趙若丹，都昌林，王 瑩，繆菊連，陳旭冰

(大理大學(xué) 藥學(xué)院，云南 大理 671000)

紅花龍膽GentianarhodanthaFranch.ex Hemsl為龍膽科龍膽屬多年生草本植物，又名小龍膽草、青魚膽草、雪里梅、鳳凰花、星秀花、血龍膽、九月花等，主要分布于四川、貴州、云南等地[1]。其味苦，性寒，具有清熱利濕、涼血解毒的功效，主治肺熱咳嗽、癆嗽痰血、黃疸、痢疾、便血、小便不利、產(chǎn)褥熱、小兒驚風(fēng)、疳積、瘡瘍腫毒、燒燙傷、蛇咬傷等[1]。紅花龍膽主要含(裂)環(huán)烯醚萜類、三萜類、黃酮類等化合物[2]，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，具有抗氧化、抗結(jié)核桿菌、抑制乙酰膽堿酯酶的活性[3-5]。可能由于其在民間使用比較廣泛的緣故，紅花龍膽為2015年版《中國(guó)藥典》新增收錄的品種。2015年及2020年版《中國(guó)藥典》中均規(guī)定以其的干燥全草入藥，但在《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》《貴州民間藥物》和《湖北植物志》等書中記載以其根或全草入藥。紅花龍膽在不同書籍中規(guī)定的藥用部位存在差異，到底紅花龍膽地上、地下部分化學(xué)成分有何不同，本文將采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)從其中揮發(fā)性成分來探討這一問題。

1 材料與儀器

1.1 材料

紅花龍膽購(gòu)自云南省文山州丘北縣雙龍營(yíng)鎮(zhèn)，經(jīng)我院生藥學(xué)教研室張德全教授鑒定為龍膽科龍膽屬植物紅花龍膽(GentianarhodanthaFranch.ex Hemsl)的帶根全草。乙醚、無水碳酸鈉均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器

7890A/5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)Agilent Technologies公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品的制備

將紅花龍膽藥材干品的地上部分和地下部分用刀切成小段，各稱取200 g，裝入1000 mL圓底燒瓶中，加蒸餾水600 mL后，按2020年版《中國(guó)藥典》(第一部)附錄XD揮發(fā)油測(cè)定法提取揮發(fā)油，連續(xù)回流5.5 h，至油量不再增加為止，停止加熱，冷卻，收集揮發(fā)油，各得到黃色揮發(fā)油約2 mL，加入少許無水碳酸鈉對(duì)揮發(fā)油進(jìn)行干燥。測(cè)定前分別加入3 mL乙醚于揮發(fā)油中，用微孔濾膜過濾，備用。

2.2 GC-MS分析條件

色譜柱：Agilent氣相色譜柱(Agilent 1901S-433，30 m× 250 μm × 0.25 μm)；程序升溫：起始溫度為50 ℃，保持3 min，以1 ℃/min升至100 ℃，保持 5 min，再以5 ℃/min升至180 ℃，保持2 min。質(zhì)譜條件：載氣為高純氦氣，流速：1.0 mL/min；分流比：5∶1；進(jìn)樣量3.0 μL。EI 離子源，離子源溫度230 ℃，電離能量70 eV；掃描質(zhì)量范圍：50～550 amu。采用 NIST11.L 標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫進(jìn)行檢索。

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在上述實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)樣分析，得到紅花龍膽地上部分揮發(fā)油的總離子流色譜和紅花龍膽地下部分揮發(fā)油的總離子流色譜，如圖1所示。對(duì)總離子流色譜圖中的各峰進(jìn)行質(zhì)譜掃描后得到質(zhì)譜圖，通過與標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫相對(duì)照及人工譜圖解析，分別確定揮發(fā)油中的各個(gè)化合物，分析鑒定結(jié)果見表1。

注：D1.紅花龍膽地上部分；D2.紅花龍膽地下部分。

表1 紅花龍膽揮發(fā)油的化學(xué)成分

續(xù)表1

從紅花龍膽地上部分揮發(fā)油中鑒定出86個(gè)化合物，主要包括醇類28個(gè)(32.6%)、醛類22個(gè)(25.6%)、酮類12個(gè)(14.0%)、烯烴類8個(gè)(9.3%)、酯類6個(gè)(7.0%)和烷烴類4個(gè)(4.7%)等。從紅花龍膽地下部分揮發(fā)油中鑒定了58個(gè)化合物，主要包括醇類19個(gè)(32.8%)、醛類13個(gè)(22.4%)、酮類10個(gè)(17.2%)、酯類5個(gè)(8.6%)、烯烴類4個(gè)(6.9%)和烷烴類2個(gè)(3.4%)等。從檢測(cè)的揮發(fā)性成分?jǐn)?shù)量看，地上部分大于地下部分；對(duì)紅花龍膽地上及地下部分6類成分進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)地上部分化合物種類均多于地下部分，除醛類和酮類的百分含量有差異外，其余幾類化合物地上和地下部分百分含量基本相似。揮發(fā)油化學(xué)成分比較結(jié)果見圖2。

