黃榮春， 梁 淦， 譚正準(zhǔn)， 李 輝， 黃 健， 鄢勝飛， 鐘華配， 馮 超， 盧 瑛， 梁莎莎， 李廳廳， 覃廣勝

(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣西水牛研究所，廣西水牛遺傳繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧 530001)

胚胎移植是生物工程的一項(xiàng)基本技術(shù)，能將體內(nèi)外生產(chǎn)的早期良種母畜胚胎移植到同種相同生理狀態(tài)的母畜生殖道內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育成新個(gè)體；能有效發(fā)揮良種母牛的遺傳和繁殖潛力，實(shí)現(xiàn)短時(shí)間內(nèi)培育出更多的良種母牛后代，是快速擴(kuò)繁良種牛數(shù)量的一種較好手段[1]，具有潛在的巨大經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。因而，胚胎移植技術(shù)越來(lái)越受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的高度重視，但從目前的研究結(jié)果來(lái)看，胚胎移植的成敗受各種因素的限制，僅從一個(gè)或單獨(dú)幾個(gè)方面進(jìn)行研究很難從根本上提高胚胎移植效果的。所以，在保證胚胎質(zhì)量和非手術(shù)移植操作技術(shù)水平的前提下，十分有必要對(duì)受體的狀態(tài)進(jìn)行研究，而受體的生殖生理對(duì)繁殖性能的影響尤為突出；因此，從剖析受體的生殖生理出發(fā)，探究黃體對(duì)牛胚胎移植效果的影響顯得尤為重要。

黃體是一種動(dòng)態(tài)的卵巢內(nèi)分泌結(jié)構(gòu)，通過(guò)其連續(xù)的形態(tài)和功能變化，幫助產(chǎn)生和分泌黃體酮[2]；黃體酮是決定母體子宮生理狀態(tài)的一種甾類(lèi)激素，對(duì)控制發(fā)情周期、啟動(dòng)發(fā)情行為和維持妊娠具有重要的作用[3]；所以，受體牛卵巢上的黃體是影響胚胎移植效果的一個(gè)重要因素[4-5]，其中正確檢查和判定黃體大小、位置和質(zhì)量是提高胚胎移植受胎率的關(guān)鍵。近年來(lái)，諸多學(xué)者在黃體對(duì)牛胚胎移植效果影響方面開(kāi)展研究，并有著較多不同的報(bào)道[6]。所以，本文以探究黃體對(duì)牛胚胎移植效果的影響為主線(xiàn)，查閱大量文獻(xiàn)，歸納黃體的檢查和級(jí)別判斷方法，分別分析黃體大小、黃體位置、黃體質(zhì)量和黃體溶解過(guò)程激素水平與胚胎移植受胎率的關(guān)系，以期為生產(chǎn)上提高胚胎移植受胎率、獲取更大的生產(chǎn)效益提供科學(xué)的參考依據(jù)。

1 黃體檢查和級(jí)別判斷方法

正確檢查和判定黃體大小、位置和質(zhì)量是提高胚胎移植受胎率的關(guān)鍵。過(guò)去一般是通過(guò)直腸檢查時(shí)的感覺(jué)和經(jīng)驗(yàn)來(lái)判斷黃體體積的大小，但徒手觸摸檢查時(shí)，往往僅摸到黃體凸出于卵巢表面的部分，對(duì)其嵌入部分很難觸摸來(lái)辨別它的質(zhì)地和大小，所以常常不同的檢查者可能因手感和經(jīng)驗(yàn)不同而得到不同的結(jié)論[6]。如今在胚胎移植過(guò)程中，根據(jù)卵巢實(shí)質(zhì)組成和黃體的組織結(jié)構(gòu)密度不同，通過(guò)B超影像學(xué)上反射表現(xiàn)出差異的原理，用B超掃描受體牛卵巢，再結(jié)合直腸檢查法，判斷黃體大小并進(jìn)行分級(jí)更準(zhǔn)確且易于掌握。通常在胚胎移植前1 d或移植當(dāng)天用B超對(duì)受體卵巢進(jìn)行掃描，結(jié)合直腸檢查黃體的彈性和凸出狀，確定黃體的有無(wú)并根據(jù)黃體大小、質(zhì)地進(jìn)行分級(jí)，各品種受體牛胚胎移植時(shí)(發(fā)情第7±1天)的黃體級(jí)別判斷可參考表1。

表1 受體牛發(fā)情第(7±1)天黃體級(jí)別判斷[7]

