楊雨彤，李曉丹，武晁寧，魚(yú)瀛瀛，柴曉林，李麗娟

（晉中信息學(xué)院，山西 太谷 030801）

0 引言

大腸桿菌造成的腹瀉是常見(jiàn)疾病和高致死率病癥之一，是多種動(dòng)物感染性腹瀉的重要病原，并發(fā)現(xiàn)細(xì)菌性感染腹瀉多見(jiàn)于機(jī)體的腸道內(nèi)。大腸桿菌的持續(xù)性危害在全球范圍內(nèi)都有許多報(bào)道。研究發(fā)現(xiàn)腸道受到外界入侵屏障受損時(shí)，腸道可以積極抵御進(jìn)一步的損害。山西特產(chǎn)連翹茶（Forsythia suspensa），主治清熱、解毒、散結(jié)、消腫[1-3]。連翹的抗菌譜極廣，對(duì)常見(jiàn)的鏈球菌、沙門氏菌等都包含肉眼可見(jiàn)的抑菌效果[4]。利用連翹茶干預(yù)大腸桿菌感染的小鼠，對(duì)比健康小鼠，探討連翹茶改善腸道腹瀉效果。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

健康雄性SPF級(jí)小鼠35只，體重22～32 g，購(gòu)自太原康寶瑞實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司；連翹茶，購(gòu)自山西省晉城市陵川縣鄉(xiāng)土人家農(nóng)業(yè)綜合開(kāi)發(fā)有限公司；大腸桿菌購(gòu)自上海赫澎生物科技有限公司；石蠟、玻璃片、耐高溫塑料染色架、二甲苯溶液、各種濃度酒精、蘇木精溶液等購(gòu)自上海化邦生物科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 連翹茶提取物制備

稱取茶葉20 g，加蒸餾水300 mL，煮沸后過(guò)濾，茶葉放回鍋中再加蒸餾水300 mL，煮沸過(guò)濾，濾液倒入培養(yǎng)皿中，放置烘干箱100 ℃，待液體濃縮至膏狀不流動(dòng)。取膏體加入定量的蒸餾水中，測(cè)得其飽和水溶液為50 mg/ mL，配制50 mL連翹茶飽和水溶液以備灌胃使用。

1.2.2 試驗(yàn)動(dòng)物模型建立

取健康SPF級(jí)雄性小鼠30只，隨機(jī)分配3組，空白對(duì)照組（A組），連翹茶提取物組（B組），連翹茶加大腸桿菌組（C組），剩余的小鼠為試驗(yàn)備用鼠；試驗(yàn)總共進(jìn)行14 d，A組每天定點(diǎn)灌胃0.2 mL生理鹽水；B組每天定點(diǎn)灌胃0.2 mL連翹茶提取物飽和溶液；C組每天定點(diǎn)灌胃0.2 mL連翹茶提取物飽和溶液，第14天灌胃完畢后，腹腔注射0.2 mL大腸桿菌，見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)動(dòng)物組別灌胃情況

1.2.3 試驗(yàn)動(dòng)物處置、標(biāo)本采集

小鼠稱重并眼內(nèi)眥靜脈取血，分別在注射時(shí)、2、4、8 h后，測(cè)定其血常規(guī)。小鼠采取頸椎脫臼法將其處死。打開(kāi)腹腔，取出小鼠的完整腸道及肝臟；截取結(jié)腸、回腸中段約1 cm，用生理鹽水漂洗腸道內(nèi)容物后迅速將樣本浸泡至固定液中。

1.2.4 腸道標(biāo)本檢測(cè)方法

各小鼠截取結(jié)腸、回腸中段約1 cm，通過(guò)HE染色技術(shù)，觀察腸道染色情況，觀察連翹茶改善腸道腹瀉效果。

2 結(jié)果

2.1 體重

小鼠隨機(jī)分3組，組間無(wú)明顯差異，經(jīng)14 d灌胃，AB組體重平穩(wěn)上升，C組體重明顯下降，見(jiàn)表2。

表2 不同天數(shù)各組別小鼠體重及存活率

2.2 精神狀態(tài)

大體觀察可見(jiàn)A組小鼠精神狀態(tài)較試驗(yàn)前無(wú)明顯變化，良好，活潑、被毛有光澤，活潑好動(dòng)；B組小鼠精神輕微低沉，被毛輕微毛躁發(fā)干、有少許光澤，稍有活動(dòng)、飲食欲較好；C組小鼠可見(jiàn)精神差、飲食減少、基本不活動(dòng)、被毛蓬亂、無(wú)光澤。

2.3 腸道外觀情況

A組，小鼠腸道組織無(wú)明顯異常，組織紅潤(rùn)，腸壁完整而富有彈性，如圖1a；C組腸壁腸管壁充血、部分有腸管壞死，明顯癱軟，腸壁有明顯溶解、透明，有腹水，腹腔有少量暗紅色積液，如圖1c；B組腸壁亦有癱軟現(xiàn)象，較C組程度較輕，如圖1b。連翹茶明顯有抑菌作用。

圖1 各組小鼠腸道解剖展開(kāi)圖對(duì)比

2.4 腸道切片情況

光學(xué)顯微鏡下，A組小鼠腸道組織腺體結(jié)構(gòu)，排列整齊完整，粘膜及粘膜下層組織完好，C組，小鼠腸道可見(jiàn)細(xì)胞間隙增大，粘膜及粘膜下有部分充血有腫脹，細(xì)胞排列雜亂，無(wú)規(guī)則，血管稍有擴(kuò)張，有發(fā)炎癥狀，如圖5；B組癥狀比C組程度輕，見(jiàn)圖2。

圖2 各組小鼠腸道結(jié)腸HE切片圖對(duì)比（HE染色，40×）

2.5 小鼠血常規(guī)情況

AB組無(wú)明顯差異，白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞均在正常范圍內(nèi)；C組出現(xiàn)白細(xì)胞數(shù)目驟然升高，淋巴細(xì)胞及比例也相應(yīng)地升高連翹起到一定的緩解作用，見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠血常規(guī)

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期結(jié)果一致，連翹茶對(duì)于大腸桿菌的腸黏膜有一定的保護(hù)作用，盡管本次果沒(méi)有十分顯著，但可直觀看到連翹茶對(duì)腸道起到一定保護(hù)作用。連翹茶對(duì)于大腸桿菌的腸黏膜有一定的保護(hù)作用，作用明顯，可減輕腸道損傷。致病性大腸桿菌導(dǎo)致腹瀉在畜牧飼養(yǎng)中頻繁發(fā)生，為連翹制成新型中獸藥提供思路。