胡曉蓉，宋江勤

全球結核病患病率高，社會負擔重，我國是位列全球第二的結核病高負擔國家。WHO全球結核病報告顯示，2020年全球病原學陽性證據(jù)率為58%，我國為55%，低于全球水平，誤診和漏診率較高[1]。傳統(tǒng)的痰涂片、痰培養(yǎng)、傳統(tǒng)核酸擴增等方法周期較長。目前綜合醫(yī)院逐漸將快速分子生物學方法如GeneXpert MTB/RIF檢測法作為涂片的替代方法用于結核病及耐藥結核病病原學檢查的首選方法，而且也作為診斷結核病的金標準之一[1]。本研究分析了GeneXpert MTB/RIF檢測技術在肺結核診斷中的應用，現(xiàn)報告如下。

1 對象與方法

1.1 對象 本研究為回顧性分析，收集2020年7月—2021年6月在天門市第一人民醫(yī)院就診疑似肺結核患者120例作為研究對象，其中男性患者59例，女性患者61例，年齡在29～59歲，平均年齡為（44.29±2.67）歲，體質量指數(shù)平均為（24.58±2.06）kg/m2。所有患者均簽署知情同意書，并經我院倫理委員會論證通過?；颊呷脒x標準：①所有研究對象均診疑似肺結核進我院治療；②所有患者均知情同意。排除標準：①合并自身免疫性疾??；②合并腫瘤疾??；③合并精神異常患者。

1.2 方法 所有患者均留取呼吸道痰標本，進行痰涂片、痰培養(yǎng)、GeneXpert MTB/RIF檢測及比例法藥物敏感試驗（藥敏試驗）。GeneXpert MTB/RIF試劑盒購自美國Cepheid公司。

痰涂片：參照《中國結核病防治規(guī)劃痰涂片鏡檢標準化操作及質量保證手冊》[2]萋-尼抗酸染色要求操作，并按照文獻規(guī)定的光學顯微鏡報告標準進行報告。

痰培養(yǎng)：羅氏固體培養(yǎng)法按照《結核病診斷細菌學檢驗規(guī)程》[3]對痰標本進行前期處理、固體培養(yǎng)操作。將患者的痰液接種到羅氏培養(yǎng)基，置于37 ℃培養(yǎng)箱中孵育。每周觀察結果并報告陽性結果，若滿8周仍未有菌落生長，則報告培養(yǎng)陰性。

GeneXpert MTB/RIF檢測：按照GeneXpert MTB/RIF試劑盒操作手冊進行操作。取患者的痰液標本1 ml，向其中加入2 ml的樣本處理液，劇烈振蕩20次，或渦旋振蕩10 s，室溫孵育10 min，再重復振蕩10 s，室溫孵育5 min，使用新的移液管，將2 ml經過處理的樣本加入GeneXpert MTB/RIF反應盒中進行反應，反應時間為2 h，觀察結果。

比例法藥敏試驗：用接種環(huán)取培養(yǎng)基或痰涂片上的菌落，研磨后與標準麥氏管比對，制成1 mg/ml菌懸液，接種到含利福平的羅氏固體培養(yǎng)基和空白對照管培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)4周后觀察結果。

1.3 觀察指標 計算Xpert MTB/RIF檢測MTB的診斷效能。靈敏度=真陽性病例數(shù)/（真陽性病例數(shù)+假陰性病例數(shù)）×100%；特異度=真陰性病例數(shù)/（真陰性病例數(shù)+假陽性病例數(shù)）×100%；一致率=（真陽性病例數(shù)+真陰性病例數(shù)）/總病例數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計分析，計算GeneXpert MTB/RIF檢測MTB的靈敏度和特異度；并計算GeneXpert MTB/RIF檢測與固體培養(yǎng)法、比例法藥敏試驗結果的一致率。