2 黃體大小與胚胎移植受胎率的關(guān)系

在黃牛的有關(guān)研究報(bào)道上，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)受體牛黃體大小是否影響胚胎移植受胎率有著不同的觀(guān)點(diǎn)[6]。有的認(rèn)為胚胎移植受胎率會(huì)隨著黃體的體積增大而升高[8]，甚至因受體的黃體體積小而不做移植；也有的認(rèn)為不同黃體大小的移植受胎率沒(méi)有明顯差別[9]。盧全晟通過(guò)對(duì)不同黃體大小的受體牛進(jìn)行移植效果比較，發(fā)現(xiàn)黃體直徑為1.2 cm的受體牛組的流產(chǎn)數(shù)、難產(chǎn)數(shù)最高，分別為16.13%和12.9%，但是受體牛的黃體直徑不同對(duì)流產(chǎn)數(shù)、難產(chǎn)數(shù)的影響差異不顯著(P>0.05)[10]。在水牛方面相關(guān)研究仍甚少，陳明棠等對(duì)234頭水牛受體進(jìn)行移植，結(jié)果顯示：黃體直徑在1.5 cm以上的受胎率為27.27%，黃體直徑在0.8～1.5 cm之間的受胎率為19.23%，黃體直徑在0.8 cm以下的受胎率為22.73%，而不作黃體分級(jí)，有新生黃體即行移植的對(duì)照組受胎率為20.00%，得出不同黃體大小的受胎率無(wú)明顯差異[6]。倉(cāng)明等以中國(guó)荷斯坦奶牛受體為研究對(duì)象，發(fā)現(xiàn)黃體為A級(jí)的受體牛的受胎率為28.6%，黃體為B級(jí)的受體牛的受胎率為42.9%，黃體為C級(jí)的受體牛的受胎率為0?？梢?jiàn)，利用黃體觸診法選擇受體牛雖然有非量化的弊端，但是實(shí)際生產(chǎn)操作中仍是可行的[11]。方東輝等以西雜母牛作為受體進(jìn)行胚胎移植，發(fā)現(xiàn)受體母牛的黃體直徑在0.8 cm，1.0 cm和1.2 cm的，其妊娠率分別為33.33%，35.71%和36.36%；而黃體在1.5 cm及以上的受體母牛的妊娠率更高(達(dá)50.00%)，建議黃體質(zhì)量好且略大的受體母牛，優(yōu)先進(jìn)行胚胎移植[12]。張建軍等對(duì)安格斯牛進(jìn)行胚胎移植時(shí)，發(fā)現(xiàn)黃體直徑為0.8 cm的，與黃體直徑為1 cm和1.2 cm的受體母牛所得的移植受胎率差異不明顯，而黃體直徑在1.5 cm和1.8～2.0 cm以上的受體母牛的移植受胎率明顯較高。說(shuō)明，受體母牛子宮正常，具有0.8 cm以上質(zhì)地良好的黃體，均適合進(jìn)行胚胎移植[13]。

從上述各學(xué)者研究結(jié)果可見(jiàn)，不同品種受體牛黃體大小對(duì)胚胎移植受胎率產(chǎn)生了不同程度的影響，但不同直徑黃體的胚胎移植受胎率差異不顯著，所以，在參考黃體大小的選擇標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)適當(dāng)放寬，如果選擇過(guò)嚴(yán)，用于移植的受體母牛數(shù)量將大大減少。不僅移植人員的工作量過(guò)大，也大大影響了母牛的正常配種，給養(yǎng)殖戶(hù)們帶來(lái)了許多不便。

3 黃體位置與胚胎移植受胎率的關(guān)系

胚胎移植過(guò)程中，移植部位不同給胚胎移植受胎率帶來(lái)了不同影響。有關(guān)胚胎移植位置的研究報(bào)道，移植單胚時(shí)，移植到黃體同側(cè)子宮角的受胎率要比移植到黃體對(duì)側(cè)的高得多(43%～55%)；也有的研究表明，移植到黃體同側(cè)比移植到黃體對(duì)側(cè)的受胎率高14%。盡管所得的結(jié)果不太相同，總體認(rèn)為，移植到黃體同側(cè)子宮角的受胎率均比移植到黃體對(duì)側(cè)的受胎率高[14]，這可能是因?yàn)橐浦驳近S體對(duì)側(cè)的胚胎促黃體分泌及抗黃體溶解的信號(hào)很難達(dá)到黃體，所以影響了它的受胎率。且牛胚胎附植部位一般是子宮角內(nèi)血管稠密、營(yíng)養(yǎng)充足的部位，所以，通常移植到黃體同側(cè)子宮角深部1/2～1/3處，原則在不造成子宮角損傷的前提下盡可能靠前，越深越好[15]。

孫鳳俊[16-19]等人研究發(fā)現(xiàn)左側(cè)黃體受體牛受胎率略高于右側(cè)，但差異不顯著(P>0.05)，但付靜濤[20-21]等人研究認(rèn)為移植左側(cè)黃體受體牛的受胎率顯著高于移植右側(cè)黃體受體牛的受胎率。之所以造成左右側(cè)黃體受體牛的移植受胎率不同，可能是跟移植操作人員的左右手操作習(xí)慣，以及不同群體有關(guān)。

