車 爽，李 昊，王俊林，周 軍*

（1.天津市藥品檢驗(yàn)研究院，天津 300070；2.天津同仁堂集團(tuán)有限公司，天津 300385；3.天津大學(xué)藥物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，天津 300072）

瀉白糖漿是在主治小兒肺盛氣急喘嗽的宋代兒科名方瀉白散［1］基礎(chǔ)上加減藥味而成，由石膏、桑白皮、瓜蔞子、甘草、麻黃、葶藶子、紫菀、前胡、款冬花、川貝母、苦杏仁、紫蘇葉油和薄荷腦組成。瀉白糖漿具有宣肺清熱、化痰止咳的作用，主治傷風(fēng)咳嗽、痰多胸滿、口渴舌干、鼻塞不通。本方中麻黃的有效成分鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿為擬腎上腺素藥，可興奮交感神經(jīng)，收縮血管、松弛支氣管平滑肌，中樞興奮作用顯著，臨床主要用于治療習(xí)慣性支氣管哮喘和預(yù)防哮喘發(fā)作。鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿作為瀉白糖漿中治療咳嗽的核心靶點(diǎn)之一［2］，有必要對瀉白糖漿中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量進(jìn)行控制。同時(shí)瀉白糖漿為兒童用藥，一般有效成分對兒童產(chǎn)生藥理作用所需的量會低于成年人，所以對其含量控制應(yīng)更為嚴(yán)格。且麻黃堿是合成苯丙胺類毒品也就是制作冰毒最主要的原料，對瀉白糖漿中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量的控制更加有必要。本研究建立了瀉白糖漿中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的高效液相色譜含量測定方法，方法準(zhǔn)確、簡便、快捷，可有效評價(jià)該制劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器LC-20AD高效液相色譜儀（日本島津公司）；Welch Ultimate Phenyl-Ether色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；XS205DU電 子 天 平（METTLER TOLEDO公司）；Milli-Q超純水制備機(jī)（默克股份有限公司）。

1.2 試藥 鹽酸麻黃堿（購自中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號171241-201809，100.0 %）；鹽酸偽麻黃堿（購自中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號171237-201510，99.8%）；甲醇（色譜純，默克股份有限公司）；磷酸、二正丁胺和三乙胺均為市售分析純；水為Milli-Q超純水。樣品來自2021年國家藥品評價(jià)性抽驗(yàn)項(xiàng)目所抽驗(yàn)樣品（批號05191108、05191204、05191201）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 以甲醇-0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）（1.5∶98.5）為流動相；采用Welch Ultimate Phenyl-Ether（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；檢測波長為210 nm；流速為1.0 ml/min；柱溫為30℃；進(jìn)樣量為5 μl。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對照品適量，加流動相制成每1 ml分別含鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿各20 μg的混合溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取本品5 ml，置10 ml量瓶中，以流動相稀釋并定容，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 取除麻黃外的各味藥材，按處方配比，依制備工藝制成陰性樣品，再按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性及專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各5 μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果表明，各色譜峰分離較好，鹽酸麻黃堿的理論板數(shù)不低于5 000。陰性樣品在鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的相應(yīng)位置上未檢出色譜峰，表明該方法的系統(tǒng)適用性及專屬性良好。色譜圖見圖1。

