王富偉 ， 武乃雯 ， 陳 鵬 ， 朱春燕 ， 高 健

(1. 中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院 ， 北京 海淀 100193 ； 2. 北京首農(nóng)畜牧發(fā)展有限公司 ， 北京 大興 100076 ；3. 上海市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全中心 ， 上海 青浦 201708)

奶牛乳房炎是乳腺組織的炎癥反應，是奶牛場中發(fā)病率最高的疾病之一，其發(fā)病與病原微生物、奶牛自身狀況、環(huán)境和管理等因素都密切相關。臨床型乳房炎通常表現(xiàn)為患病乳區(qū)的乳汁異常，乳區(qū)紅腫熱痛，患病奶牛出現(xiàn)全身癥狀等[1]。乳房炎發(fā)病率高、控制難度大，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。臨床型乳房炎的損失包括使用抗生素造成的棄奶、治療費用，以及繼發(fā)的淘汰和產(chǎn)量下降損失等[2]。在我國北方，尤其是河北地區(qū)，大型規(guī)?；膛鲈絹碓蕉?，彼此之間的管理模式相差甚遠。為探究河北地區(qū)奶牛乳房炎發(fā)病特征，本研究團隊對河北省部分規(guī)模化奶牛場的年發(fā)病率、發(fā)病特征和病原菌流行狀況數(shù)據(jù)進行收集、整理和分析，利用整體性的調(diào)查結果，制定符合現(xiàn)階段臨床乳房炎特征的針對性防控和治療方案。

1 材料與方法

1.1 牛場信息 收集河北省內(nèi)19個規(guī)?；膛?存欄量600～2 500頭)信息，包括存欄量和乳房炎的年發(fā)病率，為保護奶牛場的個體隱私，本調(diào)查對發(fā)病特征進行整體式歸納，不進行任何單一牛場的信息分析，不進行牛場間的對比。

1.2 臨床乳房炎發(fā)病信息 收集2020年度臨床型乳房炎發(fā)病率及部分乳房炎患病奶牛(n=1 807)的個體信息，包括發(fā)病時胎次(診斷出臨床癥狀時，奶牛產(chǎn)犢第n次)、發(fā)病時泌乳天數(shù)(診斷出臨床癥狀的當天，奶牛處于本胎次產(chǎn)犢后第n天)、發(fā)病乳區(qū)(觀察者站于牛后，靠近觀察者的左側為左后，右側為右后，遠離觀察者的左側為左前，右側為右前；發(fā)病乳區(qū)大于1個時判定為多乳區(qū)感染)、嚴重程度(僅有乳汁的肉眼可見變化，乳房及奶牛均正常判斷為輕度；乳汁異常，乳房出現(xiàn)紅熱腫痛，奶牛無全身癥狀判斷為中度；局部異常的同時，奶牛出現(xiàn)發(fā)熱、食欲下降、沉郁等全身癥狀判斷為重度)。將所有臨床型乳房炎發(fā)病信息合并后，進行綜合分析，歸納出臨床型乳房炎在各項條目下的發(fā)病特征。

1.3 采樣 對部分乳房炎奶牛的患病乳區(qū)(n=266)進行無菌采樣，所有奶牛采樣前均未進行抗生素治療，首先棄去前3把奶，用藥浴液對乳頭皮膚進行消毒，擦干后，使用75%酒精棉球反復擦拭乳頭孔，自然風干后，采集5～10 mL患病乳區(qū)奶樣。采樣后標記牛號和發(fā)病乳區(qū)，置于4 ℃冰箱保存待檢。

1.4 微生物培養(yǎng) 檢測病原微生物時將奶樣恢復室溫，搖勻后接種于血瓊脂培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h后分離純化，提取純化菌株的DNA，并進行16S rDNA測序，通過基因序列分析鑒定病原菌[3]。

2 結果

2.1 存欄量與年發(fā)病率 結果如圖1所示，在19個奶牛場中，最大存欄量為2 503頭，同時年發(fā)病率最低，為15.9%；最小存欄量為595頭，年發(fā)病率為40.4%；最高年發(fā)病率為65.4%，對應存欄量為713頭。

圖1 存欄量與年發(fā)病率Fig.1 Number of livestock and annual incidence rate

2.2 臨床型乳房炎發(fā)病的泌乳天數(shù)分布 結果如圖2所示，在1 807條臨床型乳房炎發(fā)病信息中，411例為奶牛產(chǎn)后30 d內(nèi)發(fā)病，占比22.7%；993例為奶牛產(chǎn)后31～150 d發(fā)病，占比55.0%；403例為奶牛產(chǎn)后大于150 d發(fā)病，占比22.3%。

2.3 臨床型乳房炎發(fā)病的乳區(qū)分布 結果如圖3所示，在1 807條臨床型乳房炎發(fā)病信息中，僅發(fā)生于單乳區(qū)的病例數(shù)為1 749例，占總發(fā)病數(shù)的96.8%。其中，發(fā)生于前2個乳區(qū)的病例數(shù)為1 018例，占單乳區(qū)發(fā)病數(shù)的58.2%；發(fā)生于后2個乳區(qū)的病例數(shù)為731例，占單乳區(qū)發(fā)病數(shù)的41.8%。發(fā)生于多乳區(qū)的病例數(shù)為58例，占總發(fā)病數(shù)的3.2%。

圖3 不同乳區(qū)的臨床型乳房炎發(fā)病數(shù)量Fig.3 Number of clinical mastitis cases in different quarters

2.4 不同嚴重程度的臨床型乳房炎發(fā)病分布 結果如圖4所示，在1 807條臨床型乳房炎發(fā)病信息中，輕度臨床型乳房炎為1 163例，占比64.4%；中度臨床型乳房炎為430例，占比23.8%；重度臨床型乳房炎為214例，占比11.8%。

