何 琴，馬潔瑤，陳 秧

(1 湖南醫(yī)藥學(xué)院，湖南 懷化 418000；2 湖南醫(yī)藥學(xué)院民族醫(yī)藥研究中心，侗醫(yī)藥研究湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 懷化 418000)

銅錘玉帶草[Pratiabegonifolia(Wall.) Lindl]又名小銅錘、地茄子、地鈕子、銅錘草等，為桔?？?Campanulaceae)銅錘玉帶草屬(PratiaGaud)一年生陰生草本植物，全草入藥，性味歸經(jīng)為辛、苦、平。其分布較為廣泛，在我國的貴州、湖南、四川、湖北、廣東、廣西和云南等地方均有分布，生于田邊、路旁、低山草披或疏林中的潮濕地[1]。具有祛風(fēng)除濕、活血化瘀、消炎解毒等功效，可用于治療風(fēng)濕疼痛，跌打損傷，月經(jīng)不調(diào)，目赤腫痛，乳癰，無名腫毒[2-5]，銅錘玉帶草的物質(zhì)成分研究報(bào)道較少，目前報(bào)道的有聚乙炔、黃酮類、高級(jí)脂肪酸和萜類化合物[6-8]，銅錘玉帶草具有藥食兩用的特點(diǎn)，果實(shí)可做成果脯，莖葉可被當(dāng)做野菜進(jìn)行烹飪食用[9]。目前該植物應(yīng)用僅限于民間治療，未得到全面研究和開發(fā)，文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，并沒有相關(guān)文獻(xiàn)對(duì)銅錘玉帶草的揮發(fā)性成分進(jìn)行研究。因此，本研究首次采用頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HS-SPME-GC-MS)對(duì)銅錘玉帶草的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析。

1 儀器與試藥

Thermo ScientificTMTrace 1300 ISQ LT氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國賽默飛世爾科技有限公司；Thermo Scientific AI 1310自動(dòng)進(jìn)樣器，美國賽默飛世爾科技有限公司；質(zhì)譜檢索數(shù)據(jù)庫：NIST 17；手動(dòng)固相微萃取裝置，美國Supelco公司；75 μm Carboxen/PDMS萃取纖維頭，美國Supelco公司；4 mL的頂空瓶，美國Supelco公司；Thermo Scientific TG-5MS型毛細(xì)管色譜柱(5%苯基二甲基聚硅氧烷，30 m×0.25 mm，0.25 μm)，美國賽默飛世爾科技有限公司；十萬分之一電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；中草藥粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司。

銅錘玉帶草的全草從湖南懷化購置，經(jīng)湖南醫(yī)藥學(xué)院汪冶教授鑒定為桔?？?Campanulaceae)銅錘玉帶草屬(PratiaGaud)的干燥全草，標(biāo)本保存在湖南醫(yī)藥學(xué)院民族醫(yī)藥研究中心。

2 方法與結(jié)果

2.1 固相微萃取提取揮發(fā)性組分

將適量銅錘玉帶草的干燥全草放入中藥粉碎機(jī)，研磨 2次，2 min/次，收集研碎后的粉末，置于密封袋中于陰涼干燥處保存?zhèn)溆谩Ｈ?0 mg銅錘玉帶草的全草粉末，置于容積為4 mL的頂空瓶中，將75 μm Carboxen/PDMS萃取纖維頭插入密封的頂空瓶上部，密閉頂空瓶，在55 ℃平臺(tái)上頂空萃取 30 min以吸收揮發(fā)物，將萃取頭抽出，迅速插入氣相色譜儀進(jìn)樣口中，300 ℃熱解析5 min拔出進(jìn)樣。

2.2 GC-MS分析條件

色譜柱為TG-5MS型毛細(xì)管色譜柱(5%苯基二甲基聚硅氧烷，30 m×0.25 mm，0.25 μm)，初始溫度50 ℃(保持3 min)，以2 ℃/min速率升溫至100 ℃(保持15 min)，以2 ℃/min的速率升溫至150 ℃(保持5 min)，再以10 ℃/min的速率升溫至280 ℃(保持8 min)；載氣為高純度He(純度為99.999%)；載氣流速為1.0 mL/min。進(jìn)樣口溫度保持300 ℃，分流比：50∶1。

