劉頂鼎，劉冬，常露露，王靜茹，吳雪梅，郭建生，曾貴榮（.貴州中醫(yī)藥大學藥學院/藥效物質基礎及作用機理研究中心，貴陽 55005；.湖南中醫(yī)藥大學藥學院，長沙 4008；3.湖南省藥物安全評價研究中心/新藥藥效與安全性評價湖南省重點實驗室，長沙 4033）

芎麻湯源于《圣濟總錄》的大芎丸，由川芎（一斤）、天麻（四兩）組成。方中川芎主入肝膽經(jīng)，行氣開郁，活血、祛風、止痛，善治頭痛，自古有“頭痛不離川芎”之說；天麻專入肝經(jīng)，平肝息風，通絡止痛，主治頭風頭痛，為治頭痛要藥。芎麻湯可平肝息風、活血止痛、祛風通絡，主治“偏正頭痛、頭風眩暈、目系眩急、身體拘倦”，為臨床治肝陽上亢頭痛證、瘀血頭痛證或瘀血挾肝陽上亢頭痛證之基礎方[1-2]。本課題組前期研究已發(fā)現(xiàn)，芎麻湯有效部位（乙酸乙酯及正丁醇提取部位）能降低偏頭痛模型大鼠三叉神經(jīng)頸髓復合體（trigeminal cervical spinal complex，TCC）內降鈣素基因相關肽-降鈣素受體樣受體/活性修飾蛋白受體1（calcitonin generelated peptide-calcitonin receptor-like receptor/receptor-associated membrane proteins 1，CGRP-CRLR/RAMP1）信號通路的活性，減少CGRP的釋放，緩解偏頭痛；芎麻湯不同提取物能下調新生大鼠三叉神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元瞬時受體電位香草 酸 亞 型 1（transient receptor potential vanilloid 1，TRPV1）的表達[3-4]。同時有研究發(fā)現(xiàn)，在偏頭痛三叉神經(jīng)系統(tǒng)中，TRPV1激活會導致C纖維釋放CGRP；隨后，CGRP作用于Aδ纖維表面的CRLR和RAMP1[二者統(tǒng)稱為CGRP受體（CGRP receptor，CGRP-R）]，導致三叉神經(jīng)系統(tǒng)敏化引起頭痛[5]?；诖?，本研究團隊推測芎麻湯可能通過干預TRPV1-CGRP/CGRP-R信號通路防治偏頭痛。本實驗采用附子湯灌胃聯(lián)合電刺激三叉神經(jīng)節(jié)復制肝陽上亢兼瘀血型偏頭痛模型，以探討芎麻湯有效部位對該模型大鼠TCC內TRPV1-CGRP/CGRP-R信號通路的影響，為芎麻湯治療偏頭痛的臨床及作用機制研究提供實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有ALC-H型腦立體定位儀（江蘇賽昂斯生物科技有限公司），YD-315型輪轉式切片機（金華市益迪醫(yī)療設備有限公司），BA410-T型生物顯微鏡（麥克奧迪實業(yè)集團有限公司），DYY-6C型電泳儀（北京六一生物科技有限公司），PIKOREAL96型熒光定量PCR儀（美國Thermo Fisher Scientific公司），YLS-9A型生理、藥理電子刺激儀（北京冀諾泰科技發(fā)展有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

制附子、川芎、天麻飲片（批號分別為1912068、20061、200301）均購自長沙老百姓大藥房；鹽酸氟桂利嗪膠囊[國藥準字H10930003，批號KFJ3S2S，規(guī)格5 mg（以C26H26F2N2計）]購自西安楊森制藥有限公司；二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒（貨號ZLI-9018）購自北京中杉金橋生物技術有限公司；超敏化學發(fā)光（ECL）液（貨號K-12045-D50）購自美國Advansta公司；兔TRPV1抗體、山羊CGRP抗體（貨號分別為ab6166、ab36001）均購自英國Abcam公司；兔CRLR抗體（貨號A11979）購自美國Abclonal公司；兔RAMP1抗體、小鼠β-肌動蛋白（β-actin）抗體、辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）二抗（R）、辣根過氧化物酶標記的山羊抗小鼠IgG二抗（M）（貨號分別為10327-1-AP、66009-1-Ig、SA00001-1、SA00001-2）均購自美國 Proteintech公司；TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1的PCR引物序列由生工生物工程（上海）股份有限公司合成（見表1）；其余試劑均為分析純或實驗室常用規(guī)格。

