馬春琳

平喘顆粒是處方藥，本制劑是蜜麻黃、杏仁、桔梗、枳殼、甘草、葶藶子、細(xì)辛、地龍、石膏等12味中藥制成的顆粒劑，其中桔梗、枳殼粉碎成細(xì)粉入藥。枳殼味苦、辛、酸，微寒。歸脾、胃經(jīng)。而善理氣寬中，行滯消脹。古今用于胸脅氣滯，脹滿疼痛，食積不化，痰飲內(nèi)停，臟器下垂。平喘顆粒中枳殼為臣藥，方中用量較大，其有效成分明確易于檢測(cè)，經(jīng)文獻(xiàn)及藥典檢索，高效液相色譜法（HPLC）常作為中成藥物組方中枳殼有效成分柚皮苷的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)[1-8]，因此依據(jù)藥典方法對(duì)其質(zhì)控成分柚皮苷進(jìn)行HPLC測(cè)定研究。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司，安捷倫1260）；分析天平（梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司，AB104-S）；分析天平（梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易（上海）有限公司，XS205DU）；純水機(jī)（密理博，Blix 10）；甲醇為色譜純，其他試劑為分析純；柚皮苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院，110722-201312）。

2 方法與結(jié)果

2.1 流動(dòng)相考察

由于本品為蜜麻黃、杏仁、桔梗、枳殼、甘草、葶藶子、細(xì)辛、地龍、石膏等12味中藥組成的復(fù)方醫(yī)院制劑，流動(dòng)相考察實(shí)驗(yàn)以方中臣藥枳殼的質(zhì)控成分柚皮苷為對(duì)象進(jìn)行優(yōu)化。參照藥典對(duì)柚皮苷分離度、保留時(shí)間、對(duì)稱因子、理論塔板數(shù)等進(jìn)行考察。

2.1.1 供試品溶液的制備 稱取本品約1 g，準(zhǔn)確稱量，放入帶塞子的錐形瓶中，加入25 ml甲醇，蓋上塞子，稱重，超聲處理30 min，冷卻，用甲醇補(bǔ)充重量，搖勻，過(guò)濾，得供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取適量柚皮苷對(duì)照品，加甲醇配成49.22 μg/ml溶液，即得。各溶液精密吸取10 μl，分別注入液相色譜儀，在283 nm處記錄峰面積。其中序號(hào)1乙腈∶0.1%磷酸溶液=（0～20 min：18∶82；20～22 min：18～30∶82～70；22～32 min：30∶70）；序號(hào)2乙腈∶0.1%磷酸溶液=20∶80。綜上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，條件2出峰時(shí)間過(guò)短，分離度稍差，條件1的出峰時(shí)間適中，分離度較好，可滿足檢測(cè)需求，因此選擇為流動(dòng)相。見表1。

表1 流動(dòng)相考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 專屬性試驗(yàn)

精密吸取橙皮苷對(duì)照液、陰性對(duì)照液和重復(fù)性試驗(yàn)中的供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀測(cè)定[9]。結(jié)果表明，對(duì)照品和供試品在同一位置都有相應(yīng)的色譜峰，保留時(shí)間一致。陰性對(duì)照色譜保留時(shí)間相同的位置沒(méi)有相應(yīng)色譜峰。結(jié)果表明其他藥味對(duì)測(cè)試結(jié)果沒(méi)有干擾。

2.3 耐用性試驗(yàn)

以建立的流動(dòng)相為基礎(chǔ)，稍微改變測(cè)定條件，對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算其中含量?？疾炝俗兓V條件，包括檢測(cè)波長(zhǎng)和色譜柱對(duì)該方法的耐用性。結(jié)果：樣品的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為0.042和0.043，表明耐用性良好。見表2～3。

表2 不同波長(zhǎng)考察

表3 不同色譜柱考察

2.4 重現(xiàn)性試驗(yàn)

以擬定的流動(dòng)相為基礎(chǔ)，在不同型號(hào)的液相色譜儀上進(jìn)行樣品測(cè)定，計(jì)算含量。以含量為依據(jù)，考察不同儀器對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，結(jié)果表明：RSD=3.0%，表明重現(xiàn)性良好。見表4。