圖1 對照品（A）供試品（B）陰性樣品（C）HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn) 精密稱定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對照品適量，以流動相為溶劑，配制成每1 ml分別含鹽酸麻黃堿2.192 0、4.384 0、8.768 0、21.920 0、43.840 0和109.600 0 μg，含鹽酸偽麻黃堿2.117 9、4.235 8、8.471 5、21.178 8、42.357 6和105.894 0 μg的混合溶液，精密吸取各混合溶液5μl，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，測定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為：鹽酸麻黃堿Y=8 799.33X+399.88（r=1.000 0）；鹽酸偽麻黃堿Y=8 879.99X+108.63（r=1.000 0）。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿在2.192 0～109.600 0 μg/ml、鹽酸偽麻黃堿在2.117 9～105.894 0 μg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取同一批號（批號200105）的瀉白糖漿5 ml，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，對樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的峰面積進(jìn)行測定。結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿RSD分別為0.36%（n=6）和1.33%（n=6），表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取同一批號（批號200105）的瀉白糖漿5 ml，量取6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，分別對各樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量進(jìn)行測定。結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的平均含量分別為59.991 8 μg/ml和25.721 2 μg/ml，RSD分別為0.52%（n=6）和1.44%（n=6），表明重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取同一批號（批號200105）的瀉白糖漿5 ml，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，分別在0、4、8、12、18及24 h測定，結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積的平均值分別為263 413和113 369，RSD分別為0.98%（n=6）和1.62%（n=6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取“2.6”項(xiàng)下已知含量的瀉白糖漿（批號200105）2.5 ml，置10 ml量瓶中，共6份，分別精密加入以流動相溶解的含鹽酸麻黃堿79.840 0 μg/ml和鹽酸偽麻黃堿25.524 4 μg/ml的混合溶液2 ml，再以流動相定容至刻度。依“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算回收率。結(jié)果鹽酸麻黃堿的平均回收率為102.25 %，RSD為1.20 %；鹽酸偽麻黃堿的平均回收率為100.24 %，RSD為1.74 %。見表1和表2。

表1 鹽酸麻黃堿的加樣回收率試驗(yàn)（n=6）

表2 鹽酸偽麻黃堿的加樣回收率試驗(yàn)（n=6）

2.9 樣品含量測定結(jié)果 選取同廠家3批瀉白糖漿樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，測定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的總含量，結(jié)果見表3。

表3 瀉白糖漿中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 提取方法的考查 本研究采用直接稀釋和用乙醚萃取兩種提取方式，結(jié)果使用直接稀釋法所測含量高于使用乙醚提取法；采用直接稀釋的方法，分別用流動相、水和甲醇作為稀釋溶劑，結(jié)果采用流動相稀釋和水稀釋的目標(biāo)成分含量相當(dāng)，均高于采用甲醇稀釋。但采用流動相稀釋的溶劑效應(yīng)更低，基線更平穩(wěn)，故選擇流動相作為稀釋溶劑；采用流動相稀釋的方法，分別考查了稀釋2倍和5倍，結(jié)果采用不同稀釋倍數(shù)對目標(biāo)成分含量幾乎無影響，故選擇峰面積相對較大的稀釋2倍作為稀釋溶劑倍量。

3.2 色譜條件的考查 參考相關(guān)文獻(xiàn)［3-7］及《中國藥典》2020年版一部麻黃項(xiàng)下關(guān)于該兩種成分含量的測定方法對流動相進(jìn)行摸索考查，分別采用甲醇-0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）、乙腈-0.1 mol/L磷酸二氫鉀水溶液（含0.1%磷酸及0.1%三乙胺）按不同比例進(jìn)樣，結(jié)果顯示甲醇-0.092%磷酸溶液（含0.04%三乙胺和0.02%二正丁胺）以比例1.5∶98.5洗脫，各峰分離效果最好且峰形對稱，無其他成分干擾；參照《中國藥典》2020年版一部麻黃含量測定項(xiàng)下鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量測定的有關(guān)要求，結(jié)合DAD檢測器實(shí)際測定的最大吸收波長，最終選取210 nm作為鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的檢測波長，結(jié)果表明測定時(shí)基線平穩(wěn)，峰形良好，無雜質(zhì)峰干擾。

3.3 耐用性考查 取同一批號（批號200105）瀉白糖漿的供試品溶液，分別采用Welch Ultimate Phenyl-Ether（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；Phenomenex SynergiTMPolar-RP 80?（250 mm×4.6 mm，4 μm）色譜柱；Sepax Polar-Phenyl 120?（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，在SHIMADZU LC-20AD高效液相色譜儀和Agilent 1200高效液相色譜儀上進(jìn)樣分析，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰型對稱，均可達(dá)到基線分離，耐用性較好。鹽酸麻黃堿的理論板數(shù)均可在5 000以上。

綜上所述，本文建立了高效液相色譜法測定瀉白糖漿中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量的方法，該方法簡便、快捷，可有效評價(jià)瀉白糖漿中麻黃的質(zhì)量。