吳志偉 周海松 潘璐璐 李敏捷 韓碧華 馬景臣 辛延濤 呂為剛 曲建民趙玉良

1河北省疾病預(yù)防控制中心疫苗臨床研究所，石家莊 050021；2正定縣疾病預(yù)防控制中心疫苗臨床研究項目辦公室，石家莊 050800；3大名縣疾病預(yù)防控制中心疫苗臨床研究項目辦公室，邯鄲 056900；4邯鄲市永年區(qū)疾病預(yù)防控制中心疫苗臨床研究項目辦公室，邯鄲 056000；5淶水縣疾病預(yù)防控制中心疫苗臨床研究項目辦公室，保定 074100

輪狀病毒感染是5歲以下兒童嚴(yán)重腹瀉的最常見病因，據(jù)WHO統(tǒng)計，每年約21.5萬例5歲及以下兒童死于輪狀病毒感染，這些兒童中大多數(shù)生活在低收入國家。據(jù)統(tǒng)計，2007年中國5歲以下兒童中有1 210萬例輪狀病毒腹瀉病例，導(dǎo)致350萬人次門診和22萬人次住院，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，接種輪狀病毒疫苗是預(yù)防該病的有效途徑。盡管目前我國上市的輪狀病毒疫苗有蘭州羔羊輪狀病毒疫苗（LLR）和五價輪狀病毒活疫苗RotaTeq，但仍需成本效益高和安全有效的輪狀病毒疫苗作為補(bǔ)充。武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司研制的六價重配輪狀病毒活疫苗經(jīng)過國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)開展臨床試驗(yàn)（批件號：2015L01112），本研究就口服六價重配輪狀病毒活疫苗在18周歲以上成人、2~6周歲的兒童以及6~12周齡的嬰兒中開展隨機(jī)、雙盲、安慰劑對照設(shè)計的Ⅰ期臨床試驗(yàn)的安全性研究結(jié)果報告如下。

對象與方法

一、研究對象

2016年7月至2017年8月在河北省疫苗臨床研究基地正定縣疾病預(yù)防控制中心開展研究，招募符合年齡要求的當(dāng)?shù)爻Ｗ艏丝诘?8周歲以上成年人40名、2~6周歲的兒童40名和6~12周齡的嬰兒120名，共納入200名受試者。入選標(biāo)準(zhǔn)：18歲以上健康成人和2～6歲健康兒童，可有輪狀病毒疫苗免疫史、無疫苗接種禁忌癥者；6～12周齡健康嬰兒，無輪狀病毒疫苗免疫史、無疫苗接種禁忌癥者。排除標(biāo)準(zhǔn)：有過敏、驚厥、癲癇、腦病和精神病等病史或家族史者；對研究疫苗中任何成分過敏者，既往有任何疫苗接種嚴(yán)重過敏史；患免疫缺陷癥、接受免疫抑制劑治療者等。本研究經(jīng)河北省疾病預(yù)防控制中心倫理委員會批準(zhǔn)（審批號：IRB2016-002），研究對象在篩選前由本人或其監(jiān)護(hù)人充分知情后自愿簽署書面知情同意書。

二、試驗(yàn)疫苗

試驗(yàn)疫苗為武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司生產(chǎn)的口服六價重配輪狀病毒活疫苗，該疫苗是人-?；蛑嘏漭啝畈《疽呙纾蠫1、G2、G3、G4、G8和G9共6個血清型，疫苗規(guī)格2 mL/瓶，分為高劑量（10FFU）、中劑量（10FFU）、低劑量（10FFU）3個劑量水平，疫苗批號及有效期分別為20151104（2017年8月4日）、20151103（2017年8月4日）和20211102（2017年8月1日）。對照疫苗分為安慰劑1（不含抗原及抗酸劑）和安慰劑2（不含抗原但含有抗酸劑），規(guī)格為2.0 mL/瓶，疫苗批號及有效期分別為20151101（2017年8月1日）、20151105（2017年8月15日）。試驗(yàn)疫苗和安慰劑均經(jīng)過中國食品藥品檢定研究院檢驗(yàn)合格，疫苗均在2~8℃條件下運(yùn)輸和保存，在有效期內(nèi)使用。

三、疫苗接種

采用隨機(jī)、盲法、安慰劑對照、劑量遞增設(shè)計，研究分為三個年齡組，按照成人、兒童、嬰幼兒的順序序貫進(jìn)行。每個年齡層的研究對象按2∶1∶1的比例隨機(jī)服用試驗(yàn)疫苗、安慰劑1或安慰劑2。不同劑量的試驗(yàn)疫苗接種方法為：18歲以上成人組及兒童組口服1劑次高劑量疫苗；嬰幼兒組分為3個劑量組（低劑量、中劑量、高劑量），每個劑量組研究對象按照2∶1∶1的比例口服3劑試驗(yàn)疫苗、安慰劑1和安慰劑2，免疫程序?yàn)?、28、56 d。

