時(shí)體積要盡量減小， 這樣才能加快進(jìn)樣周期的同時(shí)還能實(shí)現(xiàn)進(jìn)樣的高速度。

3.2 超高效液相色譜法的應(yīng)用現(xiàn)狀

3.2.1 應(yīng)用于藥品分析 在藥品檢驗(yàn)分析中， 樣品分離難度高、 分析時(shí)間長一直是藥品檢驗(yàn)分析的弊端。 而應(yīng)用超高效液相色譜法進(jìn)行藥品檢驗(yàn)分析，可彌補(bǔ)上述弊端，提高藥品檢測的靈敏度和藥品分析準(zhǔn)確性。 如，在測定人凝血因子VII 中枸櫞酸離子含量的試驗(yàn)中， 應(yīng)用超高效液相色譜法進(jìn)行測定的效果良好。 采用氫氧化鈉溶液（20 mmol/L）作為流動(dòng)相，離子交換柱為4 mm × 250 mm，等度洗脫時(shí)長20 min， 測定枸櫞酸離子的濃度范圍在0.1～2.0 μg/mL 之間，該濃度與對照品色譜峰呈線性關(guān)系，回收率為98.4%[4]。 如在3-羥基地氯雷他定和地氯雷他定的測定時(shí)， 實(shí)驗(yàn)證明應(yīng)用超高效液相色譜法進(jìn)行測定無任何誤差。 除此之外，超高效液相色譜法還被成功應(yīng)用于松乳劑、 曲安西隆乳劑等合成藥物，以及中間體、副產(chǎn)物的檢驗(yàn)分析中，提高了檢測分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.2.2 應(yīng)用于藥物代謝動(dòng)力學(xué) 目前， 在醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域中， 針對藥物代謝動(dòng)力學(xué)方面的研究主要集中在以下幾個(gè)方面：藥物在體內(nèi)的分布情況、藥物在人體內(nèi)的吸收、代謝和排泄。 研究內(nèi)容包括藥物分析測定、 藥物代謝和基質(zhì)分離、 代謝物定量分析等。 相關(guān)研究結(jié)果表明，超高效液相色譜法在藥物代謝產(chǎn)物檢測中的分離效率較高，不僅如此，超高效液相色譜法還能對樣品進(jìn)行定量分析。 利用超高效液相色譜法-MS/MS 系統(tǒng)可以測定人體血漿當(dāng)中的喹那普利和喹那普利拉， 前者的回收率高達(dá)85.8%，后者的回收率則可達(dá)到62.6%[5]。 超高效液相色譜法檢驗(yàn)分析過程的耗時(shí)較短， 大約在3 min 左右，便可測定出血清中氯氮平及去甲可待因的含量， 并且還能測定出人體血漿中洛匹那韋和利托那韋的濃度。 綜上，在藥物代謝動(dòng)力學(xué)的研究中， 應(yīng)用超高效液相色譜法能夠使檢測分析結(jié)果更加精確。

3.2.3 應(yīng)用于中藥成分分析 生物堿是大部分中藥最具活性的成分之一，而在中藥成分分析中，超高效液相色譜法的作用十分明顯。 通過超高效液相色譜法分析生物堿時(shí)， 因硅羥基在固定相表面的殘留， 會(huì)使化合物色譜峰呈現(xiàn)出拖尾或是展寬的情況， 所以需要在檢測分析中加入有機(jī)胺類或是離子對試劑等添加劑， 這樣能夠?qū)潭ㄏ啾砻鏆埩舻墓枇u基起到有效的屏蔽作用[3]。 但是添加劑的使用，導(dǎo)致殘余的硅羥基減少，影響了檢測分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。 而采用酸抑制劑，能夠達(dá)到有效分析的目的，可提高檢測靈敏度。

3.2.4 保健食品中非法添加化學(xué)藥品的檢測 隨著物質(zhì)生活不斷地提升，肥胖癥的人也越來越多，人們也熱衷于減肥。 生產(chǎn)商們?yōu)榱颂岣邷p肥效果，非法添加化學(xué)藥物，常見的有鹽酸西布曲明。 該種藥物會(huì)導(dǎo)致人體心血管系統(tǒng)、 消化系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)等發(fā)生不良反應(yīng)。 如果減肥保健食品中添加了這類物質(zhì)，人們長期服用就會(huì)對身體造成極大危害。藥品檢驗(yàn)人員通過超高效液相色譜建立鹽酸西布曲明的檢測方法， 對市場上的減肥保健食品進(jìn)行篩查， 發(fā)現(xiàn)了不少非法添加的現(xiàn)象， 結(jié)果快速準(zhǔn)確。 通過超高效液相色譜對減肥保健食品中的違禁成分進(jìn)行檢測， 為食品藥品行政監(jiān)督提供準(zhǔn)確可靠的信息，起到了凈化食品藥品市場，確保人們的食藥安全的作用。

