陳 煒，李冠武

（1．廣東精正司法鑒定中心，廣東 汕頭 515041；2．汕頭大學(xué)司法鑒定中心，廣東 汕頭 515041；3．汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院，廣東 汕頭 515041）

1 案例資料

被檢父和孩子母親為給女兒和兒子辦理戶(hù)籍事宜，前來(lái)進(jìn)行親子鑒定。分別用FTA卡采集4人的指尖血備檢。

分別采用HuaxiaTMPlatinum PCR擴(kuò)增試劑盒（美國(guó)ABI公司）和HEALTH Gene STRtyper-21G Plus擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒（海爾施基因科技公司），采用10 μL擴(kuò)增體系對(duì)4人的FTA血卡直接進(jìn)行短串聯(lián)重復(fù)序列復(fù)合PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物用3130XL基因分析儀（美國(guó)ABI公司）進(jìn)行電泳檢測(cè)及GeneMapper軟件判讀基因分型。

檢驗(yàn)結(jié)果分析，被檢父和孩子母親與女兒在每一個(gè)常染色體STR基因座的基因分型都遵循孟德?tīng)栠z傳規(guī)律。通過(guò)計(jì)算得到其累積親權(quán)指數(shù)大于10 000，結(jié)果支持被檢父和孩子母親為女兒的生物學(xué)父母親。

在HuaxiaTMPlatinum PCR擴(kuò)增試劑盒中，被檢父和孩子母親與兒子之間的22個(gè)非性別基因座中，只有vWA基因座不符合孟德?tīng)栠z傳規(guī)律。在vWA基因座，被檢父分型為“14，18”，母親分型為“17”，兒子分型為“14”（如圖1）。在該基因座上，母子基因分型均為純合子且不符合遺傳規(guī)律。結(jié)合已與被檢父、孩子母親確定親子關(guān)系的女兒在vWA基因座的分型“17，18”，判斷母子存在多步突變的可能性極小，懷疑為等位基因丟失。經(jīng)STRtyper-21G Plus試劑盒重復(fù)檢驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)孩子母親與兒子在vWA基因座均丟失等位基因“18”。在vWA基因座，母親分型為“17，18”，兒子分型為“14，18”（如圖1）。

2 討論

等位基因丟失，也叫雜合性丟失。通常是與DNA多態(tài)性、堿基的插入/缺失有關(guān)的[1]。STR基因座結(jié)合區(qū)存在突變可能會(huì)導(dǎo)致同源染色體上其中一個(gè)等位基因的部分或全部基因序列丟失，出現(xiàn)等位基因無(wú)效擴(kuò)增，僅表現(xiàn)為純合子性狀。由突變形成的2個(gè)等位基因均丟失的現(xiàn)象較罕見(jiàn)。有關(guān)等位基因丟失的報(bào)道較多[2-3]，但在vWA基因座發(fā)生等位基因丟失的情況則尚未見(jiàn)報(bào)道。

雜合性丟失樣本會(huì)在相應(yīng)的基因座上將雜合子峰檢成純合子峰，只檢測(cè)出1個(gè)等位基因，但該純合子峰的面積和高度接近其他雜合子峰[4]。本例中，雖然在HuaxiaTMPlatinum PCR擴(kuò)增試劑盒檢測(cè)時(shí)未表現(xiàn)出上述特征，但孩子母親和兒子在vWA基因座中18基因位置上均有一個(gè)小峰（圖1），因此在增加了模板量重新擴(kuò)增電泳后，結(jié)果仍均為純合子。

圖1 vWA基因座的基因分型

親子鑒定中常出現(xiàn)的個(gè)別STR基因座基因分型結(jié)果不符合遺傳規(guī)律現(xiàn)象，通常被認(rèn)為是滑動(dòng)錯(cuò)配機(jī)制產(chǎn)生的突變。一步突變?cè)谌粘９ぷ髦休^為常見(jiàn)，存在多步突變的則較為少見(jiàn)，需要特別注意。本案例使用HuaxiaTMPlatinum PCR擴(kuò)增試劑盒檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)孩子母親和兒子在vWA基因座上均表現(xiàn)為純合子，且母子不符合，存在多步突變，可能性極小。結(jié)合該案例中女兒在vWA基因座分型為“17，18”，推測(cè)孩子母親由于vWA基因座結(jié)合區(qū)存在突變，導(dǎo)致等位基因18無(wú)效擴(kuò)增，且該突變遺傳給了兒子導(dǎo)致其等位基因18也出現(xiàn)無(wú)效擴(kuò)增。相反被檢父由于vWA基因座結(jié)合區(qū)不存在突變，未出現(xiàn)無(wú)效擴(kuò)增。該推測(cè)經(jīng)STRtyper-21G Plus試劑盒重復(fù)檢驗(yàn)后，證實(shí)為等位基因丟失。

目前商品化STR試劑盒已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，親代與子代之間出現(xiàn)個(gè)別STR基因座不符合孟德?tīng)栠z傳規(guī)律的現(xiàn)象常有發(fā)生。在親代一方和子代的分型結(jié)果均為純合子，并存在多步突變時(shí)，需要特別留意是否可能存在等位基因丟失。如果在日常工作中懷疑等位基因丟失時(shí)，可以根據(jù)等位基因峰的面積和峰的高度來(lái)進(jìn)行初步判斷[5]。在分析單一檢測(cè)體系下的樣本數(shù)據(jù)時(shí)較難判定是否屬于雜合性丟失樣本，但通過(guò)采用兩種不同引物設(shè)計(jì)的檢測(cè)體系進(jìn)行檢測(cè)即可發(fā)現(xiàn)。親子鑒定中，若兩個(gè)樣本之間出現(xiàn)某個(gè)STR基因座基因型不符合孟德?tīng)栠z傳規(guī)律，尤其是存在均為純合子且多步突變的情況時(shí)，應(yīng)該采用引物設(shè)計(jì)不完全相同的兩種或兩種以上檢測(cè)試劑盒進(jìn)行復(fù)檢。在采用多種檢測(cè)試劑盒仍無(wú)法驗(yàn)證的情況下，則需采用測(cè)序技術(shù)進(jìn)行證實(shí)[6]，避免誤判，增加結(jié)論的準(zhǔn)確性和可靠性。