表1 PCR引物序列

1.3 動物

SPF級雄性SD大鼠70只，體質量220～250 g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物使用許可證號為SYXK（湘）2015-0016，生產(chǎn)許可證號為SCXK（湘）2019-0004。本動物實驗研究符合中國倫理委員會有關動物研究指導原則。

2 方法

2.1 藥物提取

附子湯（批號20191110）制備方法：取制附子飲片20 g，加2倍量水（mL/g）浸泡30 min，煎煮2次，過濾，合并藥液后蒸發(fā)濃縮至質量濃度為2 mg/mL的藥液（以生藥計）。

芎麻湯有效部位（批號20191220）制備方法：取川芎飲片2 kg、天麻飲片0.5 kg，依次以8倍量（mL/g）、6倍量（mL/g）水煎煮2次，合并濾液并濃縮至10 L后，依次采用等體積乙酸乙酯、正丁醇萃?。糠N溶劑重復萃取3次），分別得到乙酸乙酯、正丁醇提取物，經(jīng)旋轉蒸發(fā)儀回收有機溶劑、水浴揮干、烘箱烘干后，得乙酸乙酯提取物26.46 g、正丁醇提取物55.19 g。

2.2 動物分組及給藥劑量

70只大鼠按體質量隨機分為7組：正常組，模型組，陽性對照組（鹽酸氟桂利嗪膠囊0.9 mg/kg，根據(jù)成人臨床劑量換算而得的等效劑量），芎麻湯乙酸乙酯提取物低、高劑量組（0.87、3.46 g/kg），芎麻湯正丁醇提取物低、高劑量組（1.80、7.20 g/kg）。芎麻湯有效部位各劑量均根據(jù)成人臨床劑量換算而得，為1、4倍等效劑量。SD大鼠正常組8只，模型組12只，其余給藥組每組10只。

2.3 模型建立及藥物干預

肝陽上亢兼瘀血型偏頭痛大鼠模型評價標準[6-8]：遵循中醫(yī)藥理論，參照《中藥新藥臨床指導原則（試行）》中有關偏頭痛中醫(yī)證候診斷標準，以大鼠雙眼結膜顏色加深變紅，易激惹，頻繁打斗，提尾時尖叫、驚跳甚至咬人等宏觀體征，作為肝陽上亢證模型復制成功的標準；以大鼠電刺激時出現(xiàn)咀嚼肌收縮、口鼻分泌物增多，清醒后出現(xiàn)節(jié)律性抖動頭部、過度理毛、甩頭、扭頭等行為表現(xiàn)，以及被毛蓬松無澤，舌質紫暗或伴瘀斑、瘀點等宏觀體征，作為瘀血型偏頭痛模型復制成功的觀察標準。按此評價標準，最終模型組、陽性組及芎麻湯有效部位各劑量組均保留8只大鼠。

除正常組（以10 mL/kg灌胃0.9%氯化鈉溶液）大鼠外，其余各組大鼠均以2 g/kg灌胃等體積附子湯，每天1次，連續(xù)4周，復制肝陽上亢證模型[8]；各給藥組大鼠從灌胃附子湯第15天起，同時灌胃等體積的相應藥物，每天1次，連續(xù)2周，正常組、模型組則灌胃0.9%氯化鈉溶液。第29天，除正常組外，其余各組大鼠均參照課題組前期造模方法電刺激大鼠三叉神經(jīng)節(jié)復制肝陽上亢兼瘀血型偏頭痛模型[6-7]。待大鼠清醒后，各組大鼠按前述方法再維持灌胃給藥1次。