4 黃體質(zhì)量與胚胎移植受胎率的關(guān)系

受體牛黃體發(fā)育質(zhì)量是判斷能否移植的依據(jù)之一。有關(guān)研究報(bào)道，黃體發(fā)育好有彈性并柔軟的受體牛通常有較好的移植受胎率[14]。桑潤(rùn)滋等研究表明，移植黃體狀況良好的受體得到妊娠率為63.5%，而移植黃體發(fā)育較差的受體得的結(jié)果僅為28.6%，差異懸殊?？梢?jiàn)，受體的黃體質(zhì)量是影響移植妊娠率的主要因素之一[22]。盧春霞等也發(fā)現(xiàn)黃體的質(zhì)量越好，受胎率越高，以移植鮮胚為例，A級(jí)黃體的受胎率極顯著高于C級(jí)黃體(P<0.01)，B級(jí)黃體的受胎率顯著高于C級(jí)黃體(P<0.05)，而移植凍胚時(shí)，A、B、C級(jí)黃體的移植受胎率差別則不顯著(P>0.05)[23]。這可能與移植的凍胚多為A級(jí)胚胎有關(guān)，但在生產(chǎn)上，往往需要考慮胚胎生產(chǎn)成本而選擇C級(jí)胚胎移植C黃體，肯定會(huì)造成受胎率低。

在生產(chǎn)中，胚胎移植受胎率不僅與黃體質(zhì)量還與胚胎質(zhì)量有關(guān)，兼顧到胚胎生產(chǎn)的成本，要根據(jù)實(shí)際情況選擇C級(jí)黃體的受體要不要移植，如果胚胎屬于自己生產(chǎn)的，需要的成本低一些，為了充分利用胚胎和受體牛，C級(jí)黃體的受體是可以移植的；但如果胚胎是購(gòu)買(mǎi)回來(lái)的，消耗的成本相對(duì)要高些，為了得到更好的受胎率，最好還是質(zhì)量好的胚胎選擇黃體質(zhì)量好的受體移植才能得到更高的受胎率。

5 黃體生成溶解過(guò)程激素水平與胚胎移植的關(guān)系

黃體生成、溶解過(guò)程中激素水平的變化對(duì)胚胎移植效果產(chǎn)生了重要的影響，通過(guò)測(cè)定血漿或奶中孕酮含量，是判斷黃體是否適合移植的更為準(zhǔn)確的手段。吳美文等認(rèn)為受體牛排卵第6～8天以后，血漿孕酮濃度超過(guò)一定的水平，如大于5 ng/mL，小于11 ng/mL，黃體質(zhì)量就應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題，胚胎移植后，均有可能妊娠[24]。另外，孕酮與雌二醇的比例高，妊娠率隨之升高。如果孕酮與雌二醇的比例變小，即使孕酮濃度超過(guò)5 ng/mL，同樣會(huì)降低其受胎率[13]。陳明棠等對(duì)水牛3個(gè)等級(jí)黃體與移植日孕酮含量進(jìn)行監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)A級(jí)(黃體直徑在1.5 cm以上)黃體的孕酮含量極顯著高于C級(jí)(黃體直徑在0.8 cm以下)黃體的孕酮含量(31.31 nmol/L>16.77 nmol/L，P<0.01)；B級(jí)(黃體直徑在0.8～1.5 cm之間)黃體的孕酮含量顯著高于C級(jí)(黃體直徑在0.8 cm以下)黃體的孕酮含量(19.47 nmol/L>16.77 nmol/L，P<0.05)[6]；可見(jiàn)黃體大小與孕酮含量有著密切的關(guān)系。

在生產(chǎn)上，受體胚胎移植后能否妊娠，與黃體分泌孕酮的能力，飼養(yǎng)管理，特別是維生素和礦物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)都有很大的關(guān)系，這些因素不僅會(huì)影響受體母牛的發(fā)情和排卵，還會(huì)影響以后的胚胎早期發(fā)育都有很大影響。

6 小 結(jié)

受體牛黃體發(fā)育和位置是判斷能否移植的依據(jù)，因此確認(rèn)黃體等級(jí)及存在的位置是胚胎移植的重要環(huán)節(jié)之一，黃體發(fā)育好的移植效果才好。而牛的胚胎移植是一個(gè)系統(tǒng)的胚胎生物工程，受到多環(huán)節(jié)、多因素的影響，每一個(gè)環(huán)節(jié)、每一個(gè)因素都會(huì)牽一發(fā)而動(dòng)全身，影響最終的胚胎移植效果。如果想提高胚胎移植效果，每一個(gè)細(xì)節(jié)都應(yīng)當(dāng)做到盡善盡美。