圖2 紅花龍膽地上、地下部分揮發(fā)油的化學(xué)成分比較

紅花龍膽地上部分所鑒定出的揮發(fā)油中，百分含量在4%以上的揮發(fā)性成分有赤蘚糖醇(10.95%)，反-氧化芳樟醇(5.48%)，芳樟醇(5.45%)，鄰羥基苯甲酸甲酯(5.15%)，安息香醛(4.99%)，百秋李醇(4.61%)和壬醛(4.20%)共7種，總相對(duì)含量為40.83%；百分含量在1%～4%的揮發(fā)性成分有5-甲基-1-庚醇(3.05%)，糠醛(1.18%)，青葉醛(1.26%)，1-己醇(1.40%)等共19種，總相對(duì)含量達(dá)31.78%。紅花龍膽地下部分所鑒定出的揮發(fā)油中，百分含量在4%以上的揮發(fā)性成分有鄰羥基苯甲酸甲酯(15.95)，(S)-2，3-二羥基丙醛(14.91%)，百秋李醇(6.82%)和安息香醛(5.22%)共4種，其總相對(duì)含量為42.9%；百分含量在1%-4%的揮發(fā)性成分有糠醛(1.48%)，1-己醇(1.10%)，(Z)-2-庚烯醛(2.09%)，3-乙烯基吡啶(1.34%)等共20種，總相對(duì)含量為36.02%。

通過比較發(fā)現(xiàn)，百分含量在4%以上的化合物中，地上部分特有化學(xué)成分為赤蘚糖醇、反-氧化芳樟醇、芳樟醇和壬醛，地下部分特有化學(xué)成分為(S)-2，3-二羥基丙醛；共有化學(xué)成分鄰羥基苯甲酸甲酯、安息香醛和百秋李醇共3種。百分含量在1%～4%的化合物中，地上部分特有化學(xué)成分苯乙酮、芳樟醇及反氧化芳樟醇等10種，地下部分特有化學(xué)成分青葉醛、苯乙醛、順氧化芳樟醇等11種，地上及地下部分共有化學(xué)成分有糠醛、青葉醛、蘑菇醇等9種。由結(jié)果可看出，紅花龍膽地上、地下部分揮發(fā)性成分在組成和占比情況存在一定差異。從所檢測(cè)出的揮發(fā)性成分?jǐn)?shù)量來看，地上部分鑒定出86個(gè)化合物，地下部分鑒定出58個(gè)化合物，地上部分大于地下部分；從不同類型揮發(fā)油占比情況來看，除醛類和酮類的含量有差異外，醇類、烯烴類、脂類和烷烴類化學(xué)成分地上、地下部分基本相似。從百分含量在4%以上的揮發(fā)性成分來看，地上及地下部分均有特征性化學(xué)成分，含3種共有化學(xué)成分，且地上部分特征性化學(xué)成分多于地下部分；從百分含量在1%～4%的揮發(fā)性成分來看，含9種共有化學(xué)成分，其余成分存在一定差異，地下部分總相對(duì)含量高于地上部分。

3 討論

通過比較紅花龍膽地上及地下的揮發(fā)性成分，發(fā)現(xiàn)在化合物的數(shù)量、類型和主要成分上都存在一定差異，與地下部分相比，地上部分含有更多的化學(xué)成分。地上及地下部分共有含量較高的化學(xué)成分是：鄰羥基苯甲酸甲酯、百秋李醇和安息香醛。地上部分含量較高的特征性化學(xué)成分是赤蘚糖醇、反-氧化芳樟醇、芳樟醇。其中反-氧化芳樟醇、芳樟醇、鄰羥基苯甲酸甲酯和安息香醛都是常用的香精香料[7-9]；共有化學(xué)成分百秋李醇是藿膽滴丸、馬香苓口服液等中藥制劑的主要成分，具有抑菌、抗病毒及胃腸道保護(hù)等功能[10-12]；地上部分含量較高的特征性成分赤蘚糖醇是糖尿病、葡萄糖不耐受病等特殊人群的功能食品[13]；芳樟醇具有抗氧化及抑菌效果[14-15]。本研究通過GC-MS分析紅花龍膽地上及地下部分，發(fā)現(xiàn)地上部分含有更多的化學(xué)成分，且其特征性化學(xué)成分可能與其治療痢疾、抗氧化、抗病毒和抑菌等藥理活性密切相關(guān)。本文僅從揮發(fā)性成分的角度探討紅花龍膽的地上及地下部分，其相關(guān)藥效學(xué)研究還有待進(jìn)一步探討。