2.4 大鼠宏觀體征及行為表現(xiàn)觀察

電刺激時，觀察大鼠是否存在咀嚼肌收縮、口鼻分泌物增多的癥狀；電刺激結束待大鼠清醒后、末次灌胃30 min后觀察其毛發(fā)、舌象、神情、性情等宏觀體征及行為表現(xiàn)，以判定造模是否成功。

2.5 取材及指標檢測

2.5.1 取材 觀察大鼠宏觀體征及行為表現(xiàn)后，深度麻醉大鼠，結扎腹主動脈，先用預冷的0.9%氯化鈉溶液進行心臟灌注，當流出液體清亮時，再用預冷的現(xiàn)配4%多聚甲醛固定。大鼠灌注固定后取全腦組織，隨即分離出TCC，分為3份：第1份置于4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液（PBS）中，于-20℃冰箱保存，用于免疫組織化學法檢測；第2份置于加有RNA裂解液的凍存管中，于-80℃冰箱凍存，用于RT-qPCR法檢測；第3份直接置于凍存管中，于-80℃冰箱保存，用于Western blot法檢測。

2.5.2 大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1陽性表達的檢測 采用免疫組織化學法進行檢測，每個樣本檢測3次。取“2.5.1”項下第1份標本進行冰凍切片（5～7 μm），經(jīng)烤片、脫蠟、熱修復抗原、滅活內源性酶后，滴加稀釋的一抗（TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1抗體稀釋比例均為1∶400），于4℃過夜，再用PBS沖洗3次；滴加稀釋的二抗（稀釋比例均為1∶1 000）于37℃孵育30 min，PBS沖洗3次；用新配的DAB顯色，室溫孵育5 min；最后，用蒸餾水洗滌，蘇木素復染。貼片，晾干，脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，用顯微鏡觀察并用Motic B5顯微攝像系統(tǒng)采像。用Image-Pro-Plus圖像分析軟件分析各組大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1的陽性表達情況（鏡下棕色或深棕色現(xiàn)象可以判斷為陽性表達）。

2.5.3 大鼠 TCC 內 TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1 mRNA相對表達量的檢測 采用RT-qPCR法進行檢測，每個樣本檢測3次。取“2.5.1”項下第2份標本0.02 g，依次加入TRIZOL試劑、三氯甲烷、異丙醇、75%乙醇提取總RNA，用無菌無酶水復溶后得RNA溶液。吸取RNA溶液2 μL，用紫外分光光度計在260、280 nm波長處測定其吸光度值，并計算濃度及純度；另取RNA溶液3 μL按試劑盒說明書操作，以組織中總mRNA為模板，逆轉錄cDNA（逆轉錄條件為50℃孵育50 min、85℃孵育5 min），以cDNA為模板進行RT-qPCR實驗擴增。PCR反應體系（每個樣本每個指標3個孔，每孔10 μL，共30 μL）包括：反轉錄產(chǎn)物2 μL，上、下游引物各1 μL，ddH2O 11 μL，SYBGREEN PCR Master Mix（2×）15 μL。PCR反應條件：95℃預變性10 min；95℃變性15 s，60℃退火/延伸30 s，40個循環(huán)。以正常組樣品為對照樣品，采用2-ΔΔCt法計算各目的mRNA的相對表達量。

2.5.4 大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1蛋白相對表達量的檢測 采用Western blot法進行檢測，每個樣本檢測3次。取“2.5.1”項下第3份標本0.03 g，用預冷的PBS沖洗后加入RIPA裂解液400 μL提取蛋白，測定蛋白上清液的濃度后，進行蛋白變性。將已變性蛋白經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（濃縮膠電壓80 V，分離膠電壓120 V，電泳時間150 min）分離后，轉膜（恒定電流300 mA，CGRP、RAMP1 30 min，CRLR 70 min，TRPV1、β-actin 60 min）；用5%脫脂奶粉室溫封閉2 h，加入一抗（TRPV1、RAMP1、CRLR抗體稀釋比例均為1∶1 000，CGRP抗體稀釋比例為1∶1 500，β-actin稀釋比例為1∶5 000）室溫孵育90 min，于4℃孵育過夜；加入二抗（R、M稀釋比例分別為1∶6 000、1∶5 000）孵育1 h；置于ECL顯色液中孵育3 min，暗盒中曝光20 min后，顯影沖洗底片并掃描。采用Quantity one軟件進行定量分析。目的蛋白相對表達量＝目的蛋白條帶灰度值/內參β-actin條帶灰度值。

