劉保山，梁思琪，肖 強(qiáng)

(1.生物資源保護(hù)與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 恩施 445000；2.湖北民族大學(xué) 林學(xué)園藝學(xué)院，湖北 恩施 445000)

刺桐(ErythrinavariegataL.)是豆科(Leguminosae)刺桐屬(Erythrina)植物，常為灌木或小喬木，原產(chǎn)自印度至大洋洲海岸林中，目前在中國(guó)臺(tái)灣、福建等地都有所分布[1]，其樹皮或根皮可以入藥，稱為海桐皮，具有鎮(zhèn)靜[2]、平喘[3]等功效.多糖是一種廣泛存在的大分子化合物，具有抗炎[4]、抗腫瘤[5]、抗氧化[6]等功效.目前對(duì)刺桐中化學(xué)成分研究主要見于黃酮類化合物的分離和藥理作用以及生物堿的提取和活性研究[7]，但對(duì)刺桐葉片多糖的提取、結(jié)構(gòu)分析和活性研究鮮有報(bào)道.

本研究采用纖維素酶酶解法對(duì)刺桐葉片多糖進(jìn)行提取，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上采用響應(yīng)面分析法對(duì)其提取工藝進(jìn)行優(yōu)化；進(jìn)一步通過紅外光譜分析其結(jié)構(gòu)，使用柱前衍生高效液相色譜法測(cè)定其單糖組成；最后測(cè)定其體外抗氧化活性以及對(duì)癌細(xì)胞的增殖抑制活性；以期為刺桐多糖潛在利用價(jià)值的開發(fā)提供理論指導(dǎo).

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

刺桐采摘于湖北民族大學(xué)植物園，經(jīng)湖北民族大學(xué)林學(xué)園藝學(xué)院易詠梅教授鑒定；健康、無(wú)病蟲害的刺桐葉片用清水沖洗干凈，50 ℃熱泵式烘箱中烘干、粉碎后過40目篩，干燥器儲(chǔ)藏備用.

纖維素酶(≥400 U/mg，福州飛凈生物科技有限公司)；單糖標(biāo)準(zhǔn)品(上海源葉生物科技有限公司)；乙酸銨(色譜級(jí)，阿拉丁)；苯酚(分析純，阿拉丁)；無(wú)水乙醇(分析純，武漢市中天化工有限公司)；胎牛血清(HB25FA0001，生工生物)；DMEM培養(yǎng)基(AG29714106，Cytiva)；青霉素-鏈霉素溶液(源葉生物)；CCK-8試劑盒(MA0218-500T，大連美侖生物技術(shù)有限公司)；PBS(Cytiva，AF29561133)；水為純凈水.

1.2 儀器與設(shè)備

低速臺(tái)式離心機(jī)(H2050R，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司)；紫外-可見光光度計(jì)(TU-1901，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；冷凍干燥機(jī)(ALPHA1-2LD，德國(guó)CHhrist公司)；超凈工作臺(tái)(JJ-CJ-1FD，蘇州市金凈凈化設(shè)備科技有限公司)；BX50熒光倒置顯微鏡(Olympus公司)；U3000高效液相色譜儀(美國(guó)賽默飛世爾科技公司)；iS50傅里葉紅外光譜儀；二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱(Thermo公司).

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 刺桐葉片多糖提取工藝 稱取刺桐葉片粉末0.5 g，放置于試管中，按照料液比1∶20的比例加入純凈水10 mL，加入不同用量的酶后，再加入不同酶解pH的PBS緩沖溶液，于不同溫度下酶解不同時(shí)間，轉(zhuǎn)移至90 ℃水浴鍋中滅活5 min后迅速抽濾，濾液加入4倍體積的無(wú)水乙醇，放置于4 ℃冰箱中進(jìn)行醇沉過夜.將溶液轉(zhuǎn)移至離心管中，于8 000 r/min、4 ℃下離心10 min，去上清液，沉淀加入熱純水復(fù)溶，采用硫酸苯酚法進(jìn)行多糖含量的測(cè)定[8]，根據(jù)式(1)計(jì)算刺桐多糖提取率.將復(fù)溶的多糖溶液進(jìn)行冷凍干燥，復(fù)溶為1 mg/mL的多糖溶液，利用Sevage試劑進(jìn)行除蛋白操作，除至無(wú)明顯蛋白沉淀后冷凍干燥得粗多糖粉末，后續(xù)實(shí)驗(yàn)均使用本方法所制多糖進(jìn)行.Y1=(mi/mj)×100%.

