張生，熊萬成，苗志釗，周兵（新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院 第一附屬醫(yī)院.肝膽胰脾外科；.普外科，河南 衛(wèi)輝 453100）

肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是常見的惡性腫瘤之一，具有極高的復(fù)發(fā)率和病死率[1]。據(jù)統(tǒng)計，2020年全球新增HCC患者約907萬，新增死亡人數(shù)約830萬，其病死率目前僅次于肺癌和結(jié)直腸癌，位居全球第三位[2]；中國HCC 的病死率僅次于肺癌，其發(fā)病率位居第五位，HCC發(fā)病率與病死率均遠(yuǎn)超世界平均水平，全球新發(fā)病例和死亡病例有一半在中國[3]。盡管手術(shù)治療、肝移植和藥物治療改善了HCC的臨床療效，但由于其高復(fù)發(fā)率和耐藥性，無法阻止疾病進展[4]。索拉非尼（sorafenib，SR）是首個獲批的全身用藥，可使部分晚期HCC患者顯著獲益，然而，大多數(shù)患者會產(chǎn)生耐藥，導(dǎo)致預(yù)后不良。因此，迫切需要闡明HCC 對SR 耐藥的機制并尋找新的分子靶點。非編碼RNA是一類無蛋白質(zhì)編碼功能的核酸序列[5]。研究結(jié)果[6]表明，長鏈非編碼RNA（lncRNA）在多種腫瘤中異常表達(dá)，發(fā)揮癌基因或抑癌基因功能參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。一些miRNA和lncRNA 的失調(diào)與HCC 耐藥發(fā)生有著密切的聯(lián)系[7-9]。研究[10-26]發(fā)現(xiàn)，lncRNA 小泛素樣修飾蛋白1假基因3（small ubiquitin-like modifier 1 pseudogene 3，SUMO1P3）在多種腫瘤組織和細(xì)胞中高表達(dá)并發(fā)揮致癌作用，但是其在HCC的SR耐藥中的作用機制尚不明確。本研究通過觀察SUMO1P3 對HCC 細(xì)胞HepG2及其SR耐藥細(xì)胞HepG2/SR增殖、凋亡、遷移與侵襲的影響，探討其發(fā)揮作用的分子機制，為抵抗HCC的SR耐藥提供新的靶點。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞及主要試劑

肝癌細(xì)胞HepG2購自上海中喬新舟生物科技有限公司。WB 配膠試劑盒、BCA 蛋白定量試劑盒、總RNA 提取試劑盒、CCK-8 試劑盒、BeyoFastTMSYBR Green One-Step qPCR試劑盒均購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，SR 購自SIGMA 公司，qPCR 試劑盒-SYBR Green I染料購自生工生物工程（上海）股份有限公司，細(xì)胞凋亡檢測試劑盒購自美國BD 公司，cyclin D1、Bcl2、BAX、MMP-2、MMP-9 和GAPDH 一抗以及HRP標(biāo)記的山羊抗鼠和山羊抗兔的二抗均購自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司。

1.2 SR耐藥細(xì)胞HepG2/SR的構(gòu)建

HepG2 細(xì)胞在含10%FBS 的DMEM 培養(yǎng)基中培養(yǎng)。在HepG2 細(xì)胞培養(yǎng)液中持續(xù)加入SR，其起始濃度為0.01 μmol/L，傳3 代后將SR 濃度由低至高逐漸提高至5 μmol/L，最終使培養(yǎng)細(xì)胞在含SR 濃度為5 μmol/L的培養(yǎng)液中穩(wěn)定傳代生長，即構(gòu)建成功人HCC 耐藥細(xì)胞HepG2/SR。