2.6 統(tǒng)計學方法

3 結果

3.1 芎麻湯有效部位對大鼠宏觀體征及行為表現(xiàn)的影響

電刺激時，大鼠均出現(xiàn)了咀嚼肌收縮、口鼻分泌物增多的癥狀。電刺激結束待大鼠清醒后，與正常組相比，模型組大鼠均出現(xiàn)了雙眼結膜顏色加深變紅，易激惹，頻繁打斗，提尾時尖叫、驚跳甚至咬人等宏觀體征，以及節(jié)律性抖動頭部、過度理毛、甩頭、扭頭等行為表現(xiàn)；同時被毛明顯蓬松無澤，大部分大鼠的舌質出現(xiàn)紫暗，小部分甚至有明顯瘀斑或瘀點，提示肝陽上亢兼瘀血型偏頭痛模型復制成功。末次灌胃30 min后，各給藥組大鼠以上情況均明顯改善，個別大鼠以上情況甚至完全消失。

3.2 芎麻湯有效部位對大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1陽性表達的影響

與正常組相比，模型組大鼠TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1陽性表達均顯著升高（P＜0.05）。與模型組相比，陽性組和芎麻湯有效部位各組大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1陽性表達均不同程度降低，除陽性對照組、芎麻湯乙酸乙酯提取物低劑量組的CGRP以及芎麻湯正丁醇提取物低劑量組的TRPV1外，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結果見圖1、表2。

表2 各組大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1陽性面積百分比（±s，n＝8）

表2 各組大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1陽性面積百分比（±s，n＝8）

a：與正常組相比，P＜0.05；b：與模型組相比，P＜0.05

組別正常組模型組陽性對照組芎麻湯乙酸乙酯提取物低劑量組芎麻湯乙酸乙酯提取物高劑量組芎麻湯正丁醇提取物低劑量組芎麻湯正丁醇提取物高劑量組RAMP1 3.852±0.318 5.331±0.298a 3.769±0.052b 3.354±0.147b 2.972±0.878b 3.643±0.497b 3.371±0.389b TRPV1 4.314±0.166 5.991±0.815a 4.699±0.468b 4.067±0.098b 4.711±0.615b 5.077±0.383 4.501±0.357b CGRP 4.210±1.149 5.851±0.791a 4.933±0.478 5.367±0.663 4.140±0.530b 4.584±0.863b 4.182±0.701b CRLR 3.591±0.711 5.224±0.461a 3.049±1.066b 3.088±0.472b 3.393±0.682b 4.227±0.236b 3.890±0.574b

圖1 各組大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1的免疫組織化學染色圖（×400）

3.3 芎麻湯有效部位對大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1 mRNA相對表達量的影響

與正常組相比，模型組大鼠TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1 mRNA相對表達量均顯著升高（P＜0.05）。與模型組相比，陽性對照組和芎麻湯有效部位各組大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1 mRNA相對表達量均不同程度降低，除陽性對照組的CRLR外，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結果見表3。