(1)

式(1)中：Y1代表多糖提取率，單位為%；mi、mj分別代表復(fù)溶后多糖質(zhì)量、原料質(zhì)量.

1.3.2 單因素實(shí)驗(yàn) ① 酶解pH：酶解pH分別為4、5、6、7、8，酶用量為1.5%，酶解溫度為40 ℃，酶解時(shí)間為60 min，按照1.3.1方法計(jì)算刺桐多糖的提取率，探究酶解pH對(duì)刺桐多糖提取率的影響.② 酶用量：酶用量分別為3.0%、3.5%、4.0%、4.5%、5.0%，酶解pH為7，酶解溫度為40 ℃，酶解時(shí)間為60 min，按照1.3.1方法計(jì)算刺桐多糖的提取率，探究酶用量對(duì)刺桐多糖提取率的影響.③ 酶解時(shí)間：酶解時(shí)間分別為30、60、90、120、150 min，酶解pH為7，酶解溫度為40 ℃，酶用量為4.5%，按照1.3.1方法計(jì)算刺桐多糖的提取率，探究酶解時(shí)間對(duì)刺桐多糖提取率的影響.④ 酶解溫度：酶解溫度分別為30、40、50、60、70 ℃，酶解pH為7，酶解時(shí)間為90 min，酶用量為4.5%，按照1.3.1方法計(jì)算刺桐多糖的提取率，探究酶解溫度對(duì)刺桐多糖提取率的影響.

1.3.3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn) 結(jié)合單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，以酶用量(A)、酶解pH(B)、酶解溫度(C)及酶解時(shí)間(D)4個(gè)因素為自變量，以刺桐多糖提取率為響應(yīng)值，采用Box-Behnken實(shí)驗(yàn)原理設(shè)計(jì)4因素3水平響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn).

1.3.4 刺桐葉片多糖的紅外光譜分析 稱取多糖樣品1～2 mg至瑪瑙研缽中，加入干燥的KBr粉末150 mg充分研磨后壓制成透明薄片進(jìn)行紅外光譜儀掃描；光譜掃描范圍4 000～400 cm-1，掃描時(shí)扣除H2O和CO2的背景，分辨率設(shè)置為4 cm-1，共進(jìn)行64次掃描，紅外光譜根據(jù)文獻(xiàn)[9]進(jìn)行分析.

1.3.5 刺桐葉片多糖的單糖組成分析 ① HPLC色譜條件.Diamonsil plus C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈(A)-50 mmol/L乙酸銨溶液(B)；梯度洗脫：0～60min 15%～25%A，85%～75%B；體積流量1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm；進(jìn)樣量10 μL.② 樣品酸水解溶液的制備.多糖的水解與衍生[10]：精密稱取多糖粉末20 mg，置于5 mL安培瓶中，加入1 mol/L鹽酸1.5 mL，封口后置110 ℃條件下水解4 h，冷卻至室溫，用3 mol/L NaOH調(diào)節(jié)至中性.取100 μL酸解樣品于試管中，加入100 μL 0.6 mol/L NaOH和200 μL 0.5 mol/L 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 (1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone，PMP)-甲醇溶液，70 ℃水浴條件下反應(yīng)30 min，放冷后加入100 μL 0.6 mol/L鹽酸中和后定容至2 mL；加入等體積三氯甲烷混勻10 min后離心5 min(10 000 r/min)，去掉三氯甲烷層，重復(fù)上述操作3次，過0.22 μm微孔膜進(jìn)行高效液相色譜(high performance liquid chromatography，HPLC)分析.③ 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備.取半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖醛酸、巖藻糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、甘露糖、D-果糖儲(chǔ)備液各0.5 mL，定容至10 mL后，按照前述樣品方法制備衍生標(biāo)準(zhǔn)品.

