董桂清，蔣滿貴，黃旭華，唐亮，陳小青，唐名艷，趙燁蕓，黃深惠*

（廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)技術(shù)推廣站，南寧市 530007；廣西壯族自治區(qū)蠶業(yè)科學(xué)研究院，南寧市 530007）

截至2021年，廣西蠶繭產(chǎn)量已連續(xù)17年居全國第一，廣西養(yǎng)蠶規(guī)模每年仍在不斷擴(kuò)大的同時，也出現(xiàn)了不少養(yǎng)蠶問題。目前廣西養(yǎng)蠶環(huán)境變得越來越復(fù)雜，近幾年家蠶農(nóng)藥中毒已經(jīng)上升為廣西家蠶主要的病害之一，周邊經(jīng)濟(jì)作物大量使用農(nóng)藥引起的家蠶中毒現(xiàn)象逐年加劇，造成重大經(jīng)濟(jì)損失，桑園不合理使用農(nóng)藥引起家蠶農(nóng)藥中毒時有發(fā)生。另外，桑園中使用了含有農(nóng)藥殘留的肥料也會引起家蠶出現(xiàn)大量中毒的現(xiàn)象［1］。

2020 年上半年，廣西貴港市覃塘區(qū)黃練鎮(zhèn)出現(xiàn)了連續(xù)3 批蠶中毒的現(xiàn)象，大量蠶陸續(xù)出現(xiàn)死亡，有少量薄皮繭或死籠繭，涉及蠶種1 000 張左右，造成蠶農(nóng)重大經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重挫傷了蠶農(nóng)的養(yǎng)蠶積極性。本研究團(tuán)隊(duì)通過實(shí)地走訪、農(nóng)藥殘留檢測和生物試驗(yàn)，通過多角度綜合分析，追溯大批量蠶死亡原因，旨在為生產(chǎn)上防止出現(xiàn)家蠶中毒現(xiàn)象提供科學(xué)參考，促進(jìn)蠶業(yè)健康高質(zhì)量發(fā)展。

1 家蠶中毒情況介紹及調(diào)研

通過到農(nóng)戶家實(shí)地訪問，獲知周圍有3個村同時出現(xiàn)了大批量家蠶死亡的現(xiàn)象。據(jù)統(tǒng)計(jì)，其中一個村出現(xiàn)的蠶死亡現(xiàn)象最嚴(yán)重，涉及80%以上的養(yǎng)蠶戶，另外兩個村則有30%左右農(nóng)戶的蠶出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，其他農(nóng)戶的蠶未出現(xiàn)死亡，且能正常結(jié)繭。從蠶中毒嚴(yán)重的農(nóng)戶了解到，從小蠶共育室拿回3 齡小蠶，1 d喂了3次之后，到第二天就出現(xiàn)蠶拒食桑葉的情況，蠶的頭胸部變大，尾部縮小向后背翹起，有少量吐液的現(xiàn)象，之后逐漸出現(xiàn)死亡，少量存活的蠶最后只結(jié)薄皮繭或出現(xiàn)死籠繭。根據(jù)農(nóng)戶的描述，蠶的中毒癥狀與煙堿類農(nóng)藥噻蟲嗪引起蠶中毒的癥狀相似［2］，因此初步推測為噻蟲嗪導(dǎo)致的蠶中毒現(xiàn)象。

經(jīng)了解，這3 個村飼養(yǎng)的蠶品種均為兩廣二號，蠶種為同一家蠶種場生產(chǎn)，且從同一家小蠶共育室購買小蠶，因此可以排除蠶種和小蠶的問題。周邊沒有發(fā)現(xiàn)工廠，且3 個村鄰近基本處于同一氣候環(huán)境，因此可以排除環(huán)境氣候污染問題。

通過咨詢，進(jìn)一步了解到，這3 個村大部分養(yǎng)蠶戶使用了同一種桑園肥料，該肥料為復(fù)混肥，用于桑樹根基施肥。少量不使用這款肥料的農(nóng)戶的蠶則可以正常結(jié)繭，有農(nóng)戶為出現(xiàn)中毒的蠶更換了不施用該肥料的桑葉后蠶兒可以恢復(fù)正常。因此初步推測為桑園使用的肥料含有某種成分污染了桑葉引起的蠶中毒。經(jīng)了解，這些村屯多年使用同一個公司生產(chǎn)的肥料，公司有關(guān)人員表示，使用相同的肥料，有些農(nóng)戶蠶出現(xiàn)中毒，但有些農(nóng)戶的蠶仍能正常結(jié)繭，該情況增加了溯源的復(fù)雜性。調(diào)查團(tuán)隊(duì)到養(yǎng)蠶戶查看使用過的肥料包裝，確實(shí)為同一個廠家，仔細(xì)查看后發(fā)現(xiàn)使用的肥料卻不是同一個批次，分別為2019年1 月8 日、2019 年11 月8 日和2020 年1 月8 日的3個批次，有些桑園只用其中一個批次的肥料，有的則兩個批次肥料混用。

