左軍鳳，熊馬劍，朱碧君

江西省藥品檢驗(yàn)檢測研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029

中藥材中含有揮發(fā)性成分的品種較多，如丁香、八角茴香、廣藿香、川芎、薄荷、艾葉、姜黃等。中藥揮發(fā)性成分主要來源于芳香類中藥，由多種成分組成，除含有脂肪族和芳香族的烴及含氧化物外，大多含萜類。萜類化合物在抗微生物、抗炎、抗腫瘤、抗菌抑病毒等方面發(fā)揮著重要的作用［1-6］，特別是單萜類化合物在抗血栓、抗氧化、改善血管彈性和調(diào)節(jié)心血管功能等方面有顯著的優(yōu)勢和潛力［7-12］。因此，為了更好地控制這一類中藥制劑的產(chǎn)品質(zhì)量，本文采用氣相色譜法，通過方法學(xué)研究建立了中藥制劑中11 種揮發(fā)性成分的含量測定方法，為行業(yè)完善相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供一點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

7890A 型氣相色譜儀，美國安捷倫公司；AL204-IC 型電子天平，美國梅特勒-托利多公司；CTC-256 型恒溫恒濕實(shí)驗(yàn)箱，德國美墨爾特公司；KQ-500DE 型超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 試藥

芳樟醇對照品，批號111503-201603，含量97.8%；桉油精對照品，批號110788-201506，含量98.4%；棕櫚酸甲酯對照品，批號190030-201604，含量100.0%；α-蒎烯對照品，批號110897-201803，含量99.9%；β-蒎烯對照品，批號111827-201202，含量100.0%；樟腦對照品，批號110747-201810，含量99.0%；薄荷腦對照品，批號110728-200506，含量100.0%；冰片對照品，批號110743-201706，含量97.6%；以上對照品均購自中國食品藥品檢定研究院。藁本內(nèi)酯對照品，批號72570008，含量100.0%；丹皮酚對照品，批號74330010，含量100.0%；以上二種對照品均購自上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。氧化石竹烯對照品，批號Y01N7N23918，含量100.0%，購自上海源葉生物科技有限公司。無水乙醇，批號2016012，色譜純，購自永華化學(xué)科技（江蘇）有限公司。

1.3 樣品

31 批次中藥制劑，來源于國內(nèi)31 家藥品生產(chǎn)企業(yè)。主要劑型有顆粒劑、散劑、丸劑和片劑。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：HP-Innowax 毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.15 μm）；柱溫：初始溫度60 ℃，保持2 min，然后以20 ℃/min 升溫至200 ℃；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；檢測器溫度：220 ℃；載氣：氮?dú)猓涣魉?.0 mL/min；分流比10∶1。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液取各對照品適量，精密稱定，分別用無水乙醇使溶解并稀釋成各含50 μg/mL 的對照品儲備液，再吸取各對照品儲備液適量混合并稀釋成不同濃度的混合對照品溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液取單包裝樣品，剪開，將內(nèi)容物轉(zhuǎn)入錐形瓶中，精密加入無水乙醇20 mL，稱定重量，超聲提取（200 W，40 kHz）30 min，放冷，補(bǔ)足減失的量，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 空白溶液取同批次無水乙醇，作為空白溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取對照品混合溶液、供試品溶液、空白溶液分別進(jìn)樣，結(jié)果11 種對照品分離良好，在色譜圖中按出峰時間由左到右依次為：α-蒎烯、β-蒎烯、桉油精、樟腦、芳樟醇、薄荷腦、冰片、氧化石竹烯、棕櫚酸甲酯、丹皮酚、藁本內(nèi)酯，空白溶液無干擾，供試品溶液色譜中相應(yīng)成分出峰時間與對照品一致，見圖1。

圖1 氣相色譜圖：A.混合對照品溶液；B.供試品溶液；C.空白溶液

2.4 線性關(guān)系考察

取各對照品混合液，分別精密吸取1 μL 注入氣相色譜儀，以濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，由于冰片分為左旋結(jié)構(gòu)和右旋結(jié)構(gòu)，在本實(shí)驗(yàn)條件下出雙峰，結(jié)果以兩個峰面積之和來計(jì)算，11 種揮發(fā)性成分在線性范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，見表1。

表1 線性關(guān)系 μg/mL

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下混合對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6 次，結(jié)果11 種揮發(fā)性成分峰面積的RSD 在1.8%～5.0%之間，表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

選取小兒豉翹清熱顆粒，按“2.2.2”項(xiàng)下處理，制備6 份供試品溶液進(jìn)行測定，結(jié)果檢出α-蒎烯、β-蒎烯、薄荷腦和藁本內(nèi)酯，其余成分未檢出，RSD分別為3.3%、4.8%、3.3%和4.1%，表明重現(xiàn)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn)

選取“2.6”項(xiàng)下同批次制劑，稱取1/2 袋內(nèi)容物，將內(nèi)容物轉(zhuǎn)入錐形瓶中，加入約相當(dāng)于制劑中對照品含量80%、100%、120%的混合對照品溶液各2 份，按“2.2.2”項(xiàng)下處理，測定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。11 種揮發(fā)性成分回收率在90.9%～104.8%之間，RSD值在2.4%～6.0%之間，表明回收率良好。結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2（續(xù)）

2.8 檢出限

取混合對照品溶液適量，逐級稀釋，以信噪比3∶1 計(jì)算檢出限，α-蒎烯、β-蒎烯、桉油精、樟腦、芳樟醇、薄荷腦、冰片、氧化石竹烯、棕櫚酸甲酯、丹皮酚和藁本內(nèi)酯的檢出限分別為0.25 μg/mL、0.25 μg/mL、0.30 μg/mL、0.40 μg/mL、0.29 μg/mL、0.25 μg/mL、0.49 μg/mL、0.30 μg/mL、0.40 μg/mL、0.50 μg/mL 和0.50 μg/mL，表明靈敏度良好。

2.9 供試品含量測定

采用所建立的方法對來源于31 家藥品生產(chǎn)企業(yè)的31 批次中藥制劑進(jìn)行測定，結(jié)果有7 批次中藥制劑中檢出上述揮發(fā)性成分，主要檢出成分有樟腦、薄荷腦、藁本內(nèi)酯、冰片、芳樟醇、α-蒎烯、β-蒎烯，見表3。

表3 樣品測定結(jié)果 mg/袋

3 討論

本研究建立了氣相色譜法同時測定中藥制劑中11 種揮發(fā)性成分的方法并用于31 批次中藥制劑樣品的分析測定。建議藥品生產(chǎn)企業(yè)，對于生產(chǎn)的制劑含有相關(guān)的揮發(fā)性成分，尤其是揮發(fā)性成分具有重要功效的，可借鑒本方法來控制產(chǎn)品的質(zhì)量，以保障患者的用藥安全。