1.3.6 體外抗氧化活性的測(cè)定 ① DPPH自由基清除能力測(cè)定.配制不同質(zhì)量濃度(1、2、3、4、5 mg/mL)的多糖溶液，取上述溶液2 mL，分別加入0.4 mmol/L 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)-乙醇溶液2 mL，混勻后靜置30 min，在517 nm處測(cè)吸光度值，以蒸餾水作空白組，Vc作陽(yáng)性對(duì)照，按照式(2)計(jì)算DPPH自由基的清除率.Y2=[1-(Ai-Aj)/Ak]×100%.

(2)

式(2)中：Y2表示DPPH自由基清除率；Ai、Aj和Ak分別表示加入多糖、空白和對(duì)照實(shí)驗(yàn)下的吸光度值.② 羥自由基清除能力的測(cè)定.配制不同質(zhì)量濃度(1、2、3、4、5 mg/mL)的多糖溶液，取上述溶液2 mL，分別加入6 mmol/L硫酸亞鐵、6 mmol/L水楊酸-乙醇溶液各1 mL，加入1 mL 1%過氧化氫后于37 ℃下反應(yīng)30 min，于510 nm處測(cè)定吸光度值，用蒸餾水代替過氧化氫，空白對(duì)照用蒸餾水代替樣品溶液，按照式(3)計(jì)算羥自由基的清除率.Y3=[1-(Ai-Aj)/Ak]×100%.

(3)

式(3)中：Y3表示羥自由基清除率.

1.3.7 刺桐葉片多糖抗腫瘤活性測(cè)定 ① 細(xì)胞培養(yǎng).HSC-3和HCCLM-3細(xì)胞株系由風(fēng)濕性疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，培養(yǎng)于10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素雙抗的DMEM培養(yǎng)液中，培養(yǎng)瓶為T25塑料培養(yǎng)瓶，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%～90%時(shí)進(jìn)行傳代、鋪板、凍存等操作.② 細(xì)胞增殖抑制率的測(cè)定.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行鋪板，利用細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)，每個(gè)96孔板內(nèi)細(xì)胞數(shù)量為1×105個(gè)左右，24 h后采用對(duì)半稀釋法進(jìn)行藥物濃度控制，24 h后按照CCK-8試劑盒操作說明進(jìn)行增殖抑制率測(cè)定，按照式(4)計(jì)算增殖抑制率.Y4=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]×100%.

(4)

式(4)中：Y4表示增殖抑制率；As、Ac和Ab分別代表實(shí)驗(yàn)孔(含有細(xì)胞的培養(yǎng)基、CCK-8和待測(cè)藥物)的吸光度、對(duì)照孔(含有細(xì)胞的培養(yǎng)基、CCK-8、沒有待測(cè)藥物)的吸光度和空白孔(不含細(xì)胞和待測(cè)藥物的培養(yǎng)基、CCK-8)的吸光度.

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 酶解pH對(duì)刺桐葉片多糖提取率的影響 酶解pH對(duì)刺桐葉片多糖提取率的影響如圖1所示.由圖1可知，提取率隨酶解pH的增加而提高，但在pH為5、6、7之間并無(wú)顯著性差異，在pH為7時(shí)達(dá)到最高，而pH為7和8之間存在著顯著性差異.因此，將之后因素的酶解pH均固定為7，同時(shí)將其設(shè)定為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)中pH的中間水平值.

2.1.2 酶用量對(duì)刺桐葉片多糖提取率的影響 酶用量對(duì)刺桐葉片多糖提取率的影響如圖2所示.由圖2可知，刺桐多糖提取率隨酶用量的增加而提高，在酶用量為4.5%時(shí)達(dá)到最大值.因此，將之后因素的酶用量固定為4.5%，同時(shí)將其設(shè)定為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)中酶用量的中間水平值.

