盧鐘琦，付強，金鐵峰，張美花（延邊大學.腫瘤研究中心；b.附屬醫(yī)院超聲醫(yī)學科，吉林 延吉 133000）

乳腺癌是全球最常見的惡性腫瘤，也是女性癌癥死亡的首要原因。據(jù)統(tǒng)計，2020 年乳腺癌占女性所患腫瘤的24.5%，病死人數(shù)占15.5%，在世界大多數(shù)國家的發(fā)病率和病死率均排名第一[1]。2018 年IMpassion130研究在歐洲腫瘤內(nèi)科學會上公布結(jié)果，乳腺癌正式跨入免疫治療時代[2]。干擾素基因刺激因子（stimulator of interferon genes，STING）信號通路是近年來發(fā)現(xiàn)的固有免疫系統(tǒng)的熱點通路，環(huán)狀GMP-AMP 合成酶（cGAS）識別并與胞質(zhì)DNA 結(jié)合形成2′3′-cGAMP[3]，其結(jié)合并激活位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的STING，而后易位至高爾基體，分別通過TBK1 和IKK 募集IRF3 和NF-κB、IRF3 和NF-κB 驅(qū)動干擾素和細胞因子的表達，從而抑制腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[4-5]。VASIYANI 等[6]研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者STING 和雌激素受體（estrogen receptor，ER）之間的基因表達呈負相關(guān)，表明ER 表達的乳腺癌細胞STING 表達較低。STING 表達與乳腺癌預后相關(guān)，可能參與乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展[7]。Citespace 軟件通過可視化知識圖形來研究某一領(lǐng)域的發(fā)展趨勢、特點和分布情況，為深層挖掘該領(lǐng)域研究熱點及發(fā)展前沿提供參考[8-9]。本文基于文獻計量學方法，對Web of Science 數(shù)據(jù)庫中STING信號通路在乳腺癌進展中的相關(guān)研究文獻數(shù)據(jù)進行全面可視化分析，探討STING 信號通路對乳腺癌進展影響的研究現(xiàn)狀、熱點及發(fā)展趨勢，旨在為預防及治療乳腺癌提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 資料來源

從Web of Science 數(shù)據(jù)庫中查找主題詞為“STING”和“breast cancer”的期刊文章，時間確定為2009—2021年，共檢索到122 篇Web of Science 核心合集文獻[10]。

1.2 研究方法

將122 篇Web of Science 核心合集文獻，從Web of Science 數(shù)據(jù)庫上以“純文本”格式導出，導出文獻記錄中的“全記錄與引用的參考文獻”作為待處理的源數(shù)據(jù)[11]。使用Citespace軟件5.8.R1版本，以核心合集文獻中的“reference”、“key words”作為節(jié)點進行共現(xiàn)分析、聚類分析、繪制Timezone 圖譜，設(shè)置時間跨度為2009—2021年，“time slice”設(shè)置為1年，主題詞來源選擇“title”、“abstract”、“author keywords（DE）”、“keywords plus（ID）”，圖譜修剪方式選擇“pathfinder”和“pruning sliced networks”，運行軟件進行分析[12]。

圖譜中節(jié)點分別代表關(guān)鍵詞和核心引文，節(jié)點的圓圈大小代表頻次，圓圈直徑越大代表該節(jié)點頻次越高，圓圈的色階代表內(nèi)容出現(xiàn)的不同年份，圓圈寬度代表不同的年份相關(guān)內(nèi)容出現(xiàn)的頻次，節(jié)點間連線代表共現(xiàn)頻次，線條越粗代表共現(xiàn)頻次越高，關(guān)系越密切，節(jié)點和連線的色階代表相應文獻的發(fā)表年份[13]。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌進展中STING 信號通路作用的年發(fā)文量分析

