胡曉璐，賴雨田，劉志強(qiáng)，柯江維

（1.江西省兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 南昌330006；2.贛州市婦幼保健院重癥醫(yī)學(xué)科，江西 贛州341000）

川崎病(Kawasaki disease，KD)是以全身血管炎為主要病變的一種急性發(fā)熱性疾病[1]，主要累及中小動(dòng)脈， 又稱皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合征，KD 為自身免疫性疾病，納入風(fēng)濕性疾病范疇[2]。 KD 是導(dǎo)致我國(guó)小兒后天性心臟病的主要病因[3]。 抗核抗體(antinuclear antibodies，ANA）檢測(cè)廣泛應(yīng)用于風(fēng)濕免疫疾病的臨床診斷。 本研究通過分析急性期KD患兒ANA 核型及ANAs 檢出情況， 評(píng)估ANA 及ANAs 在KD 患者疾病篩查中的意義及相關(guān)核型與特異性自身抗體檢出率。 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對(duì)象及方法

1.1 研究對(duì)象 選取2018 年6 月至2021 年6 月江西省兒童醫(yī)院住院的135 例急性期KD 患兒，入院前未接受丙球蛋白和激素治療，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)修定的2017 年版指南診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；排除標(biāo)準(zhǔn)：入組對(duì)象均排除合并其他自身免性疾病、心血管疾病、肝腎功能不全、嚴(yán)重貧血或凝血功能障礙及其它發(fā)熱性疾病。 所有樣本均在受試對(duì)象或監(jiān)護(hù)人知情同意條件下獲得。 選取60例健康體檢兒童作為對(duì)照組進(jìn)行分析。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法 利用間接免疫熒光法測(cè)定ANA，按照說明書嚴(yán)格操作， 熒光滴度≥1∶100 判為陽性。 免疫印跡法測(cè)定ANAs，以EUROBlotMaster 軟件判讀結(jié)果。ANAs 譜包括抗AMA- M2、抗AnuA、抗Histon、抗Jo -1、抗CENP、 抗PCNA、 抗dsDNA、抗PM-Scl、抗Rib P、抗Ro-52、抗SS-A、 抗SS-B、抗Scl-70、抗Sm、抗RNP/Sm 抗體。 所用試劑盒均由德國(guó)歐蒙生物技術(shù)有限公司提供。

1.2.2 標(biāo)本采集 空腹采集肝素促凝血3 mL。 肝素促凝血靜置30 min，3000 rpm，離心15 min，分離血清，-80℃冰箱保存。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 采用K-S 檢驗(yàn)和Levene 檢驗(yàn)分析計(jì)量資料正態(tài)性和方差齊性。 正態(tài)分布計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究對(duì)象比較 共納入KD 患兒135 例， 男女比例78∶57， 平均年齡 (2.61±0.93) 歲， 男性占57.78%，女性占42.22%。健康對(duì)照組60 例，男女比例35∶25，平均年齡(2.43±1.02)歲，男性占58.33%，女性占41.67%。 兩組性別構(gòu)成差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ χ2=0.053，P=0.942），年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.210，P=0.228）。 見表1。

表1 各組一般資料比較

2.2 兩組ANA 陽性率比較 通過對(duì)兩組入選患兒血清進(jìn)行間接免疫熒光法ANA 測(cè)定， 以熒光滴度≥1∶100 判為陽性。 KD 組ANA 滴度≥1∶100 有16 例，陽性率為11.85%。 NC 組ANA 滴度≥1∶100有1 例，陽性率為1.67%。 KD 組ANA 陽性率高于NC 組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ χ2=5.359，P=0.021）。見表2。

表2 各組ANA 陽性率比較

2.3 兩組ANA 核型分布 兩組ANA 核型進(jìn)行判讀，KD 組16 例陽性核型分布為：2 例核點(diǎn)型，占12.50%；12 例核顆粒型，占75.00%；1 例核仁型，占6.25%；1 例核均質(zhì)型，占6.25%。60 例NC 組中有1例陽性，為核顆粒型，陽性率為1.67%。 見表3。 熒光核型，見圖1。

圖1 KD 組HEP-2 抗核抗體熒光核型（×40）

表3 各組熒光法ANA 核型分布表

2.4 兩組ANA 檢測(cè)滴度對(duì)比 兩組ANA 滴度進(jìn)行比較，KD 組有16 例陽性，其中15 例ANA 滴度為1∶100， 占93.75%；1 例ANA 滴度為1∶320，占6.25%。NC 組有1 例陽性，ANA 滴度為1∶100。兩組ANA 滴度分布具有差異，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=2.323，P=0.020）。 見表4。

