柴寶霞

（桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，廣西 桂林 541001）

胃癌是一種發(fā)病率較高的消化系統(tǒng)惡性腫瘤。此病患者的預(yù)后與其病情確診的時間有著密切的聯(lián)系。越早對胃癌患者進(jìn)行診治其預(yù)后越好，生存時間越長。因此，探尋更加簡便、安全、特異、敏銳的指標(biāo)來對胃癌進(jìn)行篩查具有重要的臨床意義?，F(xiàn)階段，血漿Septin9 基因甲基化（mSEPT9）與惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系已得到臨床上的重視。mSEPT9有可能成為惡性腫瘤診斷的新靶點。最近幾年，臨床上已將mSEPT9 運用于結(jié)直腸癌的早期篩查和診斷中。mSEPT9 與胃癌尤其是胃癌癌前狀態(tài)的關(guān)系，目前很少有文獻(xiàn)報道。近年來人們發(fā)現(xiàn)外周血中胃蛋白酶原（PG）作為胃黏膜改變的標(biāo)志物，在早期胃癌的篩查中有特異性表現(xiàn)，具有較高的診斷價值。研究報道，胃蛋白酶原Ⅰ（PG Ⅰ）和胃蛋白酶原Ⅱ（PG Ⅱ）能反映胃黏膜的狀態(tài)[1-2]。胃泌素-17（G-17）也叫小胃泌素，是胃竇細(xì)胞分泌的重要激素之一，其作用是刺激胃酸分泌及胃腸道運動。血清G-17 水平的異常升高可誘發(fā)高胃泌素血癥，并進(jìn)一步引起胃黏膜癌變?，F(xiàn)階段，胃功能三項（PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17）檢查（又被稱為“血清學(xué)活檢”）已在胃癌的早期篩查中得到應(yīng)用，相關(guān)研究也證實了血清PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17 可作為臨床上早期篩檢胃癌的靈敏指標(biāo)[3-4]。胃癌癌前狀態(tài)包括慢性萎縮性胃炎、胃息肉、中重度腸上皮化生、低級別上皮內(nèi)瘤變等[5]。本文主要是比較血漿mSEPT9 檢測與胃功能三項檢查在胃癌及胃癌癌前狀態(tài)篩查中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取2020 年1 月至2022 年1 月在我院行胃功能三項檢查及血漿mSEPT9 檢測的患者各100 例作為研究對象。其納入標(biāo)準(zhǔn)是：年齡≥18 周歲，性別不限；既往身體健康；采血當(dāng)天未飲酒，未服用質(zhì)子泵抑制劑（PPI）；自愿參與本研究，并簽署了知情同意書。其排除標(biāo)準(zhǔn)是：患有其他嚴(yán)重的內(nèi)科疾病；有精神疾病史；對行胃鏡檢查存在禁忌證。在行胃功能三項檢查的100 例患者中，有男性47 例，女性53 例，其平均年齡為50.79 歲。在行mSEPT9 檢測的100 例患者中，有男性70 例，女性30 例，其平均年齡為47.96 歲。

1.2 方法

1.2.1 胃功能三項檢查 采集患者的空腹靜脈血2 ～3 mL，置于促凝管中，以3000 r/min 的轉(zhuǎn)速行5 ～10 min 的離心處理，分離出血清。將試劑條編號，用移液器吸取80 μL 樣本垂直滴入檢測卡的加樣孔中。開始計時，保持軟件樣本編號和試劑條相符。15 min 后用HIT 型熒光免疫分析儀分別檢測樣本中血清PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17 的水平。試劑盒和HIT 熒光免疫分析儀均購自biohan 生物技術(shù)有限公司/ 必歐瀚生物技術(shù)有限公司。參考范圍：血清G-17 ≤5.7 pmol/L，血清PG Ⅰ＞70 μg/L，血清PG Ⅱ≤11 μg/L。