1.3 CCK-8法檢測HepG2和HepG2/SR細(xì)胞的耐藥性

將HepG2 和HepG2/SR 細(xì)胞經(jīng)胰酶消化、計數(shù)后，接種于96 孔板[（2×104個細(xì)胞/孔）中，待細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度的SR 進行培養(yǎng)（第1孔濃度為51.2 μmol/L，倍比稀釋至第9孔，第10 孔（空白對照細(xì)胞）只加入0.25%DMSO]，每組設(shè)3 個復(fù)孔。培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h 后棄去96 孔板的培養(yǎng)基，每孔加入90 μL DMEM培養(yǎng)基和10 μL CCK-8試劑，于細(xì)胞培養(yǎng)箱中處理1 h后，用酶標(biāo)儀檢測450 nm波長處各孔的光密度（D）值，計算細(xì)胞的存活率[細(xì)胞存活率=（加藥細(xì)胞D/空白對照細(xì)胞D）×100%]。

1.4 細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染與SR處理

將HepG2 和HepG2/SR 細(xì)胞分別接種在6 孔板（2×105個/孔）中，在含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。待每孔的細(xì)胞匯合度達(dá)50%左右時，按照Lipofectamine 2000的使用說明，在HepG2/SR細(xì)胞中轉(zhuǎn)染si-SUMO1P3 或si-NC，72 h 后收集細(xì)胞進行后續(xù)試驗；在HepG2細(xì)胞中轉(zhuǎn)染SUMO1P3過表達(dá)載體（pc-SUMO1P3）或空載體（pc-DNA），待細(xì)胞的匯合度達(dá)70%～80%時，加入5 μmol/L SR 繼續(xù)培養(yǎng)，24 h后收集細(xì)胞，進行后續(xù)試驗。

1.5 qPCR 法檢測HepG2 和HepG2/SR細(xì)胞中SUMO1P3的表達(dá)水平

收集轉(zhuǎn)染或處理后的各組細(xì)胞，用TRIzol提取細(xì)胞中總RNA，利用BeyoFastTMSYBR Green One-Step qPCR試劑盒進行后續(xù)實驗。依照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書配置好反應(yīng)體系后，按照設(shè)置反應(yīng)溫度為50 ℃，逆轉(zhuǎn)錄30 min，獲取cDNA作為反應(yīng)模板，隨后進行qPCR反應(yīng)。引物序列：SUMO1P3上游為5′-ACTGGG AATGGAGGAAGA-3′，下游為5′-TGAGAAAGGATT GAGGGAAAAG-3′；GAPDH 上游為5′-GTCAGCCGC ATCTTCTTTTG-3′，下游為5′-GCGCCCAATACG ACCAAATC-3′。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性2 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火/延伸30 s，共40個循環(huán)。采用2?ΔΔCt法計算SUMO1P3的相對表達(dá)量。

1.6 CCK-8法檢測HepG2和HepG2/SR細(xì)胞的增殖能力

將轉(zhuǎn)染或處理后的各組細(xì)胞接種在96孔板中（5×103個細(xì)胞/孔）上，分別在培養(yǎng)0、24、48和72 h時，在每孔中加入10 μL CCK-8溶液，繼續(xù)培養(yǎng)2 h后，使用酶標(biāo)儀檢測450 nm 波長處各孔的D值，根據(jù)D值繪制細(xì)胞的增殖曲線。

1.7 Transwell 實驗檢測HepG2 和HepG2/SR 細(xì)胞的遷移和侵襲能力

用Transwell小室法進行細(xì)胞遷移和侵襲實驗。細(xì)胞遷移實驗：收集轉(zhuǎn)染或處理后的各組細(xì)胞，用無血清培養(yǎng)基制備密度為1×105個/mL 的單細(xì)胞懸液，向Transwell小室上室中加入100μL懸液，下室中加入600μL含10%FBS的培養(yǎng)基作為誘導(dǎo)劑，培養(yǎng)24 h后，取出上室，用4%甲醛溶液固定10 min，隨后用0.1%結(jié)晶紫染色5 min，PBS清洗后，用棉簽輕輕擦除上室內(nèi)壁的細(xì)胞，置于顯微鏡下觀察并拍照，隨機選取5個視野，計算穿膜細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞侵襲實驗：需預(yù)先在Transwell小室上膜預(yù)鋪人工基質(zhì)膠，其他步驟同細(xì)胞遷移實驗。