對Web of Science數(shù)據(jù)庫中納入的122篇核心合集文獻按發(fā)表時間進行統(tǒng)計（圖1），從時間分布上看，2009—2016年期間，乳腺癌進展中STING信號通路作用的相關(guān)研究較少，年均發(fā)文1.87篇；自2016年后，發(fā)文量迅速增加，2017—2021 年期間，年均發(fā)文量增加至21.40篇，近5 年發(fā)文量占比高達87.70%，2021 年達到最高值（38 篇）。這些數(shù)據(jù)說明，在乳腺癌治療中STING 信號通路已經(jīng)受到人們的廣泛關(guān)注，成為近年來研究的熱點。

2.2 乳腺癌進展中STING 信號通路作用的發(fā)文國家/地區(qū)和機構(gòu)分析

2.2.1 國家/地區(qū)分析 利用Citespace 軟件對發(fā)文國家/地區(qū)及其合作網(wǎng)絡進行統(tǒng)計分析，繪制共現(xiàn)圖譜，以反映該領(lǐng)域的主要國家/地區(qū)及其合作關(guān)系（圖2A），圖譜密度為0.11，節(jié)點數(shù)為34個，連接線為62條，時間間隔為1年[14]。共122篇文章來自34個國家。在圖2A 中可以看到許多國家/地區(qū)之間的廣泛合作，其中最顯著的是美國和全球其他國家的合作最多。合作頻次分布如圖2B，排名前3 位的國家分別為美國（n=60）、中國（n=20）和法國（n=14）。說明全球范圍內(nèi)，參與STING 信號通路與乳腺癌相關(guān)研究的國家不多，且各國發(fā)文量都相對較少，提示此領(lǐng)域有很大的研究空間待進一步探索。

2.2.2 機構(gòu)分析 圖3 顯示了各國科研機構(gòu)的合作網(wǎng)絡，從圖中可以看出，這些文章由153家機構(gòu)投稿。參與全球合作次數(shù)最多的10所機構(gòu)中有9所機構(gòu)來自美國，另外一所來自英國，排名前三的機構(gòu)分別是丹娜法伯癌癥研究院（Dana-Farber Cancer Institute）、哈佛醫(yī)學院（Harvard Medical School）、紀念斯隆凱特琳癌癥中心（Memorial Sloan Kettering Cancer Center）。前10 家機構(gòu)共合作投稿45 次。中國參與此方面研究的主要機構(gòu)有中國科學院、復旦大學、香港科技大學和中國醫(yī)科大學醫(yī)院等，但與國外其他機構(gòu)合作次數(shù)較少，總體發(fā)文量不多，間接提示中國學者在這方面還需深入研究、合作共享。

2.3 乳腺癌進展中STING信號通路作用的研究核心引文分析

采用共被引網(wǎng)絡確定STING信號通路對乳腺癌影響的關(guān)鍵文獻。網(wǎng)絡節(jié)點設(shè)定為參考文獻（引文），繪制文獻共被引網(wǎng)絡（圖4），圖譜密度為0.018 2，節(jié)點數(shù)為252個，連接線為576條，表明各引文參考文獻較分散。表1為引用頻次前5篇文獻名稱，其中HARDING 等[15]于2017 年發(fā)表的文章為目前被引用頻次最高的研究性論文，其研究結(jié)果表明STING是一種胞質(zhì)受體，感知外源性和內(nèi)源性胞質(zhì)環(huán)二核苷酸，激活TBK1/IRF3、NF-kB和STAT6信號通路，誘導Ⅰ型干擾素和促炎細胞因子反應?？鼓[瘤活性依賴于STING，并與DC和腫瘤抗原特異性CD8+T細胞激活增加相關(guān)[16]。在缺乏STING時，CD8+T 細胞對腫瘤的自發(fā)啟動是有缺陷的[17]。腫瘤內(nèi)源性STING通路激活可誘導自發(fā)的T細胞啟動，產(chǎn)生強有力的系統(tǒng)免疫反應[18]。STING 表達的誘導發(fā)生在微核細胞中，微核是免疫刺激DNA的一個重要來源，滯后染色體形成的微核可激活STING信號通路，激活劑cGAS識別微核可作為一種細胞內(nèi)在的免疫監(jiān)測機制，檢測一系列的腫瘤誘導過程[19]。