四、安全性觀察

研究對象每次接種后需在現(xiàn)場留觀至少30 min，觀察30 min內(nèi)的即時反應(yīng)，通過日記卡和聯(lián)系卡收集研究對象接種后0~28 d的所有不良反應(yīng)。按照《預(yù)防用疫苗臨床試驗(yàn)不良反應(yīng)分級標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)原則》進(jìn)行不良反應(yīng)嚴(yán)重程度的分級判定，分為輕度（1級）、中度（2級）、嚴(yán)重（3級）和潛在的生命威脅（4級）共四級：24 h內(nèi)嘔吐1～2次，攝入基本正常且不影響活動為1級；24 h內(nèi)嘔吐3～5次，攝入顯著降低，或活動受限為2級；24 h內(nèi)嘔吐＞5次，無明顯攝入，需靜脈輸液為3級；由于低血壓休克需要住院或其他途徑營養(yǎng)為4級。其他分級表現(xiàn)：輕微或一過性腹瀉，2～3次稀便/d，或輕微腹瀉持續(xù)＜1周為1級；中度或持續(xù)性腹瀉，4～5次/d，或腹瀉＞1周為2級；＞6次水樣便/d，或血樣腹瀉，直立性低血壓，電解質(zhì)失衡，需靜脈輸液＞2 L為3級；低血壓休克，需住院治療為4級。體溫37.1～37.5℃為1級，37.6～39.0℃為2級，>39.0℃為3級。所有受試者均需要監(jiān)測嚴(yán)重不良反應(yīng)的發(fā)生情況直至完成全程免疫后6個月。

五、統(tǒng)計學(xué)分析

使用SAS9.2軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計量資料采用

x

±

s

描述，組間比較采用方差分析；計數(shù)資料采用例數(shù)和率描述，組間比較采用χ檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

結(jié) 果

一、基本情況

40名成年人中，試驗(yàn)組、安慰劑1組和安慰劑2組的年齡分別為（39.06±8.33）歲、（39.12±7.80）歲、（36.53±5.07）歲，男女性別比分別0.81∶1、0.43∶1、0.43∶1，組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（年齡：

F

=0.43，

P

=0.654；性別：確切概率法，

P

=0.757）；40名兒童中，試驗(yàn)組、安慰劑1組、安慰劑2組的年齡分別為（4.83±1.22）歲、（4.54±1.29）歲和（5.04±1.08）歲，組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（

F

=0.44，

P

=0.650），男女性別比分別為1∶1、0.11∶1和2.3∶1，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（確切概率法，

P

=0.019）；120名嬰幼兒中，高劑量組、中劑量組、低劑量組、安慰劑1組和安慰劑2組的年齡分別為（9.29±1.03）、（9.48±1.14）、（9.88±1.34）、（9.39±1.54）和（9.48±1.43）歲，男女性別比分別為0.67∶1、0.82∶1、4∶1、1∶1和1.31∶1，組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（年齡：

F

=0.57，

P

=0.686，性別：確切概率法，

P

=0.093）?？傮w上，試驗(yàn)組和對照組的受試者的年齡和性別構(gòu)成基本均衡。

二、成人組的安全性

由表1可見，成人組中，接種1劑高劑量疫苗后共收集到7例不良反應(yīng)，不良反應(yīng)發(fā)生率為17.50%（7/40）；試驗(yàn)組5例發(fā)生不良反應(yīng)，安慰劑1和2組各1例，三組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（確切概率法，

P

=0.642）。試驗(yàn)組出現(xiàn)1例2級不良反應(yīng)，其他6例均為1級不良反應(yīng)。試驗(yàn)組和安慰劑組均無3級不良反應(yīng)發(fā)生。

表1 成人組及兒童組口服1劑高劑量輪狀病毒疫苗不良反應(yīng)發(fā)生情況（例）

注：試驗(yàn)組：口服10FFU劑量水平疫苗；安慰劑1組：口服不含抗原及抗酸劑安慰劑；安慰劑2組：口服不含抗原但含抗酸劑安慰劑

?

三、兒童組的安全性

兒童組中，接種1劑高劑量疫苗后共有16例發(fā)生不良反應(yīng)，不良反應(yīng)發(fā)生率為40.00%（16/40）。試驗(yàn)組共8例發(fā)生不良反應(yīng)，安慰劑1組和安慰劑2組分別有5例和3例發(fā)生不良反應(yīng)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（確切概率法，

P

=0.646）。1級不良反應(yīng)發(fā)生試驗(yàn)組6例，安慰劑1組3例，安慰劑2組為2例；2級不良反應(yīng)發(fā)生試驗(yàn)組3例，安慰劑1組2例，安慰劑2組1例。試驗(yàn)組和安慰劑組均無3級不良反應(yīng)發(fā)生（表1）。