2.1.3 酶解時(shí)間對(duì)刺桐葉片多糖提取率的影響 酶解時(shí)間對(duì)刺桐葉片多糖提取率的影響如圖3所示.由圖3可知，提取率隨酶解時(shí)間的延長(zhǎng)而提高，在酶解時(shí)間為90 min時(shí)達(dá)到最高，酶解時(shí)間為90～120 min存在著顯著性差異.因此，將之后因素的酶解時(shí)間固定為90 min，同時(shí)將其設(shè)定為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)中酶解時(shí)間的中間水平值.

2.1.4 酶解溫度對(duì)刺桐葉片多糖提取率的影響 酶解溫度對(duì)刺桐葉片多糖提取率的影響如圖4所示.由圖4可知，刺桐多糖提取率隨酶解溫度的增加而提高，在酶解溫度為50 ℃時(shí)達(dá)到最大值，因此，將之后因素的酶解溫度固定為50 ℃，同時(shí)將其設(shè)定為響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)中酶解溫度的中間水平值.

圖3 酶解時(shí)間對(duì)刺桐葉片多糖提取率的影響 圖4 酶解溫度對(duì)刺桐葉片多糖提取率的影響

2.2 響應(yīng)面優(yōu)化刺桐葉片多糖提取工藝

2.2.1 響應(yīng)面分析與結(jié)果 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行響應(yīng)面條件的確定，以酶解pH、酶用量(%)、酶解時(shí)間(min)和酶解溫度(℃)4個(gè)因素為自變量(分別以A、B、C、D表示)，以刺桐葉片多糖提取率(%)為響應(yīng)面值設(shè)計(jì)了響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示.

表1 響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)方案及實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Design and testing results of RSM

通過軟件Design-Expert 12對(duì)響應(yīng)面結(jié)果進(jìn)行分析，其二次回歸方程以及回歸方程各項(xiàng)的方差分析結(jié)果如表2所示.

從方差分析表可以看出回歸方程的F值為8.14，P<0.01，極顯著，且失擬項(xiàng)為0.070 8，不顯著，說明利用響應(yīng)面法擬合得到的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜆O顯著，該模型可以用來(lái)評(píng)估刺桐葉片多糖提取的結(jié)果.4個(gè)因素對(duì)提取得率的影響大小順序?yàn)槊附鈺r(shí)間>酶解溫度>酶解pH>酶用量.通過對(duì)條件和結(jié)果進(jìn)行擬合，得到二次擬合方程如下：

Y=4.69+0.156 7A+0.021 7B-0.241 7C+0.16D+0.16AB-0.302 5AC+0.162 5AD+

0.082 5BC+0.032 5BD+0.15CD-0.557 3A2-0.577 3B2-0.359 8C2-0.479 8D2.

通過軟件確定了響應(yīng)面法預(yù)測(cè)的回歸模型，在預(yù)測(cè)欄可以得出軟件預(yù)測(cè)結(jié)果，預(yù)測(cè)最佳提取工藝為：酶解pH 7.2，酶用量4.5%，酶解時(shí)間77.4 min，酶解溫度51.5 ℃，預(yù)測(cè)提取得率為4.77%.

表2 方差分析表Tab.2 Analysis of variance

2.2.2 模型驗(yàn)證 基于預(yù)測(cè)的結(jié)果并結(jié)合實(shí)際情況，將提取條件進(jìn)行微調(diào)，工藝條件如下：酶解pH為7，酶用量為4.5%，酶解時(shí)間為75 min，酶解溫度為51 ℃，在此條件下進(jìn)行3次平行實(shí)驗(yàn)，提取得率為4.81(±0.01)%，與預(yù)測(cè)結(jié)果4.77%基本吻合，說明此工藝條件合理準(zhǔn)確.