表1 乳腺癌進展中STING信號通路作用的研究核心引文前5篇

2.4 關(guān)鍵詞可視化分析

2.4.1 關(guān)鍵詞共現(xiàn)分析 關(guān)鍵詞是對文獻研究主題和核心內(nèi)容的高度概括，基于關(guān)鍵詞共現(xiàn)分析，可以了解某一領(lǐng)域不同研究熱點的分布及發(fā)展情況。為了進一步分析STING信號通路對乳腺癌進展影響的研究熱點，構(gòu)建關(guān)鍵詞共現(xiàn)網(wǎng)絡（圖5），圖譜密度為0.047 1，節(jié)點數(shù)為177個，連接線為733條，熱點關(guān)鍵詞有乳腺癌、cGAMP、抗腫瘤免疫治療、DC、信號通路和cGAS等，顯示出STING 信號通路在乳腺癌免疫治療中已成為近年研究的熱點，腫瘤免疫治療與乳腺癌治療之間的聯(lián)系越來越多。研究[20]顯示，cGAS 上調(diào)可增強乳腺癌細胞的增殖和遷移能力，誘導乳腺癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。

2.4.2 關(guān)鍵詞聚類分析 聚類分析是對具有多項指標的數(shù)據(jù)進行分類的一種統(tǒng)計方法，根據(jù)指標間的相似程度進行類別劃分，實現(xiàn)指標分類[21]。以乳腺癌進展中STING信號通路的作用為主要研究方向，在關(guān)鍵詞共現(xiàn)分析的基礎(chǔ)上進行聚類，得到關(guān)鍵詞聚類圖譜（圖6），共形成9種聚類，圖譜密度為0.022 7，節(jié)點數(shù)為241個，連接線為657條，Q 值為0.774 1，平均輪廓系數(shù)（silhouette coefficient）值為0.923 9（范圍為0～1），表明該聚類結(jié)果能反映真實情況、同質(zhì)性高[22]。由圖6可以清晰地看出，乳腺癌進展中STING信號通路作用的研究方向主要集中在9個方面：依頻次由高到低分別為巨噬細胞、小細胞肺癌、微環(huán)境、乳腺癌、炎癥、切除組織、腫瘤細胞、納米粒和癌癥等。

2.4.3 研究熱點及發(fā)展趨勢分析 為探討乳腺癌進展中STING 信號通路的作用為主要研究主題的變化，以引文發(fā)表年份為X軸，結(jié)合突現(xiàn)詞對該領(lǐng)域研究的文獻前沿進行可視化分析，構(gòu)建Timezone 圖譜[23]（圖7），圖譜密度為0.022 7，節(jié)點數(shù)為241個，連接線為657條，可以看出cGAS-STING、STING 信號通路、TNBC等關(guān)鍵詞的研究依然是2021年的熱點，腫瘤微環(huán)境、CD8+T 細胞、干擾素反應、STING、cGAS、抗腫瘤免疫反應、適應性免疫反應等是近5年出現(xiàn)的研究熱點關(guān)鍵詞。

表2 近5年乳腺癌進展中STING信號通路作用的研究關(guān)鍵詞

突現(xiàn)詞是指通過對詞頻的考察，探測特定時間 內(nèi)詞頻變化率較高的關(guān)鍵詞，其在某種程度上可以預測該領(lǐng)域的研究熱點及未來趨勢[24]。突現(xiàn)詞“microenvironment”強度為2.09，熱點持續(xù)約2 年；“resistance”強度為2.15，熱點持續(xù)約3 年；“delivery”強度為1.96，熱點持續(xù)3 年；“STING”為2019 年開始出現(xiàn)的最新突現(xiàn)詞，強度為3.32，可見此領(lǐng)域熱度較高，研究方向比較新穎，具有良好的發(fā)展前景。此領(lǐng)域的發(fā)展趨勢主要聚焦在STING對乳腺癌進展及治療的影響。在腫瘤內(nèi)STING激動劑可以有效啟動腫瘤特異性的CD8+T 細胞免疫反應，誘導腫瘤消退。以此來增加T 細胞的表達，增強腫瘤的免疫應答，這也是后續(xù)研究者們研究治療惡性腫瘤的新方向。