2 結 果

2.1 一般情況 120例疑似肺結核患者經檢測，痰涂片陽性42例（35.00%），痰涂片陰性78例（65.00%）；痰涂片陰性患者中最后確診為肺部腫瘤、肺炎、支氣管擴張者7例。42例痰涂片陽性患者中，3例GeneXpert MTB/RIF檢測MTB結果為無效，無效率為7.14%。78例痰涂片陰性患者中，7例GeneXpert MTB/RIF檢測MTB結果為無效。最終可進行GeneXpert MTB/RIF檢測者110例；其中痰涂片陰性患者中3例GeneXpert MTB/RIF檢測利福平耐藥結果無法判斷，即最終可進行對比分析者107例。

2.2 GeneXpert MTB/RIF診斷肺結核的效能 107例疑似肺結核患者中，痰培養(yǎng)MTB陽性48例，其中GeneXpert MTB/RIF檢測MTB陽性41例；痰培養(yǎng)MTB陰性59例，其中GeneXpert MTB/RIF檢測MTB陰性52例。以痰培養(yǎng)結果為金標準，GeneXpert MTB/RIF檢測MTB的靈敏度為85.42%（41/48），特異度為88.14%（52/59）。GeneXpert MTB/RIF與痰培養(yǎng)診斷一致率為86.92%（93/107）。見表1。

表1 痰培養(yǎng)與GeneXpert MTB/RIF檢測MTB結果（例）Table 1 Results of sputum culture MTB and GeneXpert MTB/RIF detection MTB (cases)

進行GeneXpert MTB/RIF檢測107例疑似肺結核患者中，痰涂片陽性39例（36.45%），痰涂片陰性68例（63.55%）。以痰培養(yǎng)結果為金標準，痰涂片陽性患者中，GeneXpert MTB/RIF檢測MTB的靈敏度為97.22%（35/36），特異度為33.33%（1/3）（表2）；痰涂片陰性患者中，GeneXpert MTB/RIF檢測MTB的靈敏度為50.00%（6/12），特異度為91.07%（51/56）（表3）。

表2 痰涂片陽性患者痰培養(yǎng)與GeneXpert MTB/RIF檢測MTB結果（例）Table 2 Results of sputum culture and GeneXpert MTB/RIF detection in sputum smear positive patients (cases)

表3 痰涂片陰性患者痰培養(yǎng)與GeneXpert MTB/RIF檢測MTB結果（例）Table 3 Results of sputum culture and GeneXpert MTB/RIF detection in sputum smear negative patients (cases)

2.3 GeneXpert MTB/RIF藥敏試驗檢測效能 比例法藥敏試驗確認痰培養(yǎng)陽性36例患者中利福平耐藥者有4例（11.11%），敏感者有32例（88.89%）。以比例法藥敏結果為金標準，GeneXpert MTB/RIF檢測痰培養(yǎng)陽性患者利福平耐藥的靈敏度為75.00%（3/4），特異度為93.75%（30/32）。同時，對GeneXpert MTB/RIF與比例法藥敏試驗進行一致性檢驗，一致率為91.67%（33/36），2者具有較好的一致性。見表4。

表4 GeneXpert MTB/RIF藥敏試驗與比例法藥敏試驗結果（例）Table 4 Results of GeneXpert MTB/RIF drug sensitivity test and proportional drug sensitivity test (cases)

3 討 論

GeneXpert MTB/RIF系統(tǒng)是一種能夠快速診斷結核病并檢測結核桿菌耐藥性的全新系統(tǒng)，該系統(tǒng)主要針對MTB的位于RpoB基因81 bp區(qū)域（密碼子426—452）的利福平耐藥突變區(qū)（該區(qū)域被稱為利福平耐藥決定區(qū)）設定引物、探針并進行擴增檢測，并根據(jù)其是否發(fā)生基因突變而確定被檢測樣本中是否含有MTB，而且也能檢測其是否對利福平耐藥[4]。該系統(tǒng)能夠對樣本進行全自動的核酸提取、純化及濃縮，而且2 h便可出結果，是全自動的半定量巢式實時聚合酶鏈反應，具有更高的靈敏度和特異度，而且該系統(tǒng)的檢測過程是在完全封閉的檢測盒中進行的，因此該方法不僅具有操作簡單、高度全自動化的優(yōu)點，而且還有很好的生物安全性。該技術已被WHO和我國推薦作為用于快速診斷成人和兒童肺結核和肺外結核以及利福平耐藥，具有確診的作用[1]。