離子源為EI源；離子源溫度280 ℃；傳輸線溫度： 250 ℃；電子能量：70 eV；掃描質(zhì)量范圍：50～620 amu。

2.3 結(jié) 果

銅錘玉帶草的揮發(fā)性成分總離子流圖如圖1所示。

根據(jù)總離子流圖進(jìn)行分析，各化合物峰通過NIST 17庫檢索，從中共鑒定出43種化學(xué)成分，占總揮發(fā)性成分的86.62%，用峰面積歸一化法對(duì)各化學(xué)成分進(jìn)行相對(duì)百分比含量的計(jì)算。結(jié)果如表1所示。

圖1 銅錘玉帶草的揮發(fā)性成分總離子流圖

表1 銅錘玉帶草的揮發(fā)性成分

續(xù)表1

3 討 論

在前期條件摸索中，作者曾嘗試采用水蒸氣蒸餾方法對(duì)銅錘玉帶草中的揮發(fā)性成分進(jìn)行提取，發(fā)現(xiàn)沒有明顯的揮發(fā)油被提取出來，后經(jīng)過文獻(xiàn)查閱得知，由于銅錘玉玉帶草這類草質(zhì)藥材質(zhì)地柔軟疏松，經(jīng)過采收、加工、干燥、貯存等過程后，揮發(fā)油容易散失[10]，而頂空固相微萃取技術(shù)具有高效、便捷、快速、無需溶劑、樣品用量少、綠色環(huán)保等特點(diǎn)，特別適合微量揮發(fā)性成分的富集，目前已被廣泛應(yīng)用于中藥單味藥材和中藥復(fù)方制劑的揮發(fā)性成分定性定量研究[11]。

本文應(yīng)用頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(HS-SPME-GC-MS)技術(shù)，對(duì)銅錘玉帶草中揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，在方法摸索中，選用了適用于氣體和小分子量化合物檢測的Carboxen/PDMS萃取纖維頭，另對(duì)萃取溫度和萃取時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)溫度對(duì)萃取效果具有較大的影響，隨著溫度的升高，總峰面積呈現(xiàn)先增后減的趨勢，萃取時(shí)間考察了30 min、40 min和50 min，未發(fā)現(xiàn)譜圖有很大區(qū)別，最后的萃取條件確定為：在55 ℃平臺(tái)上頂空萃取30 min以吸收揮發(fā)物。

從結(jié)果分析中可知銅錘玉帶草中主要揮發(fā)性成分為：β-石竹烯(11.64%)、順式-β-法呢烯(7.03%)、植酮(6.80%)、依蘭烯(5.64%)、二氫獼猴桃內(nèi)酯(4.63%)和(+)-δ-紫穗槐烯(3.95%)等，其中包括倍半萜類19種，醛類7種，酮類 5種，醇類3種，酯類2種，其他類型7種。倍半萜類成分的主要藥理活性包括抗腫瘤、抗炎、免疫抑制、抑菌和抗病毒等[12]，β-石竹烯在銅錘玉帶草揮發(fā)性成分中含量最高，研究表明其具有較好的抗炎活性，不僅能抑制LTB4、PGE2、NO和iNOS炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，而且能下調(diào)TNF-α、IL-1β、COX-2、5-LOX、FLAP、NF-κB-p65的表達(dá)[13]；植酮具有抗菌、鎮(zhèn)痛和抗炎活性；依蘭烯是一種香料成分[14]；二氫獼猴桃內(nèi)酯帶有香豆素樣香氣，可以用來調(diào)配煙用香精[15]；紫穗槐烯對(duì)金黃色葡萄球菌有顯著抑制作用[16]。綜上所述，推測銅錘玉帶草祛風(fēng)除濕、消炎解毒等功效與其豐富的倍半萜類成分有著密切關(guān)系，另β-石竹烯起著主要的抗炎作用。

4 結(jié) 論

本文首次通過頂空固相微萃取技術(shù)提取銅錘玉帶草中揮發(fā)性成分，并從中共鑒定出43種化學(xué)成分，占總揮發(fā)性成分的86.62%，其主要成分為倍半萜類化合物，其次為醛類、酮類化合物。該方法可快速鑒定銅錘玉帶草中的揮發(fā)性成分，為銅錘玉帶草的進(jìn)一步質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究奠定基礎(chǔ)。