圖4 不同嚴重程度的臨床型乳房炎發(fā)病數(shù)量Fig.4 Number of clinical mastitis cases with different severity

2.5 引起臨床型乳房炎的病原菌種類 結果如表1所示，在進行病原菌培養(yǎng)的266份臨床型乳房炎奶樣中，有49份為陰性，有16份為污染(3種及以上病原菌生長)。在201份病原菌陽性奶樣中，128份檢出革蘭陰性桿菌，以肺炎克雷伯桿菌和大腸埃希菌為主；此外，22份奶樣檢出凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)，檢出率為10.9%。在所有樣品中，環(huán)境性病原菌(革蘭陰性桿菌、CNS、乳房鏈球菌、巴黎鏈球菌)檢出率為86.1%(173/201)。

表1 主要病原菌種類及其分離率Table 1 Species and isolation rate of main pathogens

3 討論

本調(diào)查較系統(tǒng)性地分析了臨床型奶牛乳房炎在我國河北地區(qū)規(guī)?；膛鲋械陌l(fā)病特征，涉及牛場19個，其中9個存欄量大于1 500頭，占調(diào)查牛場總數(shù)的47%。本調(diào)查發(fā)現(xiàn)，臨床型乳房炎發(fā)病率(年)與奶牛場規(guī)模沒有明顯相關性，即使存欄量很大(超過2 500頭)，只要做好乳房炎防控工作，也可以將其發(fā)病率控制在較低水平上(每年15%左右)。

乳房炎發(fā)病與泌乳天數(shù)之間具有一定相關性。在本調(diào)查中，泌乳高峰期(31～150 d)臨床型乳房炎的病例占比最高，達到總發(fā)病頭數(shù)的一半之上(55.0%)；泌乳初期臨床型乳房炎發(fā)病頭數(shù)逐漸增加，而泌乳末期發(fā)病頭數(shù)逐漸減少。與趙蘭寧等[1]的報道相比，河北地區(qū)奶牛乳房炎在泌乳前、中期高發(fā)，分析其可能原因為:首先，奶牛場對于干奶藥和乳頭封閉劑的使用不夠重視，導致環(huán)境中的病原菌在干奶期進入乳房，導致泌乳早期發(fā)生乳房炎[4]；其次，奶牛達到泌乳高峰后，產(chǎn)奶量上升，乳腺負擔加重，不僅會稀釋乳房內(nèi)的免疫細胞，還會導致擠奶時間延長、乳頭孔受損[5-6]；此外，奶牛躺臥時也會因為乳房內(nèi)壓力過大導致漏奶等現(xiàn)象，病原菌更容易通過糞便、墊料等逆行進入乳房，引起乳房炎的高發(fā)[7-8]。根據(jù)河北地區(qū)規(guī)模化奶牛場中乳房炎發(fā)病的泌乳階段分布特征，本研究團隊建議：做好擠奶衛(wèi)生和操作人員手臂消毒；注意擠奶操作規(guī)范，前藥浴、擦干、驗奶、上杯、后藥浴每一步嚴格進行；確保擠奶設備運行良好，無脫杯、漏氣等情況；設置合理的乳頭末端真空壓及脈動參數(shù)，以縮短掛杯擠奶的時間[7,9]。此外，在泌乳高峰期應給予充足的維生素和微量元素，提高奶牛乳腺免疫力[10]。

在奶牛的4個乳區(qū)中，前乳區(qū)的乳房炎發(fā)病率更高，可能是由于在前藥浴時對前2個乳頭的消毒不夠徹底，如藥浴液不能徹底覆蓋乳頭表面，尤其是乳頭背側面。與病原微生物培養(yǎng)結果(以環(huán)境性病原菌感染為主)結合后分析得出，前藥浴的主要作用是殺滅環(huán)境性病原菌，對于降低臨床型乳房炎的發(fā)病率至關重要[11]。由本調(diào)查可知，不恰當?shù)那八幵〔僮鲿黾忧叭閰^(qū)乳房炎發(fā)病占比及環(huán)境性乳房炎的發(fā)病率。本調(diào)查結果表明，河北地區(qū)引起奶牛臨床型乳房炎的主要病原菌為環(huán)境性病原菌,符合國內(nèi)外臨床型乳房炎發(fā)生的模式[12]。

肺炎克雷伯桿菌和大腸埃希菌是最常見的革蘭陰性菌，且都是環(huán)境性病原菌[13]。與以前報道[13]相似，這2種病原菌為河北地區(qū)臨床型乳房炎源性主要病原菌，通?？梢詮膲|料、糞便、污水和動物體表等處分離。革蘭陰性桿菌引起的乳房炎患病牛通常癥狀較重，可能出現(xiàn)體溫升高、產(chǎn)奶量下降、食欲減退和脫水，甚至起臥困難等癥狀[2,14]。因此，針對此類乳房炎應重視抗炎治療。

評估臨床型乳房炎的嚴重程度在大型規(guī)模化牧場的管理中是非常重要的環(huán)節(jié)，可以檢驗奶廳工人是否能及時、準確地揭發(fā)臨床型乳房炎發(fā)病牛[15]。一般情況下，輕度乳房炎占比65%，中度乳房炎占比30%，重度乳房炎占比5%是較為合理的比例[15]。在本調(diào)查中，輕度乳房炎占比和前述研究相符，說明在所調(diào)查的奶牛場中，擠奶工人在揭發(fā)乳房炎時較為認真負責且診斷合理；而重度乳房炎占比稍高，可能與肺炎克雷伯桿菌和大腸埃希菌感染率高有關。