呂新建，石貴福，王合群

(1.駐馬店市第一人民醫(yī)院 消化內(nèi)科，河南 駐馬店 463000；2.駐馬店市中心醫(yī)院 感染科，河南 駐馬店 463000)

抗病毒治療是抑制乙肝病毒復(fù)制的重要措施，對(duì)修復(fù)肝損傷、提高肝功能具有重要作用。而近年研究指出，乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)基因異質(zhì)性不僅可影響乙肝的流行病學(xué)特點(diǎn)，還可影響病毒變異、疾病預(yù)后及抗病毒治療的應(yīng)答[1]。近年，隨分子生物學(xué)發(fā)展，血清學(xué)、病毒學(xué)定量檢測(cè)廣泛應(yīng)用于臨床，HBV檢測(cè)主要有乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B virus e antigen，HBeAg)等血清學(xué)指標(biāo)與HBV DNA等病毒學(xué)指標(biāo)；HBeAg、HBeAg主要反映免疫表達(dá)及抗原抗體體系，DNA載量則直接反映病毒復(fù)制[2-4]。因此，HBV基因分型及HBV DNA定量檢測(cè)逐漸應(yīng)用于臨床診斷，關(guān)于HBV基因型與HBeAg表達(dá)、DNA載量之間的相關(guān)性研究逐漸成為關(guān)注點(diǎn)，但其結(jié)論尚存在爭(zhēng)議。本研究選取152例HBsAg低反應(yīng)性乙肝患者，檢測(cè)、分析其HBeAg表達(dá)與HBV基因型、DNA載量的關(guān)系，以期為HBsAg低反應(yīng)性乙肝的臨床診斷、病情評(píng)估及抗病毒治療提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年4月至2021年10月駐馬店市第一人民醫(yī)院收治的152例HBsAg低反應(yīng)性乙肝患者，HBV基因分型為B基因型43例(28.29%)，C基因型102例(67.11%)，D基因型4例(1.97%)，B/C混合基因型2例(1.32%)，C/D混合基因型2例(1.32%)。B基因型男28例，女15例，年齡22～56(39.12±8.37)歲；C基因型男63例，女39例，年齡23～61(42.25±9.23)歲；D基因型男3例，女1例，年齡分別為22、38、36、55歲；B/C混合基因型男2例，年齡分別為19、54歲；C/D混合基因型男1例，女1例，年齡分別為21、59歲。各基因型HBsAg低反應(yīng)性乙肝患者性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2 選例標(biāo)準(zhǔn)(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)》診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；首次發(fā)現(xiàn)HBsAg陽(yáng)性；HBsAg定量<1 000 IU·L-1；年齡>18歲；既往無(wú)抗乙肝病毒治療史，近6個(gè)月無(wú)抗纖維化藥物、免疫調(diào)節(jié)劑用藥史；患者及近親屬了解本研究并簽署知情同意書(shū)。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：人類(lèi)免疫缺陷病毒感染；伴有失代償期肝硬化；存在藥物性肝病、酒精性肝病、其他自身免疫性肝??；處于哺乳期、妊娠期；存在惡性腫瘤疾??；存在語(yǔ)言、精神障礙。

1.3 治療方法入院后均接受系統(tǒng)保肝措施，給予恩替卡韋(福建廣生堂藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)H20110172，規(guī)格：0.5 mg)抗病毒治療，口服每日0.5 mg，連續(xù)治療3個(gè)月。

1.4 HBV基因分型采用熒光PCR定量?jī)x(德國(guó)羅氏診斷有限公司生產(chǎn)，型號(hào)Lightcycle 480)，以多對(duì)型特異性引物巢式PCR，進(jìn)行擴(kuò)增處理，將PCR產(chǎn)物分別置于瓊脂糖凝膠(3%)中進(jìn)行電泳，加入低相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)志物，以電泳條帶長(zhǎng)度進(jìn)行基因型判定，各HBV基因分型電泳條帶：A基因型68 bp、B基因型281 bp、C基因型122 bp、D基因型119 bp、E基因型167 bp、F基因型97 bp。引物由上海英駿生物公司合成。

1.5 觀察指標(biāo)(1)對(duì)比不同HBV基因型患者基線肝功能指標(biāo)[基線丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)、白蛋白(albumin，ALB)、甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)、膽堿酯酶(cholinesterase，CHE)水平]、HBeAg轉(zhuǎn)陰率及ALT復(fù)常率。(2)對(duì)比不同HBV基因型治療前、治療3個(gè)月后的HBsAg、HBeAg表達(dá)與DNA載量。(3)分析不同HBV基因型HBsAg與HBeAg表達(dá)、DNA載量的相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 不同HBV基因型患者基線肝功能、HBeAg轉(zhuǎn)陰率、ALT復(fù)常率對(duì)比152例HBsAg低反應(yīng)性乙肝患者中由于D基因型、B/C混合基因型、C/D混合基因型共8例，例數(shù)較少，故僅將B、C基因型納入分析比較。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，B基因型乙肝患者HBeAg轉(zhuǎn)陰率較C基因型乙肝患者高(P<0.05)，B、C基因型乙肝患者基線ALB、CHE、ALT、AFP水平及ALT復(fù)常率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同HBV基因型患者基線肝功能、HBeAg轉(zhuǎn)陰率、ALT復(fù)常率對(duì)比