表4 各組熒光法ANA 檢測(cè)滴度對(duì)比

2.5 兩組ANAs 檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 對(duì)兩組ANAs 進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)NC 組全為陰性。 135 例KD 組中，有6例患者ANAs 陽性，陽性率為4.44%，其中3 例標(biāo)本為SSA 陽性，2 例標(biāo)本為Ro-52 陽性，1 例AM2為陽性。 但KD 組ENA 陽性率與NC 組無顯著性差異（ χ2=1.463，P=0.227）。見表5。免疫印跡法條帶見圖2。

圖2 KD 組ANAs 免疫印跡條帶

表5 各組熒光法ANA 檢測(cè)滴度對(duì)比

2.6 檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 兩種方法學(xué)對(duì)KD 檢測(cè)結(jié)果具有差異性，ANA 檢測(cè)陽性率高于ANAs， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ χ2=4.948，P=0.026），見表6。兩種方法檢測(cè)結(jié)果均為陽性的6 例ANA 核型與ANAs 檢測(cè)結(jié)果對(duì)比分析， 核顆粒型多為抗SS-A 抗體、抗Ro-52 抗體陽性。

表6 兩種方法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

3 討論

抗 核 抗 體( antinuclear antibodies，ANA)，又 稱抗細(xì)胞抗體( anti-cellular antibody，AC)[5]，是包括針對(duì)真核細(xì)胞內(nèi)各種抗原成分的自身抗體總稱，其對(duì)自身免疫病具有較高的診斷敏感性[6]。 人喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系Hep-2 ( Human epithelial type 2)細(xì)胞含有數(shù)百種天然抗原， 以Hep-2 細(xì)胞為底物的間接免疫熒光法(indirect immunofluorescence assay，IFA)可檢測(cè)患者血清中不同自身抗體，并呈現(xiàn)相應(yīng)的熒光核型[7]。 IFA 法檢測(cè)抗核抗體對(duì)自身免疫病篩查具有重要作用， 其檢測(cè)結(jié)果中包括抗體滴度和熒光核型[8]。 其中，抗體滴度與患者體內(nèi)ANA 含量呈一定相關(guān)性， 而熒光核型則與特定樣本中所含的特異性自身抗體有關(guān)， 有助于自身免疫病的診斷與鑒別診斷[9]。

抗核抗體的靶抗原為多種細(xì)胞核成分， 其中ANA 主用于對(duì)風(fēng)濕免疫病篩查，ANA 則主要針對(duì)于風(fēng)濕免疫病診斷和鑒別[10]。通過對(duì)兩組入選患兒血清進(jìn)行間接免疫熒光法ANA 測(cè)定，KD 組ANA滴度≥1∶100 有16 例陽性，陽性率為11.85%。 NC組ANA 滴 度≥1 ∶100 有1 例 陽 性， 陽 性 率 為1.67%。KD 組ANA 陽性率高于NC 組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ χ2=5.359，P=0.021）。 再對(duì)入選患兒血清進(jìn)行間接免疫熒光法ANA 核型進(jìn)行判讀，KD 組16 例陽性核型分布為：2 例核點(diǎn)型， 占12.50%；12例核顆粒型， 占75.00%；1 例核仁型， 占6.25%；1例核均質(zhì)型，占6.25%，說明KD 患兒核型以核顆粒型為主。 60 例NC 組中有1 例陽性， 為核顆粒型。 對(duì)各組ANA 滴度進(jìn)行比較， 發(fā)現(xiàn)16 例陽性KD 組中，15 例ANA 滴度為1∶100，占93.75%；1 例ANA 滴度為1∶320，占6.25%，兩組ANA 滴度分布具有差異， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （Z=2.323，P=0.020）。對(duì)各組ANAs 進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)NC 組全為陰性，KD 組中有6 例患者抗體陽性， 陽性率為4.44%，3 例標(biāo)本為SSA 陽性，2 例標(biāo)本為Ro-52 陽性，1 例AM2 為陽性，說明以SSA 和Ro-52 為主。兩種方法學(xué)對(duì)KD 檢測(cè)結(jié)果具有差異性，ANA 檢測(cè)陽性率高于ANAs， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （ χ2=4.948，P=0.026）。 說 明 對(duì) 于KD 診 斷，ANA 優(yōu) 于ANAs。 研究再對(duì)兩種方法檢測(cè)結(jié)果均為陽性的6例ANA 核型與ANAs 檢測(cè)結(jié)果分析， 發(fā)現(xiàn)核顆粒型多為抗SS-A 抗體、抗Ro-52 抗體陽性。

綜上所述， ANA 及ANAs 檢測(cè)在KD 診斷中具有一定的臨床診斷價(jià)值，且研究KD 患兒核型以核顆粒型為主，ANAs 以SSA 和Ro-52 為主， 臨床判讀時(shí)應(yīng)多注意， 但本研究ANAs 陽性抗體較低，標(biāo)本量少，應(yīng)多納入標(biāo)本，才能得到最后的結(jié)論。