2.3 結(jié)構(gòu)分析

2.3.1 刺桐多糖的FT-IR光譜分析 刺桐多糖壓片并進(jìn)行紅外掃描后，得到光譜圖如圖5所示.從圖5中可以看出，刺桐多糖具有典型的多糖特征吸收峰：在3 405.67 cm-1附近有較強(qiáng)的-OH的收縮振動(dòng)峰；在1 603.48 cm-1附近存在羰基的C=O伸縮振動(dòng)形成的吸收峰[11]；在1 399.04 cm-1附近有C-H的變角振動(dòng)峰[12]；1 400～1 200 cm-1為C-H的變角振動(dòng)[13]；在1 077.52 cm-1處為C-O振動(dòng)吸收峰；941.57 cm-1處為端基C-H彎曲振動(dòng)峰；531.81 cm-1處為葡萄糖殘基[14].

2.3.2 刺桐葉片多糖的單糖組成分析 混合標(biāo)準(zhǔn)單糖PMP衍生物的HPLC圖譜如圖6所示.由圖6可知，在預(yù)定條件下，8種單糖的分離效果很好.刺桐葉多糖的HPLC圖譜如圖7所示，可見分離效果好.通過將刺桐葉片多糖色譜圖與標(biāo)準(zhǔn)色譜圖的保留時(shí)間進(jìn)行對(duì)比，可以確定出刺桐葉多糖由甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖6種單糖組成；通過計(jì)算混合標(biāo)準(zhǔn)曲線中每摩爾各單糖的峰面積，再計(jì)算出刺桐葉多糖色譜圖中各單糖的摩爾含量，可以算出刺桐葉片多糖中6種單糖的摩爾濃度比為48.67∶1.34∶4.49∶34.94∶8.64∶1.93，主要單糖為甘露糖和葡萄糖，占總單糖含量的83.6%.

2.4 刺桐葉多糖體外抗氧化活性

2.4.1 清除DPPH自由基的能力 刺桐葉多糖對(duì)DPPH自由基的清除活性如圖8所示.由圖8可知，Vc在1～5 mg/mL范圍內(nèi)對(duì)DPPH自由基的清除能力均在95%左右；刺桐葉多糖在1～5 mg/mL范圍內(nèi)對(duì)DPPH自由基的清除能力呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系，在5 mg/mL時(shí)清除率達(dá)到32.55%，仍未達(dá)到50%的清除率，說明刺桐葉多糖對(duì)DPPH自由基的清除率較低.

2.4.2 清除羥自由基的能力 刺桐多糖對(duì)羥自由基的清除活性如圖9所示.由圖9可知，Vc在2.5～12.5 mg/mL范圍內(nèi)對(duì)羥自由基的清除能力均在90%以上；刺桐多糖在2.5～12.5 mg/mL的范圍內(nèi)對(duì)羥自由基的清除能力呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系，在12.5 mg/mL時(shí)清除率達(dá)到98.8%，經(jīng)過回歸方程分析，其IC50為5.56 mg/mL.

2.5 刺桐葉多糖體外抗腫瘤活性

2.5.1 對(duì)HCCLM-3細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng) 不同質(zhì)量濃度刺桐多糖對(duì)HCCLM-3細(xì)胞增殖的抑制率如圖10所示.從圖10可見，在刺桐葉片多糖濃度為5 mg/mL以下時(shí)，其對(duì)HCCLM-3細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)并不明顯，在濃度達(dá)到20 mg/mL時(shí)，增殖抑制率達(dá)到了96.6%.

圖9 刺桐葉多糖對(duì)羥自由基的清除活性 圖10 刺桐葉多糖對(duì)HCCLM-3細(xì)胞增殖的抑制率

2.5.2 對(duì)HSC-3細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng) 不同濃度刺桐葉多糖對(duì)HSC-3細(xì)胞增殖的抑制率如圖11所示.從圖11可見，在濃度小于5 mg/mL時(shí)，刺桐葉多糖不僅對(duì)HSC-3細(xì)胞的增殖沒有明顯抑制效果，反而對(duì)其增殖作用有所促進(jìn).當(dāng)濃度加大至10 mg/mL和20 mg/mL時(shí)，其增殖抑制率分別達(dá)到了34.6%和70.1%，表明刺桐葉多糖在高濃度時(shí)表現(xiàn)出了明顯的增殖抑制效應(yīng).