2.5 線性關(guān)系的考察

精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液溶液1、2、5、8.35、10 ml用甲醇分別稀釋至25 ml，得質(zhì)量濃度為8.25、16.49、49.22、82.2、98.44的溶液，分別取10 ml注入液相色譜儀測(cè)定，記錄峰面積[9]。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為y=9.229 1x-2.524 2，r=0.999 7。結(jié)果表明，柚皮苷溶液在0.082 5～0.984 4 mg樣品量之間具有良好的線性關(guān)系。見表5、圖1。

圖1 柚皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

表5 線性關(guān)系考察

2.6 儀器精密度測(cè)試

精密吸取10 μl 2.1.2的對(duì)照品溶液，按既定的色譜條件注入液相色譜儀[9]。重復(fù)操作6次，測(cè)定柚皮苷峰面積，RSD=0.004 0。測(cè)試結(jié)果表明，該儀器的精密度良好。

2.7 樣品穩(wěn)定性測(cè)試

精密量取2.1.1項(xiàng)下的樣品溶液10 μl，2 h進(jìn)樣一次，即0、2、4、6、8、10 h。共6次，根據(jù)色譜峰面積計(jì)算，RSD=0.43。結(jié)果表明，樣品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定，可以滿足測(cè)定要求。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同批次（批號(hào)150313）平喘顆粒6份，按2.1.1項(xiàng)下制備的柚皮苷含量測(cè)定方法制備供試液。用液相色譜法測(cè)定峰面積并計(jì)算柚皮苷的含量。結(jié)果顯示RSD為1.17＜2%。該方法測(cè)定平喘顆粒中柚皮苷的重現(xiàn)性好。見表6。

表6 重復(fù)性試驗(yàn)考察結(jié)果

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

按照2.1.1供試品溶液的制備項(xiàng)下同法稱取本品約1 g，準(zhǔn)確稱量，放入帶塞子的錐形瓶中，加入25 ml甲醇，蓋上塞子，稱重，超聲處理30 min，冷卻，用甲醇補(bǔ)充重量，搖勻，過(guò)濾，得供試品溶液。取2.1.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液（49.22 μg/ml），即得對(duì)照品溶液。依法測(cè)得柚皮苷溶液回收率（n=6），分別為94.7%、101.3%、99.1%、101.7%、98.8%、98.8%，RSD為2.5%，加樣回收率良好。測(cè)定結(jié)果見表7。

表7 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.10 樣品測(cè)定 取6批次平喘顆粒，按2.1.1項(xiàng)下制備樣品溶液，既定色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算柚皮苷含量。方法學(xué)考察顯示，在藥材質(zhì)量、生產(chǎn)條件等各項(xiàng)因素一致情況下，樣品質(zhì)量穩(wěn)定。見表8。

表8 樣品含量測(cè)定結(jié)果(mg/g)

3 討論

平喘顆粒為本院制劑，療效確切，方中枳殼為臣藥，用量較大，其有效成分明確。查閱相關(guān)文獻(xiàn)和藥典記載，枳殼中有效成分為柚皮苷，HPLC測(cè)定平喘顆粒中柚皮苷的含量可作為該制劑的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)[1-8]。本研究表明，以乙腈-0.1%磷酸溶液（0～20 min：18∶82；20～22 min：18～30∶82～70；22～32 min：30∶70）為流動(dòng)相，流速1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)283 nm，對(duì)照品及樣品中組分均能達(dá)到基線分離，柚皮苷溶液在0.082 5～0.984 4 g呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，并且峰形良好：RSD=0.004 0＜2%，儀器精密度良好；供試品溶液在10 h內(nèi)呈現(xiàn)良好穩(wěn)定性，加樣回收率良好，該制劑可用HPLC來(lái)控制藥品質(zhì)量，能夠滿足測(cè)定需要。因此，本實(shí)驗(yàn)建立的HPLC測(cè)定平喘顆粒中枳殼柚皮苷含量，經(jīng)方法學(xué)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果考察，達(dá)到藥物檢測(cè)要求，可用于中藥處方平喘顆粒枳殼中柚皮苷的含量測(cè)定與質(zhì)量評(píng)價(jià)，能夠控制本院制劑平喘顆粒的質(zhì)量，保障患者用藥安全。