1.8 FCM檢測HepG2和HepG2/SR細(xì)胞的凋亡水平

收集轉(zhuǎn)染或處理后的各組細(xì)胞，分別用PI 單染色法和Annexin Ⅴ-FITC/PI雙染法進行凋亡檢測。PI單染色法：根據(jù)試劑盒說明書方法，將收集的細(xì)胞重懸于100μL結(jié)合緩沖液中，分別加入5μL PI染色液，室溫下避光處理15 min后，加入0.9 mL結(jié)合緩沖液，迅速上流式細(xì)胞儀進行檢測，并用CellQuest 軟件采集、分析各組凋亡細(xì)胞的比例。Annexin Ⅴ-FITC/PI雙染法：將收集的細(xì)胞重懸于100μL結(jié)合緩沖液中，分別加入5μL Annexin Ⅴ-FITC 染色液和5μL PI 染色液，室溫下避光處理15 min后，加入0.9 mL結(jié)合緩沖液，迅速上機檢測，并用CellQuest 軟件采集、分析各組凋亡細(xì)胞的比例。

1.9 WB 法檢測HepG2 和HepG2/SR 細(xì)胞中相關(guān)蛋白的表達(dá)

各組細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染或處理后，在培養(yǎng)板各孔中加入適量RIPA中性裂解液，置于冰上裂解3 min后收集細(xì)胞，經(jīng)低溫超聲和離心后，取上清液進行蛋白定量。蛋白樣品經(jīng)BCA法檢測濃度后，加入SDS上樣緩沖液煮沸，使蛋白變性。取20 μg蛋白樣品，進行10%SDSPAGE，用濕轉(zhuǎn)法將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到NC膜上，在5%TBST脫脂奶粉溶液中封閉1 h，PBS 洗膜3次（5 min/次）。加入均以1∶1000稀釋的cyclinD1、Bcl2、BAX、MMP-2和MMP-9一抗，4 ℃過夜。PBS洗膜3次后，加入HRP標(biāo)記的二抗（1∶2 000），37 ℃下處理1 h。PBS洗膜后，采用化學(xué)發(fā)光發(fā)法顯影。以GAPDH為內(nèi)參照，用ImageJ軟件分析蛋白條帶的灰度值。

1.10 統(tǒng)計學(xué)處理

qPCR 法、CCK-8 法、Transwell 實驗、FCM 和WB法等實驗均重復(fù)3 次。采用GraphPad 8.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析和繪圖，符合正態(tài)分布的計量資料以xˉ±s表示，兩組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗，以P<0.05或P<0.01表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 構(gòu)建的HepG2/SR細(xì)胞高表達(dá)SUMO1P3

通過逐漸提高培養(yǎng)基中SR濃度的方法成功構(gòu)建SR耐藥細(xì)胞HepG2/SR。CCK-8法檢測結(jié)果（圖1A）顯示，經(jīng)不同濃度的SR處理后，HepG2/SR細(xì)胞對SR的耐受性顯著高于HepG2 細(xì)胞（t=5.612、16.630、9.432、48.500、31.770、13.410、10.460、13.220、16.200，均P<0.01）。SR 對HepG2 細(xì)胞的半抑制濃度（IC50）為4.40 μmol/L，顯著低于SR對HepG2/SR細(xì)胞的IC50（57.73 μmol/L），表明SR 耐藥細(xì)胞HepG2/SR 構(gòu)建成功。qPCR 法檢測結(jié)果（圖1B）顯示，HepG2/SR 細(xì)胞中SUMO1P3 的表達(dá)水平顯著高于HepG2 細(xì)胞（t=36.370，P<0.01）。結(jié)果表明，HepG2 細(xì)胞獲得耐藥性后，SUMO1P3 的表達(dá)水平也隨之升高。

2.2 轉(zhuǎn)染si-SUMO1P3 顯著抑制HepG2/SR 細(xì)胞的增殖能力并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡

轉(zhuǎn)染si-SUMO1P3后，與si-NC組比較：（1）si-SUMO1P3 組HepG2/SR細(xì)胞中SUMO1P3的表達(dá)水平顯著下降（t=36.370，P<0.01；圖2A）；（2）si-SUMO1P3組HepG2/SR 細(xì)胞在1～4 d 的增殖能力均顯著下降（t=7.057、5.241、4.683、5.757，均P<0.01；圖2B）；（3）si-SUMO1P3 組HepG2/SR細(xì)胞中PI陽性細(xì)胞比例顯著上升（t=10.200，P<0.01；圖2C，D）；（4）si-SUMO1P3 組HepG2/SR 細(xì)胞凋亡率顯著升高（t=22.89，P<0.01；圖2E、F）。結(jié)果表明，敲減SUMO1P3可顯著降低HepG2/SR 細(xì)胞的增殖能力，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和壞死。

2.3 敲減SUMO1P3 可顯著抑制HepG2/SR 細(xì)胞的遷移和侵襲能力

Transwell實驗結(jié)果（圖3）顯示，與si-NC組相比，si-SUMO1P3組HepG2/SR細(xì)胞的遷移和侵襲能力均明顯降低（t=5.135、7.220，均P<0.01）。結(jié)果表明，敲減SUMO1P3可顯著降低HepG2/SR細(xì)胞的遷移和侵襲能力。

2.4 轉(zhuǎn)染pc-SUMO1P3通過促進細(xì)胞增殖并抑制凋亡誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞SR耐藥

qPCR 實驗結(jié)果（圖4A）顯示，與pc-DNA 組相比，pc-SUMO1P3 組HepG2 細(xì)胞中SUMO1P3 表達(dá)顯著升高（t=5.990，P<0.01）；經(jīng)5 μmol/L SR 處理后，與pc-DNA+SR 組相比，pc-SUMO1P3+SR組HepG2 細(xì)胞中SUMO1P3 的表達(dá)仍顯著高升高（t=14.410，P<0.01）。

CCK-8 法檢測結(jié)果（圖4B）表明，與pc-DNA組相比，pc-SUMO1P3 組HepG2 細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后第2～4 天的增殖能力均顯著增強（t=3.259、4.131、4.155，P<0.05 或P<0.01）；經(jīng)5 μmol/L SR處理后，與pc-DNA+SR組相比，pc-SUMO1P3+SR 組HepG2 細(xì)胞增殖能力在第1～4天均顯著升高（t=6.587、3.100、5.295、4.330，P<0.05或P<0.01）。

FCM 檢測結(jié)果（圖4C、D）顯示，與pc-DNA 組相比，pc-SUMO1P3 組PI 陽性的HepG2 細(xì)胞比例顯著下降（t=6.124，P<0.01）；經(jīng)5 μmol/L SR 處理后，與pc-DNA+SR組相比，pc-SUMO1P3+SR組PI陽性細(xì)胞比例仍顯著降低（t=6.124，P<0.01）。Annexin Ⅴ-FITC/PI雙染FCM 檢測結(jié)果（圖4E、F）顯示，與pc-DNA組相比，pc-SUMO1P3 組HepG2 細(xì)胞凋亡率顯著降低（t=8.911，P<0.01）。經(jīng)5 μmol/L SR 處理后，與pc-DNA+SR 組相比，pc-SUMO1P3+SR 組HepG2 細(xì)胞凋亡率仍顯著降低（t=3.576，P<0.01）。

上述實驗結(jié)果表明，過表達(dá)SUMO1P3 可使HepG2 細(xì)胞的增殖能力和抗凋亡能力顯著增強，同時也增強了HepG2 細(xì)胞對SR 的耐受性。SUMO1P3通過增強HepG2 細(xì)胞對SR 的耐受性促進細(xì)胞增殖和抑制凋亡。

2.5 上調(diào)SUMO1P3 可通過促進細(xì)胞遷移和侵襲并誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞SR耐藥

Transwell 實驗結(jié)果（圖5）顯示，與pc-DNA 組相比，pc-SUMO1P3組HepG2細(xì)胞的遷移和侵襲能力均顯著升高（t=7.462、10.73，均P<0.01）；經(jīng)5 μmol/L SR處理后，與pc-DNA+SR 組相比，pc-SUMO1P3+SR 組HepG2 細(xì)胞的遷移和侵襲細(xì)胞數(shù)仍顯著升高（t=9.052、7.112，均P<0.01）。結(jié)果表明，上調(diào)SUMO1P3 可顯著增強HepG2 細(xì)胞的遷移和侵襲能力，同時也增強了HepG2 細(xì)胞對SR 的耐受性。SUMO1P3通過增強HepG2細(xì)胞對SR的耐受性來促進細(xì)胞的遷移和侵襲。

2.6 SUMO1P3 通過調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲相關(guān)信號通路誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞對SR的耐藥

WB 法檢測結(jié)果（圖6）顯示，敲減SUMO1P3后，與si-NC 組相比，si-SUMO1P3 組HepG2/SR 細(xì)胞中cyclin D1、Bcl2、MMP-2 和MMP-9 的表達(dá)水平均顯著降低（t=7.976、6.989、4.960、3.580，P<0.05 或P<0.01），而BAX 的表達(dá)水平顯著升高（t=3.830，P<0.05）。過表達(dá)SUMO1P3后，與pc-DNA 組相比，pc-SUMO1P3 組HepG2 細(xì)胞中cyclin D1、Bcl2、MMP-2 和MMP-9 的表達(dá)水平均顯著升高（t=4.416、7.513、7.342、9.546，P<0.05 或P<0.01），而BAX 的表達(dá)水平顯著降低（t=9.143，P<0.01）。經(jīng)5 μmol/L SR處理后，與pc-RNA+SR 組相比，pc-SUMO1P3+SR 組HepG2 細(xì)胞中cyclin D1、Bcl2、MMP-2 和MMP-9蛋白的表達(dá)水平顯著升高（t=4.750、3.720、14.710、6.178，P<0.05或P<0.01），而BAX的表達(dá)水平顯著降低（t=9.323，P<0.01）。結(jié)果表明，SUMO1P3 通過調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲相關(guān)信號通路來誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞對SR的耐藥。

3 討論

SUMO1P3 是SUMO1 假基因家族中的一種lncRNA，已被證實參與多種腫瘤發(fā)生的病理過程。SUMO1P3 最初在胃癌中發(fā)現(xiàn)表達(dá)上調(diào)[13]，后續(xù)研究結(jié)果證實，SUMO1P3 在非小細(xì)胞肺癌[25]、膀胱癌[23]、膠質(zhì)瘤[10,16]、胰腺癌[19]、結(jié)直腸癌[24]以及HCC[12,20,22,26]中均表達(dá)上調(diào)。SUMO1P3在胃癌組織中高表達(dá)，可能是一種潛在的預(yù)后因素和胃癌的治療靶點[21]。敲減SUMO1P3后，膀胱癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力均受到抑制，凋亡細(xì)胞率升高[23]。ZHOU等[26]的研究結(jié)果表明，敲減SUMO1P3 可增強HCC 的放療敏感性；HU 等[12]通過細(xì)胞實驗和小鼠荷瘤試驗證實，SUMO1P3 促進HCC 的發(fā)生與發(fā)展；其他研究[20,22]同樣證實，SUMO1P3可作為HCC的生物標(biāo)志物。本研究聚焦SUMO1P3 在HCC 對SR 耐藥中的作用，探討HCC細(xì)胞SR耐藥的分子機制。