3 討論與結(jié)論

植物多糖是植物體內(nèi)重要的大分子物質(zhì)，常見的提取方法有水提醇沉法、酶提法、超聲輔助法等，其中酶提法較為高效、安全.酶提法受到酶用量、酶解pH、酶解時(shí)間等因素的影響.隋志方等[15]利用復(fù)合酶對(duì)黑木耳中多糖進(jìn)行提取，在條件為酶解時(shí)間50 min、纖維素酶∶木瓜蛋白酶=1∶1、酶用量3%、酶解溫度50 ℃、酶解pH 6.5時(shí)，提取率為9.26%；本研究表明刺桐葉多糖的最佳提取工藝：酶解pH為7，酶用量為4.5%，酶解時(shí)間為75 min，酶解溫度為51 ℃，在此條件下進(jìn)行3次平行實(shí)驗(yàn)，提取得率為(4.81±0.01)%.相比之下，兩者的提取條件上差異性不大，但在提取率上仍存在著巨大的差異，推測(cè)是由于材料不同所導(dǎo)致的.

圖11 刺桐葉多糖對(duì)HSC-3細(xì)胞增殖的抑制率Fig.11 Inhibition of polysaccharide from leaves of Erythrina variegata L. on proliferation of HSC-3 cell line

多糖的生物活性受到了諸多因素的影響，其中化學(xué)結(jié)構(gòu)的影響較大，化學(xué)結(jié)構(gòu)包括外觀結(jié)構(gòu)[16-18]、單糖組成[19-20]、官能團(tuán)[21-22]等.近些年來(lái)的研究表明，不同種類的多糖在外觀結(jié)構(gòu)上差異較大；單糖的組成情況在總體上差異較小，但在不同單糖的比例方面存在著較大的差異；官能團(tuán)的情況是通過掃描紅外光譜來(lái)確定的，不同種類多糖的紅外光譜均呈現(xiàn)出多糖的典型特征吸收峰，如-OH鍵、糖苷鍵、C-H鍵等.單糖組成分析顯示，主要含有的單糖類型有甘露糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖以及阿拉伯糖，摩爾濃度比為48.67∶1.34∶4.49∶34.94∶8.64∶1.93.

近年來(lái)，科研人員對(duì)多糖的生物活性測(cè)定開展了大量的研究，主要測(cè)定其抗氧化、抗腫瘤、降血糖等活性.抗氧化活性的高低可以通過測(cè)定其對(duì)DPPH自由基、羥自由基等的清除能力并計(jì)算多糖對(duì)各種自由基清除一半時(shí)濃度來(lái)判斷[23-25].本研究中，刺桐葉多糖對(duì)羥自由基清除能力的IC50為5.56 mg/mL，在濃度達(dá)到12.5 mg/mL時(shí)，對(duì)羥自由基清除率能夠達(dá)到90%以上.多糖可以通過多種方式表達(dá)其抗腫瘤活性，如靈芝多糖[26]可以增強(qiáng)免疫系統(tǒng)，抑制癌細(xì)胞中IL-6、IL-8、MMP2和MMP9的釋放，并顯著降低癌細(xì)胞的細(xì)胞活性，從而達(dá)到抗腫瘤的效果；程婷婷等[27]觀察了地參多糖的體外抗腫瘤活性并探究了其作用機(jī)制，結(jié)果表明地參多糖可以抑制A549細(xì)胞的增殖，使其周期阻滯在G0/G1期，同時(shí)通過線粒體凋亡途徑和死亡受體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡.本研究中通過體外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，分別測(cè)定了刺桐葉多糖對(duì)HSC-3和HCCLM-3 2種癌細(xì)胞增殖的抑制情況，發(fā)現(xiàn)刺桐葉多糖具有一定的抗腫瘤活性，然而刺桐葉多糖具體是通過哪些機(jī)制和通路來(lái)表達(dá)其抗腫瘤活性還待進(jìn)一步研究.