2.2 不同HBV基因型的HBsAg、HBeAg表達(dá)與DNA載量治療前B、C基因型的HBsAg、HBeAg表達(dá)與DNA載量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療3個(gè)月后B基因型HBsAg較C基因型低，HBeAg表達(dá)較C基因型高(P<0.05)；B、C基因型DNA載量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同HBV基因型的HBsAg、HBeAg表達(dá)與DNA載量

2.3 不同HBV基因型HBsAg與HBeAg表達(dá)、DNA載量的相關(guān)性B基因型的HBsAg與HBeAg表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.486，P<0.05)，HBsAg與DNA載量無(wú)相關(guān)性(P>0.05)；C基因型的HBsAg與HBeAg表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.419，P<0.05)，HBsAg與DNA載量無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同HBV基因型HBsAg與HBeAg表達(dá)、DNA載量的相關(guān)性

3 討論

乙肝是由HBV感染所致傳染性肝臟損害疾病，我國(guó)依處于乙肝中度流行區(qū)[6]?，F(xiàn)階段，臨床免疫球蛋白的應(yīng)用、乙肝疫苗的廣泛普及，均可能引發(fā)HBsAg變異低反應(yīng)性表達(dá)[7]。余占娟等[8]研究表示低反應(yīng)性HBsAg乙肝患者主要為HBV C基因型，本研究C基因型占67.11%，與其研究相似，其次為B基因型(28.29%)，基因分型占比差異可能與標(biāo)本數(shù)量、取樣方法有關(guān)。目前關(guān)于HBV基因型與HBeAg、HBV DNA載量之間的關(guān)系成為臨床研究重點(diǎn)，進(jìn)一步明確其關(guān)系，對(duì)HBsAg低反應(yīng)性乙肝患者診斷及病情評(píng)估具有臨床指導(dǎo)意義。

HBsAg水平可反映乙肝病毒復(fù)雜狀態(tài)及患者病情程度；HBeAg是HBV病毒的復(fù)制指標(biāo)；HBV DNA可反映肝臟組織內(nèi)的病毒復(fù)制轉(zhuǎn)錄活動(dòng)的活躍程度。張小曼等[9]報(bào)道顯示，檢測(cè)HBsAg定量與DNA載量有利于了解HBV病毒復(fù)制情況。乙肝患者機(jī)體內(nèi)HBV復(fù)制活躍，可增強(qiáng)乙肝患者體液免疫應(yīng)答及細(xì)胞免疫，導(dǎo)致不同程度的肝損傷[10]。張榮芳等[11]研究指出，慢性乙肝患者治療前及治療初期血清HBV DNA水平與HBsAg、HBeAg相關(guān)。血清ALT、ALB、AFP、CHE是反映肝損傷的重要指標(biāo)[12]。本研究顯示，B基因型乙肝患者HBeAg轉(zhuǎn)陰率較C基因型乙肝患者高，治療3個(gè)月后B基因型HBsAg較C基因型低，HBeAg表達(dá)較C基因型高，提示不同基因型病毒的復(fù)制活躍程度存在一定差異，C基因型病毒致病性強(qiáng)，易造成患者免疫耐受；與C基因型乙肝患者相比，B基因型乙肝患者免疫應(yīng)答能力較強(qiáng)。張玲等[13]研究表示，乙肝患者HBV-DNA載量與其肝功能有關(guān)，且有利于臨床HBV復(fù)制情況的評(píng)估及治療方案的選擇。本研究中B基因型、C基因型乙肝患者基線ALB、CHE、ALT、AFP水平及ALT復(fù)常率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B、C基因型HBsAg與DNA載量無(wú)明顯相關(guān)性，可能與低反應(yīng)性HBsAg乙肝患者HBsAg水平有關(guān)，機(jī)體尚無(wú)明顯癥狀、體征表現(xiàn)。本研究相關(guān)性分析顯示，B、C基因型HBsAg與HBeAg表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)，HBeAg表達(dá)、DNA載量及基因型聯(lián)合監(jiān)測(cè)，有利于臨床診斷、評(píng)估低反應(yīng)性HBsAg乙肝患者病情程度，避免臨床對(duì)低反應(yīng)性HBsAg患者的誤診、漏診，對(duì)臨床個(gè)體化調(diào)整抗病毒治療方案具有指導(dǎo)意義。

綜上所述，HBsAg低反應(yīng)性乙肝患者HBsAg與HBeAg表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，與DNA載量相關(guān)性不明顯，不同基因型間HBsAg、HBeAg表達(dá)與DNA載量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，明確HBsAg與HBeAg表達(dá)的關(guān)系并及時(shí)干預(yù)，有利于臨床診斷、治療及患者預(yù)后改善。