1.2.2 mSEPT9 檢 測 儀 器 與 試 劑：ABI 7500 熒 光PCR 擴(kuò)增儀（由美國ABI 公司生產(chǎn)），人Septin9 基因甲基化檢驗試劑盒﹝由博爾誠（北京）科技有限公司生產(chǎn)）﹞。檢測方法：1）血樣的采集與制備。用BD Vacutainer K2EDTA 10 mL 采血管采集患者的外周靜脈血10 mL，采血后需立即對標(biāo)本進(jìn)行處置。2）檢驗方法。依據(jù)試劑說明書依次制備洗液A、B，行血漿中DNA 提取及亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化處理，即行融化、裂解、DNA 結(jié)合、DNA 洗滌、洗脫、DNA 儲存、亞硫酸鹽化、結(jié)合、3 次洗滌、干燥、洗脫、亞硫酸鹽化、DNA 儲存處理。3）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）。完成PCR 預(yù)反應(yīng)液的制備、PCR 反應(yīng)板的準(zhǔn)備，加入樣本DNA，采用Applied Biosystems 7500PCR 儀進(jìn)行檢測。4）結(jié)果判讀。檢測樣本FAM 熒光通道的Ct 值若≤41.1，則判定檢測結(jié)果呈陽性；檢測樣本FAM 通道的Ct 值若無數(shù)值，則判定檢測結(jié)果呈陰性；檢測過程中內(nèi)標(biāo)檢測若無數(shù)值或Ct 值＞41.1，樣本DNA 純度或濃度很低，則表示檢測結(jié)果無意義，需重新采血檢測。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察并比較對200 例患者進(jìn)行mSEPT9 檢測及胃功能三項檢查的結(jié)果，并與其胃鏡檢查結(jié)果進(jìn)行比較分析。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

用SPSSAU 軟件處理本研究中的數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用% 表示，計量資料用均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，分別采用χ2 檢驗及非參數(shù)檢驗（Kruskal-Wallis 檢驗），P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

對患者進(jìn)行胃鏡檢查的結(jié)果顯示，其中患有慢性萎縮性胃炎、慢性非萎縮性胃炎的患者分別有45 例、27 例。45 例慢性萎縮性胃炎患者與27 例慢性非萎縮性胃炎患者的胃功能三項指標(biāo)（血清PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17）相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表1。在行胃功能三項檢查的患者中有75 例患者自愿接受胃鏡檢查，其中經(jīng)胃鏡檢查被診斷患有慢性萎縮性胃炎、胃息肉、胃黏膜腸化、胃癌、胃潰瘍的患者分別有45 例、7 例、12 例、1 例、1 例；在行mSEPT9檢測的患者中有38 例患者自愿接受胃鏡檢查，其中經(jīng)胃鏡檢查被診斷患有慢性萎縮性胃炎、胃息肉、胃癌、胃黏膜腸化的患者分別有5 例、3 例、1 例、2 例，但mSEPT9 陽性患者中經(jīng)胃鏡檢查檢出1 例慢性萎縮性胃炎患者、1 例胃息肉患者。與mSEPT9 檢測相比，胃功能三項檢查對慢性萎縮性胃炎、胃息肉、胃黏膜腸化的檢出率均更高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。與mSEPT9 檢測相比，胃功能三項檢查對胃癌的檢出率略低，組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表2。mSEPT9 檢測結(jié)果的陽性率僅為6%，其對慢性萎縮性胃炎、胃息肉及胃黏膜腸化的檢出率偏低。

表1 胃功能三項檢查結(jié)（± s）

表1 胃功能三項檢查結(jié)（± s）

注：*與慢性非萎縮性胃炎患者相比，P ＞0.05。

組別 例數(shù)PG Ⅰ（μg/L）PG Ⅱ（μg/L）G-17（pmol/L）慢性萎縮性胃炎45139.95±65.809*21.507±13.264*15.441±19.531*慢性非萎縮性胃炎27145.627±73.25020.721±14.40921.877±24.625合計72142.079±68.23821.212±13.60917.854±21.640