表3 各組大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1 mRNA相對表達量（±s，n＝8）

表3 各組大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1 mRNA相對表達量（±s，n＝8）

a：與正常組相比，P＜0.05；b：與模型組相比，P＜0.05

組別正常組模型組陽性對照組芎麻湯乙酸乙酯提取物低劑量組芎麻湯乙酸乙酯提取物高劑量組芎麻湯正丁醇提取物低劑量組芎麻湯正丁醇提取物高劑量組RAMP1 1.000±0.071 10.644±0.645a 5.632±0.586b 4.804±0.666b 3.187±0.428b 5.220±0.375b 3.906±0.378b TRPV1 1.006±0.106 5.860±1.213a 2.473±0.512b 2.860±0.343b 1.652±0.226b 3.806±0.786b 3.212±1.980b CGRP 1.000±0.073 9.051±0.344a 6.473±0.409b 6.121±0.494b 5.151±0.763b 5.379±0.455b 5.750±0.695b CRLR 1.004±0.088 4.921±0.899a 4.196±0.908 2.725±0.348b 2.352±0.978b 3.016±2.624b 1.636±0.275b

3.4 芎麻湯有效部位對大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1蛋白相對表達量的影響

與正常組相比，模型組大鼠TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1蛋白相對表達量均顯著升高（P＜0.05）。與模型組相比，陽性對照組和芎麻湯有效部位各組大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1蛋白相對表達量均不同程度降低，除芎麻湯正丁醇提取物低、高劑量組及乙酸乙酯提取物低劑量組的CRLR，以及正丁醇提取物低劑量組的TRPV1、RAMP1外，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結果見圖2、表4。

圖2 各組大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1的蛋白表達電泳圖

表4 各組大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1蛋白相對表達量（±s，n＝8）

表4 各組大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1蛋白相對表達量（±s，n＝8）

a：與正常組相比，P＜0.05；b：與模型組相比，P＜0.05

組別正常組模型組陽性對照組芎麻湯乙酸乙酯提取物低劑量組芎麻湯乙酸乙酯提取物高劑量組芎麻湯正丁醇提取物低劑量組芎麻湯正丁醇提取物高劑量組RAMP1 0.170±0.070 0.578±0.043a 0.255±0.031b 0.325±0.361b 0.295±0.050b 0.505±0.120 0.200±0.156b TRPV1 0.113±0.039 0.284±0.035a 0.181±0.051b 0.185±0.035b 0.120±0.028b 0.250±0.071 0.210±0.028b CGRP 0.177±0.021 0.538±0.045a 0.324±0.059b 0.260±0.170b 0.280±0.028b 0.220±0.028b 0.235±0.064b CRLR 0.190±0.046 0.423±0.083a 0.185±0.053b 0.225±0.205 0.170±0.042b 0.250±0.170 0.340±0.113

4 討論

偏頭痛是最常見的致殘性原發(fā)性頭痛[9]，嚴重影響患者的生活質量。2017年全球疾病負擔研究顯示，按傷殘損失健康生命年（years lived with disability，YLDs）計算，頭痛疾患是我國第8位致殘性疾病，而偏頭痛所致YLDs占頭痛疾患所致YLDs的82.5%[10]。偏頭痛在我國具有發(fā)病率高、致殘率高的特點，許多偏頭痛患者對西醫(yī)藥物治療依從性差、療效欠佳或不能耐受不良反應，導致急性鎮(zhèn)痛藥的濫用和頭痛的慢性化[9]。在偏頭痛防治方面，中醫(yī)具有一定優(yōu)勢，已有多部指南推薦可采用針灸或服用中藥等進行干預[11-12]。