本研究結果顯示，以痰培養(yǎng)結果為金標準，GeneXpert MTB/RIF檢測TBM的靈敏度為85.42%，特異度為88.14%，GeneXpert MTB/RIF與痰培養(yǎng)診斷一致率為86.92%。這與國內其他同行研究結果一致[1，4]。因此GeneXpert MTB/RIF檢測技術可有效的篩檢出肺結核陽性患者，且具備快速便捷的特征，彌補痰培養(yǎng)周期長的缺陷。值得注意的是，本研究所納入的107例患者為疑似肺結核病例，患者標本的低質量或者弱陽性均會使得GeneXpert MTB/RIF檢測技術出現(xiàn)弱信號，從而得出錯誤的結論。同時，本研究對2種方法分析結果不一的病例進行分析，發(fā)現(xiàn)多數(shù)病例存在臨床特征不明顯、采集樣本較少的現(xiàn)象，這可能導致了GeneXpert檢測技術結果的誤判。

本研究進一步分析了GeneXpert MTB/RIF檢測技術分別在痰涂片陽性和陰性患者中對肺結核的診斷價值，結果顯示，痰涂片陽性患者中，GeneXpert MTB/RIF檢測MTB的靈敏度為97.22%，特異度為33.33%；痰涂片陰性患者中，GeneXpert MTB/RIF檢測MTB的靈敏度為50.00%，特異度為91.07%。這說明了人群發(fā)病率或病原體感染率的高低對某一診斷技術靈敏度和特異度的影響，即人群發(fā)病率越高，該診斷技術靈敏度越高，特異度越低，反之則靈敏度越低，特異度越高[5]。

在對患者的GeneXpert MTB/RIF檢查中，主要是將標本的處理、DNA提取以及核酸擴增等工作集于一體，在對患者進行病原微生物檢測過程中，及時有效對患者的耐藥基因進行檢測，在實際的檢測過程中，通過多通道的檢測，一般可在2 h之內即可得到結果。在整個檢測過程中，其較高的封閉性以及自動化，在臨床檢測中的外部影響較小，降低手動操作中可能的誤差，提升檢測的準確性[6]。

本研究顯示，以比例法藥敏結果為金標準，GeneXpert MTB/RIF檢測痰培養(yǎng)陽性患者利福平耐藥的靈敏度為75.00%，特異度為93.75%，對GeneXpert MTB/RIF與比例法藥敏試驗進行一致性檢驗，一致率為91.67%（33/36），2者具有較好的一致性。這與國內研究結果一致[1]。RpoB基因中的81bp耐藥基因的突變是造成肺結核患者利福平耐藥的重要原因。本研究將GeneXpert MTB/RIF中加入利福平耐藥的基因片段檢測試劑，將RpoB基因作為利福平耐藥檢測的靶基因，在檢測中，使用引物探針對RpoB基因中的81bp片段進行選擇性覆蓋，通過其檢測的陽性與否，進一步對患者的耐藥情況進行分析[7-8]。

綜上，本研究發(fā)現(xiàn)GeneXpert MTB/RIF檢測MTB有較高的靈敏度和特異度，對于利福平耐藥的檢測與比例法藥敏試驗有較高的一致性，可以作為結核病診斷和利福平耐藥檢測的金標準。但是本研究還存在一定的局限性，由于納入的樣本量較少，研究數(shù)據(jù)需要大樣本量進一步支持。