本研究首先成功構(gòu)建了HCC 的SR 耐藥細(xì)胞HepG2/SR，發(fā)現(xiàn)HepG2/SR 細(xì)胞中SUMO1P3 表達(dá)水平顯著高于HepG2細(xì)胞。據(jù)此推測，SUMO1P3的表達(dá)與HCC細(xì)胞的耐藥性密切相關(guān)。腫瘤耐藥發(fā)生的一個重要原因是腫瘤細(xì)胞增殖信號的過度活化。通過轉(zhuǎn)染si-SUMO1P3 敲減SUMO1P3 的表達(dá)，評價SUMO1P3 表達(dá)對HCC 的SR 耐藥細(xì)胞HepG2/SR 的影響，與在其他腫瘤研究[23-24,26]中的結(jié)果一致，本研究中敲減SUMO1P3顯著抑制了HepG2/SR細(xì)胞的增殖能力，并促進其凋亡，表明SUMO1P3 同樣影響HepG2/SR 細(xì)胞的增殖和凋亡，并通過干預(yù)其增殖和凋亡相關(guān)進程影響細(xì)胞對SR的耐藥。此外，本研究通過轉(zhuǎn)染pc-SUMO1P3上調(diào)HepG2細(xì)胞中SUMO1P3的表達(dá)，利用SR 進行干預(yù)，反向評價其對該細(xì)胞SR的耐受性。結(jié)果顯示，SUMO1P3 表達(dá)上調(diào)后，SR 對其增殖的抑制和凋亡的促進作用均減弱，表明SUMO1P3能夠降低細(xì)胞對SR的敏感性。

腫瘤轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致其化療抵抗發(fā)生的另一個主要原因[27-29]。本研究結(jié)果顯示，敲減SUMO1P3后，HepG2/SR 細(xì)胞的遷移與侵襲能力均顯著降低；過表達(dá)SUMO1P3后，HepG2細(xì)胞的遷移和侵襲能力顯著增強；同時在SR 的作用下，轉(zhuǎn)染pc-SUMO1P3 的HepG2 細(xì)胞的遷移與侵襲能力顯著高于對照組的HepG2 細(xì)胞。實驗結(jié)果表明，SUMO1P3 通過增強HCC細(xì)胞SR耐藥來增強細(xì)胞的遷移和侵襲能力。

此外，SUMO1P3 在乳腺癌[15]、HCC[20]、非小細(xì)胞肺癌[25]中都通過競爭性結(jié)合不同類型的miRNA發(fā)揮致癌作用。如LIU 等[15]的研究結(jié)果表明，SUMO1P3能夠通過負(fù)向調(diào)節(jié)miR-320 促進乳腺癌的發(fā)生；WU 等[20]的研究結(jié)果表明，SUMO1P3 能夠通過靶向結(jié)合miR-320a 而活化Wnt/β-catenin 信號通路，進而促進HCC 細(xì)胞增殖與侵襲；ZHANG 等[25]研究表明，SUMO1P3能夠競爭性吸附miR-136進而調(diào)節(jié)非小細(xì)胞肺癌的遷移與侵襲。在本研究初步探討了SUMO1P3 影響HCC 細(xì)胞SR 耐藥的分子機制，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，敲減SUMO1P3 的HepG2/SR 細(xì)胞中細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cyclin D1、凋亡抑制分子Bcl2、遷移與侵襲相關(guān)分子MMP-2和MMP-9表達(dá)均顯著降低，而促凋亡分子BAX 的表達(dá)顯著升高，這與HU 等[12]的SUMO1P3 在MHCC97H 和HepG2 細(xì)胞中的分子機制類似。與之相反，在SR的作用下，與對照組相比，上調(diào)SUMO1P3的HepG2細(xì)胞中cyclin D1、Bcl2、MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)顯著升高，BAX表達(dá)顯著降低。實驗表明，SUMO1P3通過影響HCC細(xì)胞的周期、凋亡、遷移與侵襲相關(guān)的分子表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞的SR耐藥。

綜上所述，SUMO1P3 能夠促進HCC 細(xì)胞增殖、遷移與侵襲，抑制細(xì)胞凋亡，并通過調(diào)控細(xì)胞周期、凋亡、遷移與侵襲相關(guān)的分子表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞的SR耐藥的發(fā)生，為闡明HCC細(xì)胞SR耐藥發(fā)生的分子機制提供了新的思路，同時為治療晚期HCC患者SR耐藥提供了新的靶點。