證候是中醫(yī)治療的核心，是中藥復方干預的對象，運用病證結合的研究模式，有利于突出中醫(yī)藥優(yōu)勢[13]。電刺激三叉神經(jīng)節(jié)誘導引發(fā)的偏頭痛動物模型是目前偏頭痛研究較常用的模型，與中西醫(yī)臨床診斷標準的吻合度約60%[14]。附子屬辛、甘，大熱之品，久用，灼傷肝腎之陰而發(fā)生肝陽上亢[8]。又依據(jù)中醫(yī)“若有所墮墜，惡血在內而不去，……，則氣血凝結……”[15]及“世謂血塊為瘀，……，然即是離經(jīng)之血，雖清血鮮血，亦是瘀血”[16]的理論，以附子湯長期灌胃（即惡血），加上電刺激三叉神經(jīng)節(jié)的開顱手術導致的出血（即瘀血）等因素，可誘導大鼠出現(xiàn)血液黏滯度增高等血液流變學異常的瘀血證[17]。故對大鼠灌胃附子湯（4周）聯(lián)合電刺激三叉神經(jīng)節(jié)的方法，可從病和證兩方面綜合模擬肝陽上亢兼瘀血型偏頭痛模型。與單純偏頭痛模型和單純肝陽上亢證或瘀血證模型相比，該模型在研究芎麻湯治療偏頭痛的藥效評價及機制研究方面更具有優(yōu)勢。本研究結果顯示，肝陽上亢證模型大鼠更易被激惹，結膜充血、打斗及提尾時尖叫、驚跳、咬人的發(fā)生情況也明顯增多。經(jīng)電刺激誘導后，肝陽上亢兼瘀血型偏頭痛模型大鼠可出現(xiàn)咀嚼肌收縮、口鼻分泌物增多；清醒后出現(xiàn)節(jié)律性抖動頭部、過度理毛、甩頭、扭頭等行為變化，同時被毛蓬松無澤，大部分大鼠舌質紫暗或有瘀斑、瘀點等，但正常組大鼠均未出現(xiàn)以上變化，說明肝陽上亢兼瘀血型偏頭痛模型復制成功。

TRPV1是一種高鈣滲透性的非選擇性陽離子通道，主要分布于傷害性感覺神經(jīng)元。TRPV1又稱辣椒素受體，可被辣椒素等化學成分、酸（pH＜6）、熱刺激（溫度＞43℃）等激活，使陽離子（如Ca2+）內流，觸發(fā)神經(jīng)末梢釋放神經(jīng)肽類和興奮性氨基酸，最終引起大腦皮層痛覺形成[18]。目前，偏頭痛的發(fā)病機制尚無定論。有研究發(fā)現(xiàn)，一氧化氮、傘形酮、丙烯醛等能引起偏頭痛發(fā)作，其通過激活TRPV1通道，引起顱腦感覺神經(jīng)元的血管周圍末端釋放CGRP，引起神經(jīng)源性炎性反應；同時CGRP-R拮抗劑、CGRP單克隆抗體可阻斷此反應，即通過阻斷CGRP/CGRP-R信號通路能取得理想的鎮(zhèn)痛作用[19]。因此，本研究團隊推測，在偏頭痛三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)內抑制TRPV1-CGRP/CGRP-R信號通路中CGRP的釋放，阻斷神經(jīng)源性炎性反應，將是治療偏頭痛的一種新策略。本研究結果表明，附子湯灌胃聯(lián)合電刺激三叉神經(jīng)節(jié)顯著增加了大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1陽性表達、mRNA及蛋白相對表達量，導致TRPV1-CGRP/CGRP-R通路活化，說明附子湯灌胃聯(lián)合電刺激三叉神經(jīng)節(jié)引起了三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)激活，TRPV1-CGRP/CGRP-R通路的活化在肝陽上亢兼瘀血型偏頭痛發(fā)病過程中發(fā)揮了重要作用。芎麻湯有效部位均能不同程度下調肝陽上亢兼瘀血型偏頭痛模型大鼠TCC內TRPV1、CGRP、CRLR、RAMP1的陽性表達、mRNA及蛋白相對表達量，即能夠一定程度抑制附子湯灌胃聯(lián)合電刺激三叉神經(jīng)節(jié)所致的TRPV1-CGRP/CGRP-R通路的活化。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)芎麻湯防治偏頭痛的作用機制可能與抑制三叉神經(jīng)節(jié)血管系統(tǒng)中TRPV1-CGRP/CGRP-R信號通路活性有關。由于偏頭痛的發(fā)病機制和TRPV1通路非常復雜，且近期研究發(fā)現(xiàn)，腸道微生物也可能通過TRPV1、CGRP等參與偏頭痛的發(fā)生發(fā)展[20-21]，因此，芎麻湯防治偏頭痛的作用機制還需進一步研究和探討。