3.3 超高效液相色譜法的優(yōu)勢 目前現(xiàn)代色譜技術(shù)中， 使用最為廣泛以及活躍的一種分析方式便是液相色譜，在生化、藥物、環(huán)境以及農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域中使用較為廣泛[6]。 近些年工業(yè)以及技術(shù)發(fā)展速度不斷加快，各領(lǐng)域?qū)σ合嗌V的要求不斷提升，要求在短時(shí)間內(nèi)完成對大量樣品的分析， 而部分生化樣品以及天然產(chǎn)物的分離難度大， 分析時(shí)間較長，便對液色相譜技術(shù)的分離能力提出更多要求。在該情況下，出現(xiàn)了超高效液相色譜法，屬于小顆粒填料液相色譜技術(shù)。 作為一種新型的高效液相色譜技術(shù)，該項(xiàng)技術(shù)的研發(fā)成果以及使用，提升液相色譜技術(shù)的分離能力，使其進(jìn)入一個(gè)新的高度[7]。當(dāng)前，臨床在使用超高效液相色譜法時(shí)，對樣片的吸收方便，處理操作簡便，檢測自動(dòng)化程度高，具有高靈敏度和分離效率，且檢測時(shí)間較短，因此在進(jìn)行藥物質(zhì)量、藥劑樣品、成分識別微量藥物檢驗(yàn)等情況下使用廣泛[8-9]。 超高效液相色譜法的主要原理是，使用超高壓技術(shù)，提高色譜柱性能，加快分離檢查速度，提升靈敏度，從而使分析樣品時(shí)間顯著減短[10-11]。 超高效液相色譜的主成分自身對照法包括兩種方式，一種加矯正因子，一種不加。 前者通過載入矯正因子來矯正雜質(zhì)的實(shí)測峰面積；如果沒有雜質(zhì)對照品就可以使用不加矯正因子的對照檢測方法。 總之利用主成分自身對照法能快速準(zhǔn)確地對藥物中微量雜質(zhì)進(jìn)行定量分析， 有廣泛的應(yīng)用前景[12]。

3.4 超高效液相色譜法在藥物檢驗(yàn)分析中的應(yīng)用效果 當(dāng)前我院在實(shí)施藥物檢驗(yàn)分析時(shí)，主要選擇使用超高效液相色譜法檢驗(yàn)， 相較高效液相色譜法，研究結(jié)果顯示，研究組分析時(shí)間、徹底分離率顯著較優(yōu)。 因此不難看出，研究組在采取超高效液相色譜法檢驗(yàn)后，臨床價(jià)值高，能夠加快藥物檢驗(yàn)速度，提高分離率。

對該結(jié)論進(jìn)行原因分析，主要因素如下：當(dāng)前臨床在實(shí)施檢驗(yàn)時(shí)， 超高效液相色譜法具有廣泛的使用價(jià)值。 其作為一種新型液相色譜技術(shù)，將液相色譜的應(yīng)用范圍進(jìn)行擴(kuò)大與延伸， 因其具備操作簡便、 分析速度快、 靈敏度和分離能力高的優(yōu)勢，擴(kuò)寬了現(xiàn)代色譜分析的應(yīng)用前景[9]。 超高效液相色譜法的樣本體積較小，對溶劑消耗的量較少，并且藥物成分分離速度快， 因此在進(jìn)行藥物體內(nèi)代謝產(chǎn)物、藥物合成、化學(xué)成分、定量定性分析等內(nèi)容方面使用較廣，具有重要意義[13]。 目前實(shí)施超高效液相色譜法， 可以完成較多復(fù)雜的成分減低與分離[10]。 雖在理論上分析，超高效液相色譜法和高效液相色譜法的原理基本一致，但相比而言，超高效液相色譜法提高了色譜峰容量、 分析通量以及靈敏度， 有效將高效液相色譜法的不足之處進(jìn)行彌補(bǔ)，因此在分離速度、分離效果以及靈敏度方面具有更加顯著的優(yōu)勢。 站在適應(yīng)環(huán)境角度分析，超高效液相色譜法具有更高的適應(yīng)力， 即使在高壓以及高速的狀態(tài)下，也能夠完成分離，且質(zhì)量較佳，站在靈敏度角度分析，超高效液相色譜法使用的為微粒， 可以有效減小顆粒度粒徑以及微粒色譜峰，有效縮短樣品檢測分離時(shí)間，對檢測的靈敏度進(jìn)行提高[14]。 站在速度角度分析，使用超高效液相色譜法，其選擇的為微粒，可以顯著縮短色譜柱長，在保障柱效不變的情況下，能夠提升藥物分析速度，從而縮短的分析時(shí)間，提高分析效率。

綜上所述， 實(shí)施藥物檢驗(yàn)分析采取超高效液相色譜法檢驗(yàn)臨床效果顯著。