3 討論

本研究揭示了2009—2021 年乳腺癌進展中STING 信號通路作用的研究方向，更全面地梳理了該領(lǐng)域的發(fā)展歷程，為預測其未來發(fā)展趨勢提供了更精準可靠的依據(jù)。分析結(jié)果顯示，2016 年后乳腺癌進展中STING 信號通路作用的論文數(shù)量迅速增加。根據(jù)這種發(fā)展趨勢，本課題組預測其在未來幾年會持續(xù)增加。國內(nèi)關(guān)于乳腺癌進展中STING信號通路作用的相關(guān)研究相對較少，文章產(chǎn)出量低，需要更多的研究者投身此方向深入研究，并且加強國際合作。通過分析還發(fā)現(xiàn)，STING在腫瘤微環(huán)境、CD8+T 細胞、干擾素反應、抗腫瘤、腫瘤細胞、腫瘤免疫療法、靶向治療、抗腫瘤免疫反應、適應性免疫反應等方面的研究迅速涌現(xiàn)。最新發(fā)展趨勢突現(xiàn)詞為“STING”，其可誘導腫瘤內(nèi)DC 產(chǎn)生Ⅰ型干擾素、驅(qū)動腫瘤特異性T細胞來改變腫瘤微環(huán)境，從而發(fā)揮抑制作用[25]。

乳腺癌進展中STING信號通路的作用機制正逐步被揭示，紫杉醇作為乳腺癌最常用的化療藥物之一，可誘導三陰乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）細胞中形成cGAS 陽性微核，并以cGAS 依賴性方式誘導巨噬細胞極化為M1表型，進而促進部分TNBC 組織中淋巴細胞募集，提高患者的生存率[26]。PARKES等[27]的研究結(jié)果顯示，核周STING表達水平可預測ER 陽性乳腺癌患者的預后。隨著研究的不斷深入，人們對STING激動劑的研究也越來越多，并在多種腫瘤的臨床前研究和臨床試驗治療中均展示出理想的療效[28]。研究證明，STING激動劑可抑制乳腺癌細胞的增殖，不僅可用于乳腺癌的治療，還可與阿替利珠單抗聯(lián)用以增強其抗腫瘤療效[29]，與激光熱療聯(lián)用亦能在乳腺癌治療中起協(xié)同作用[30]。此外，STING激動劑可通過激活CD8α陽性DC增強腫瘤疫苗在耐藥及轉(zhuǎn)移性乳腺癌小鼠中的抗腫瘤作用[31]。無PTEN 表達、IKKε 高表達的TNBC 可能是STING激動劑作用的最佳靶點，可將免疫抑制性腫瘤微環(huán)境轉(zhuǎn)化為免疫原性腫瘤微環(huán)境，從而起到抗腫瘤作用[32]。上述研究結(jié)果均表明，STING信號通路有巨大的潛力成為乳腺癌免疫治療的新靶點。

綜上所述，本研究通過總結(jié)近年來乳腺癌進展中STING 信號通路作用的研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢。STING信號通路通過啟動腫瘤特異性CD8+T細胞激活機體的免疫反應，從而發(fā)揮抗腫瘤作用。然而，目前STING信號通路在耐藥性乳腺癌中的作用及其機制仍鮮有報道，其激動劑能否與傳統(tǒng)的中醫(yī)藥協(xié)同作用發(fā)揮其更大的抗腫瘤作用也尚未明了，有待開展更深入廣泛的研究，此也為未來乳腺癌的免疫治療提供了新思路。