表2 胃功能三項檢查、mSEPT9 檢測對胃癌及胃癌癌前狀態(tài)檢出率的比較

3 討論

胃癌是一種起源于胃黏膜上皮細(xì)胞的惡性腫瘤。早期胃癌患者多無典型的臨床表現(xiàn)，部分患者僅有輕微的消化不良癥狀，故早期胃癌的診斷率較低，多數(shù)胃癌在發(fā)現(xiàn)時已處于中晚期。相關(guān)的研究表明，胃癌癌前狀態(tài)的早發(fā)現(xiàn)及早治療能顯著降低胃癌的發(fā)病率，改善患者的預(yù)后[6]。目前，胃癌的確診主要是依靠內(nèi)鏡檢查+ 病理組織學(xué)檢查，然而我國的內(nèi)鏡篩查率偏低，活檢率則更低。究其原因主要是人們對內(nèi)鏡檢查引起的不適有較為嚴(yán)重的恐懼感，加之內(nèi)鏡檢查存在一定的侵襲性，患者常擔(dān)心檢查后出現(xiàn)醫(yī)源性感染。以血清學(xué)生物標(biāo)志物為基礎(chǔ)的胃癌篩查方法風(fēng)險較小，且更為方便快捷，更適合大規(guī)模胃癌篩查的開展。作為一種新型的腫瘤篩查手段，mSEPT9 檢測具有簡單、快捷、方便等優(yōu)點。研究指出，通過檢測正常青年人（18 ～49 歲）外周血中的mSEPT9，只有6%（6/98）的人出現(xiàn)陽性結(jié)果，但Septin9 基因的甲基化程度可隨著腫瘤組織學(xué)分級的進(jìn)展而逐步增加[7]。Fu 等[8]發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌患者血漿mSEPT9 的水平與腫瘤大小、組織學(xué)分級與組織學(xué)類型有關(guān)，因此血漿mSEPT9 可能是一種有效的腫瘤生物標(biāo)志物。相關(guān)的研究表明，mSEPT9 對腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的敏感性高，但mSEPT9 對晚期腺瘤的敏感性則非常低，這使其臨床效用有限[9-10]。除結(jié)直腸癌外，mSEPT9 也可用作胃癌的潛在生物標(biāo)志物。結(jié)直腸癌和胃癌都屬于消化系統(tǒng)惡性腫瘤，二者具有一些共同的分子特征，包括微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI）、高甲基化和基因突變等[11]，但需要通過更大樣本的研究來證實mSEPT9 對胃癌的診斷價值。G-17 是由胃竇G 細(xì)胞合成及分泌的多肽類激素，有促進(jìn)胃黏膜細(xì)胞分化和增值的作用，其主要生理功能是促進(jìn)胃酸的分泌，并可提示胃竇發(fā)生萎縮[12]。G-17 在健康人血液中的水平明顯低于胃癌患者，其水平的高低與胃癌的發(fā)生部位及臨床分期有一定的關(guān)系，因此該指標(biāo)可應(yīng)用于胃癌的篩查及診斷中。PG 是天門冬氨酸蛋白酶前體，有PG Ⅰ、PG Ⅱ兩種亞型，可反映人體胃黏膜的狀態(tài)[13]。PG Ⅰ、PG Ⅱ、G-17均為胃細(xì)胞形態(tài)學(xué)指標(biāo)，可用于識別慢性萎縮性胃炎及明確胃黏膜萎縮的程度[14]。胃癌的發(fā)生需要經(jīng)過長期、多階段的逐步演變，由萎縮性胃炎、腸上皮化生、低級別和高級別不典型增生等癌前狀態(tài)最終發(fā)展為胃癌[15-16]。因此，早期發(fā)現(xiàn)胃癌癌前狀態(tài)并進(jìn)行相應(yīng)的干預(yù)及嚴(yán)密隨訪，能有效降低患者胃癌的發(fā)生率。

綜上所述，與mSEPT9 檢測相比，胃功能三項檢查在胃癌癌前狀態(tài)篩查中的應(yīng)用價值更高，二者在胃癌篩查中的應(yīng)用價值相當(dāng)。由于血清學(xué)診斷具有便捷性、可行性、適合大規(guī)模人群篩查等優(yōu)點，因此若能將胃功能三項檢查聯(lián)合血漿mSEPT9 檢測運用于胃癌及胃癌癌前狀態(tài)的篩查中，既能減少人們行胃鏡檢查的次數(shù)，又能阻止良性胃病進(jìn)展為胃癌，有助于提高我國胃癌的早期診斷率和治療率。本研究也存在一定的局限性，包括：1）樣本量小，其中有一部分受檢者行胃功能三項檢查、血漿mSEPT9 檢測后不愿意再行胃鏡檢查，導(dǎo)致病例脫落；2）缺乏病理診斷的支持。在未來的臨床實踐中，仍需依據(jù)大樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行研究統(tǒng)計，以期進(jìn)一步探索出早期胃癌篩查的可行途徑。