2 中毒原因調(diào)查檢測

對發(fā)生蠶中毒和未中毒農(nóng)戶的桑園桑葉、桑園土壤、使用肥料進(jìn)行采樣，送到專業(yè)檢測機(jī)構(gòu)使用高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測。檢測結(jié)果（表1）顯示，桑園使用的肥料均檢測出噻蟲嗪成分，肥料1（2020 年1 月18 生產(chǎn)）的噻蟲嗪含量高達(dá)16.5 mg/kg，肥料2和肥料3噻蟲嗪含量較低，分別為：0.45 mg/kg、0.62 mg/kg；桑園土壤中均檢測出含噻蟲嗪成分，農(nóng)戶1土壤噻蟲嗪含量達(dá)0.14 mg/kg，農(nóng)戶2和農(nóng)戶3土壤噻蟲嗪含量較低，分別為：0.002 mg/kg、0.008 mg/kg；桑葉1 中檢測出含噻蟲嗪成分，含量為0.049 mg/kg，桑葉2和桑葉3中未檢測出含噻蟲嗪成分。根據(jù)采樣數(shù)據(jù)來源分析，農(nóng)戶1的桑園使用了肥料1，肥料1中噻蟲嗪成分極高，因此對應(yīng)桑園土壤和桑葉的噻蟲嗪含量也高，根據(jù)調(diào)查，農(nóng)戶1 的3 批家蠶基本全部死亡；農(nóng)戶2 和農(nóng)戶3 使用的肥料2 與肥料3中的噻蟲嗪成分低，土壤中的噻蟲嗪含量相對較低，其桑葉中未檢出含噻蟲嗪成分，農(nóng)戶2 和農(nóng)戶3的蠶可正常結(jié)繭。有研究表明，噻蟲嗪是一種內(nèi)吸性極強(qiáng)的新煙堿類農(nóng)藥，在土壤中的的噻蟲嗪可以通過桑樹根部快速傳導(dǎo)到桑葉［3］。因此，進(jìn)一步推測桑園使用了含有噻蟲嗪成分的肥料引起此次家蠶農(nóng)藥中毒。

表1 樣品農(nóng)藥殘留檢測結(jié)果

3 家蠶中毒現(xiàn)象的驗(yàn)證

3.1 直接添毒試驗(yàn)

噻蟲嗪（山東省聯(lián)合農(nóng)藥工業(yè)有限公司，有效成分21%）試驗(yàn)設(shè)置6 個試驗(yàn)濃度梯度的藥液，濃度分別 為：0.5000 mg/L、0.2500 mg/L、0.12500 mg/L、0.062 5 mg/L、0.0312 5 mg/L、0.015625 mg/L。分別將不同濃度的藥液100 mL 均勻噴灑于1 kg 的桑葉，自然晾干，桑葉中的濃度經(jīng)轉(zhuǎn)化計(jì)算為：0.05 mg/kg、0.025 mg/kg、0.0125 mg/kg、0.006 25 mg/kg、0.003 12 mg/kg、0.001 56 mg/kg。將不同濃度的有毒桑葉添食于3 齡起蠶，每個濃度組設(shè)3 個重復(fù)，每個重復(fù)30 頭蠶，連續(xù)添食24 h，后改添食無毒桑葉，設(shè)置空白對照。在96 h 內(nèi)，觀察家蠶幼蟲的中毒癥狀并記錄供試家蠶幼蟲的死亡情況。統(tǒng)計(jì)家蠶幼蟲死亡率、校正死亡率，用SPSS軟件分析農(nóng)藥對家蠶的LC50。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，添食了噻蟲嗪的家蠶在濃度大于0.001 56 mg/kg時就表現(xiàn)出急性中毒癥狀，主要表現(xiàn)為頭胸部變大、尾部向后翹起、拒食桑葉等癥狀，最后逐漸死亡，中毒癥狀與生產(chǎn)上出現(xiàn)的家蠶中毒癥狀基本一致。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，家蠶農(nóng)藥中毒的線性方程為：y=2.071 9x+0.068 4，r=0.952 5，LC50=0.012 87 mg/kg，95%置信區(qū)間為：0.010 57～0.015 78 mg/kg。根據(jù)農(nóng)藥對家蠶的毒性等級劃分，噻蟲嗪對家蠶屬于劇毒級別［4］。由采樣檢測結(jié)果可知，農(nóng)戶1的桑葉中噻蟲嗪含量為0.049 mg/kg，高于噻蟲嗪對家蠶的LC50，進(jìn)一步驗(yàn)證了生產(chǎn)中出現(xiàn)的蠶中毒癥狀為噻蟲嗪引起。

3.2 有毒肥料的桑樹施肥試驗(yàn)