四、嬰兒組的安全性

嬰兒組中，接種3劑疫苗后共有73例發(fā)生可能與接種相關(guān)的不良反應(yīng)，不良反應(yīng)發(fā)生率為60.83%（73/120）。高、中、低劑量組分別有16例，13例和11例發(fā)生不良反應(yīng)；安慰劑1組和安慰劑2組的不良反應(yīng)發(fā)生率分別為50.00%（15/30）和60.00%（18/30），各組不良反應(yīng)發(fā)生率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ=5.00，

P

=0.287）。不良反應(yīng)主要為發(fā)熱和腹瀉，以1級不良反應(yīng)為主，中劑量組和高劑量組各有1例發(fā)生腹瀉，嚴(yán)重程度達(dá)到3級（表2）。

表2 6~12周齡嬰兒口服3劑輪狀病毒疫苗不良反應(yīng)發(fā)生率比較（例）

注：低劑量試驗(yàn)組：口服10FFU劑量水平疫苗；中劑量試驗(yàn)組：口服10FFU劑量水平疫苗；高劑量試驗(yàn)組：口服10FFU劑量水平疫苗；安慰劑1組：口服不含抗原及抗酸劑安慰劑；安慰劑2組：口服不含抗原但含抗酸劑安慰劑

?

討 論

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、衛(wèi)生條件的改善及安全飲水的普及，細(xì)菌性感染導(dǎo)致的腹瀉病呈逐漸下降趨勢，而病毒性感染導(dǎo)致的腹瀉病則日趨嚴(yán)重，其中輪狀病毒成為5歲以下嬰幼兒重癥脫水性腹瀉的主要致病原。輪狀病毒主要通過糞-口途徑傳播，據(jù)報道我國5歲以下門診腹瀉兒童輪狀病毒檢出率為22.9%，而河北省盧龍縣監(jiān)測點(diǎn)2013—2017年住院腹瀉兒童輪狀病毒檢出率為46.59%，輪狀病毒腹瀉給醫(yī)療保健系統(tǒng)和患兒家庭帶來巨大的負(fù)擔(dān)。研究顯示輪狀病毒疫苗可明顯降低輪狀病毒性胃腸炎，特別是重癥胃腸炎的發(fā)生率，接種疫苗是預(yù)防輪狀病毒感染最經(jīng)濟(jì)有效的辦法。WHO建議將輪狀病毒疫苗納入國家免疫規(guī)劃，因此迫切需要研發(fā)出安全、有效、成本效益更佳的疫苗。

中國輪狀病毒主要的流行株從1990年的G1型變?yōu)?000年的G3型，到2010年變?yōu)镚9型，提示一些亞型在我國的流行和變遷。武漢生物制品研究所研制的口服六價重配輪狀病毒活疫苗是全球首個包含6種血清型的輪狀病毒疫苗，本文對其安全性進(jìn)行評價。結(jié)果顯示，無論是成年人、兒童、還是嬰兒組，試驗(yàn)組的不良反應(yīng)發(fā)生率與對照組的不良反應(yīng)發(fā)生率差異無統(tǒng)計學(xué)意義，且不良反應(yīng)大多為1級，主要為發(fā)熱和腹瀉，與其他關(guān)于輪狀病毒疫苗的安全性研究報道相一致。本研究中的不良反應(yīng)發(fā)生率嬰幼兒組高于成人組，主要原因可能是嬰幼兒免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未成熟，容易受到疾病的侵襲，同時嬰幼兒接種過程中正值流行性感冒、急性胃腸炎等疾病流行期，但出現(xiàn)的腹瀉和發(fā)熱無法排除與疫苗無關(guān)，因此判定為與疫苗接種可能有關(guān)。

為了保護(hù)輪狀病毒進(jìn)入胃內(nèi)免受胃酸破壞，試驗(yàn)疫苗中添加有抗酸成分，考慮抗酸成分可能會對嬰兒有不良反應(yīng)，因此在本研究中設(shè)置了2個安慰劑組，安慰劑1不含抗酸成分，安慰劑2含抗酸成分。結(jié)果表明，安慰劑1和2組的不良反應(yīng)發(fā)生率無差異，說明含有抗酸成分的安慰劑在受試者中具有良好的安全性。

根據(jù)《疫苗臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，Ⅰ期臨床試驗(yàn)是小范圍研究（20~30人），必要時，可采取高、中、低三種劑量，每組8~10人，觀察臨床耐受性。用于嬰幼兒的疫苗，在進(jìn)行人體安全性評價時，應(yīng)按先成人、后兒童、最后嬰幼兒的順序（各20~30人）分步進(jìn)行，本研究滿足以上規(guī)范要求，但是由于樣本量較小，可能無法觀察到罕見不良反應(yīng)，因此需要進(jìn)一步的大樣本研究來確認(rèn)其安全性和有效性。

利益沖突

所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

吳志偉：研究設(shè)計、收集數(shù)據(jù)、起草文章；周海松、潘璐璐、李敏捷、韓碧華、馬景臣、辛延濤、呂為剛、曲建民：研究實(shí)施、收集數(shù)據(jù)；趙玉良：研究設(shè)計、論文審閱、工作支持