肥料分為3 個批次，分別為：肥料1，2020 年1 月18 日生產(chǎn)，噻蟲嗪含量檢測結(jié)果為16.5 mg/kg；肥料2，2019 年1 月18 日生產(chǎn)，噻蟲嗪含量檢測結(jié)果為0.62 mg/kg；肥料3，2019 年11 月8 日生產(chǎn)，噻蟲嗪含量檢測結(jié)果為0.45 mg/kg。按照農(nóng)戶使用肥料量為150 kg/667 m2的算法，每667 m2桑園大約有5 000株，即盆栽中施肥量為30 g/株。將肥料施于盆栽桑樹中，分別于施肥后20 d、40 d、60 d、80 d、100 d 采摘桑葉飼喂3 齡起蠶，蠶品種為兩廣二號，每組設(shè)3 個重復(fù)，每個重復(fù)30 頭蠶，每天添食盆栽桑葉，以不添加肥料的盆栽桑葉飼喂家蠶作為空白對照，期間調(diào)查蠶中毒情況。

盆栽試驗(yàn)結(jié)果如表2所示，肥料1施肥于盆栽中的桑樹，經(jīng)過20 d、40 d后采樣，添食于3齡起蠶，可導(dǎo)致家蠶全部死亡，經(jīng)過60 d后采樣，有9頭家蠶出現(xiàn)死亡，經(jīng)過80 d后采樣，仍有5頭蠶出現(xiàn)死亡，100 d后采樣，家蠶無中毒癥狀。肥料2和肥料3施肥于盆栽桑樹，采摘桑葉添食于家蠶，食桑正常，無中毒癥狀。試驗(yàn)證明，噻蟲嗪可經(jīng)桑樹根部吸收，傳導(dǎo)到桑葉，造成家蠶農(nóng)藥中毒發(fā)生，并可長期在桑樹中殘留。

表2 盆栽施肥后采樣添食蠶中毒情況

由于噻蟲嗪具有很強(qiáng)的內(nèi)吸性，肥料1中含噻蟲嗪成分高達(dá)16.5 mg/kg，施肥于桑樹，桑樹根部吸收噻蟲嗪并快速傳導(dǎo)到桑葉部位造成桑葉污染，引起家蠶中毒現(xiàn)象，進(jìn)一步證實(shí)了生產(chǎn)中出現(xiàn)的家蠶中毒現(xiàn)象為桑園施用肥料1 殘留高濃度噻蟲嗪成分污染了桑葉導(dǎo)致家蠶農(nóng)藥中毒。

4 結(jié)論與討論

結(jié)合實(shí)地走訪調(diào)研、農(nóng)藥殘留檢測分析、家蠶生物試驗(yàn)，最終確定本次家蠶農(nóng)藥中毒事件主要原因?yàn)樯@施用的肥料殘留有高濃度噻蟲嗪，由于噻蟲嗪有很強(qiáng)的內(nèi)吸性，經(jīng)過吸收傳導(dǎo)到桑葉，家蠶食下含有噻蟲嗪殘留的桑葉，導(dǎo)致家蠶農(nóng)藥中毒發(fā)生。經(jīng)調(diào)查了解到桑園中施用的肥料原料之一為甘蔗濾泥，而在甘蔗種植過程中常常使用含有噻蟲嗪的藥肥防控病蟲害，使得甘蔗中往往殘留有高濃度的噻蟲嗪成分［5］，甘蔗經(jīng)過制糖后形成的濾泥仍然殘留高濃度的噻蟲嗪，當(dāng)以甘蔗濾泥作為原料制成肥料施于桑園時，桑樹吸收其中的噻蟲嗪成分污染桑葉造成家蠶農(nóng)藥中毒。

在本次家蠶農(nóng)藥中毒事件中有些養(yǎng)蠶戶的蠶中毒輕微，死蠶數(shù)量相對較少，有部分蠶能正常結(jié)繭，有些養(yǎng)蠶戶的蠶則中毒嚴(yán)重，基本全部死亡，顆粒無收。經(jīng)了解，農(nóng)戶施用的肥料雖然為同一廠家，但農(nóng)戶使用肥料的批次不一樣，肥料1的殘留有高濃度噻蟲嗪，而肥料2 和肥料3 殘留的噻蟲嗪含量較低，有些農(nóng)戶只使用了肥料1，則家蠶中毒最為嚴(yán)重，有些農(nóng)戶把肥料1 與肥料2 或肥料3 混合使用，則中毒情況會相對輕微，如果只用了肥料2或肥料3，則沒有出現(xiàn)家蠶中毒現(xiàn)象。

近年來，廣西很多蠶區(qū)均發(fā)生過因桑園施用肥料含煙堿類農(nóng)藥成分導(dǎo)致大量蠶出現(xiàn)農(nóng)藥中毒事件，造成重大經(jīng)濟(jì)損失。由于煙堿類農(nóng)藥具有很強(qiáng)的內(nèi)吸性，在桑葉中的殘留期可長達(dá)60～100 d，在土壤中殘留期則更長［6］，一旦桑樹受到污染，發(fā)生家蠶農(nóng)藥中毒，應(yīng)立即更換新鮮無毒桑葉，可減少經(jīng)濟(jì)損失，并對桑樹進(jìn)行剪伐，在下次用葉前需進(jìn)行小量喂葉試驗(yàn)，葉子測試安全后才能大規(guī)模采葉飼養(yǎng)，避免農(nóng)藥中毒事件再次發(fā)生。