王 巖

（寶雞市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，陜西寶雞 721000）

蜂蜜作為一種天然的營養(yǎng)佳品，含有糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素等多種營養(yǎng)成分，不僅能夠補(bǔ)充日常所需營養(yǎng)，還能起到潤肺止咳、消積通便等作用，是一款老少咸宜的滋補(bǔ)品，越來越受到人們的青睞。

氯霉素是首次用化學(xué)合成法生產(chǎn)的廣譜抗生素，對(duì)于革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌具有很好的抑制作用，由于其效高價(jià)廉，曾經(jīng)在獸醫(yī)臨床上被廣泛使用，用于治療和控制蜜蜂、家畜家禽、水產(chǎn)品養(yǎng)殖過程中的傳染性疾病[1]。近年來的研究表明，氯霉素在動(dòng)物體內(nèi)代謝緩慢，有抑制骨髓造血功能等危害[2]，毒副作用嚴(yán)重，因此各國已禁止氯霉素在動(dòng)物源性食品中使用。

1 蜂蜜中氯霉素殘留現(xiàn)狀及限量要求

近年來，隨著人們生活水平的提高，蜂蜜的需求量逐年增加，蜜蜂養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展已成規(guī)模，蜂蜜的品質(zhì)安全是該產(chǎn)業(yè)能否持續(xù)健康發(fā)展的決定性因素，而蜂蜜中氯霉素的殘留超標(biāo)情況已經(jīng)成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)[3]。

1994年，聯(lián)合國糧農(nóng)組織就禁止在食用性動(dòng)物養(yǎng)殖中使用氯霉素[4]，我國食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)要求蜂蜜中不得檢出農(nóng)獸藥殘留，中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第250號(hào)要求禁止在食品動(dòng)物中使用氯霉素。盡管如此，在蜂蜜中檢出氯霉素殘留超標(biāo)的現(xiàn)象仍然存在。2016—2019年，陜西省蜂蜜中氯霉素檢出陽性率為2.44%[5]。2016—2017年，云南省蜂蜜中氯霉素檢出陽性率為30.3%[6]。由此可見，蜂蜜中氯霉素殘留超標(biāo)情況不容忽視。

2 蜂蜜中氯霉素殘留檢測常見方法

目前，蜂蜜中氯霉素殘留檢測常見的方法有微生物法、免疫分析法、色譜法和其他新技術(shù)等。

2.1 微生物法

微生物法是利用氯霉素對(duì)特定菌株的抑菌作用來篩查食品中是否含有氯霉素的方法，常見的檢驗(yàn)方法有杯碟法、棉簽法、紙片法、瓊脂擴(kuò)散法等[7]。其中，棉簽法在實(shí)踐中應(yīng)用最為廣泛，方法是用棉簽蘸取動(dòng)物源食品樣本的組織液，將其放在涂滿枯草桿菌的培養(yǎng)基中保溫過夜，觀察四周是否出現(xiàn)抑菌圈，若出現(xiàn)則表明樣本中含有氯霉素殘留。該方法簡便易行，耗時(shí)較短，但特異性和靈敏度較差，對(duì)所有的抗生素均有此反應(yīng)。杯碟法與棉簽法相比，能排除一些抗生素的干擾，如青霉素、土霉素等，特異性更強(qiáng)，靈敏度更高，檢出限可達(dá)0.25 mg·kg-1[8]。

2.2 免疫分析法

免疫分析法是一種利用抗原抗體特異性結(jié)合，且具有可逆性的氯霉素檢測方法，常見的檢測方法有酶聯(lián)免疫法、膠體金免疫層析技術(shù)、放射免疫分析法等。

酶聯(lián)免疫法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是檢測蜂蜜中氯霉素的主要分析方法，其原理是將氯霉素與大分子載體蛋白結(jié)合制成人工抗原，與抗體進(jìn)行特異性反應(yīng)，形成酶標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物，在酶的催化作用下，使底物水解產(chǎn)生一種有色物質(zhì)，根據(jù)特定波長下有色物質(zhì)吸光度和氯霉素濃度制成標(biāo)準(zhǔn)曲線來測定其含量的一種方法。劉桃[9]等以抗氯霉素單克隆抗體為抗原，氯霉素-辣根過氧化物為標(biāo)記物建立了直接競爭酶聯(lián)免疫吸附法測定蜂蜜樣品中氯霉素，檢出限為0.15 ng·g-1，回收率在97.58%～100.94%，批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于11%，表明方法穩(wěn)定且準(zhǔn)確度高。

楊娟等[10]利用膠體金免疫快速檢測試紙條檢測蜂蜜中氯霉素殘留，整個(gè)過程只需25 min，準(zhǔn)確率高達(dá)99.5%。許勝男[11]等建立了磁固相萃取前處理和膠體金免疫層析試紙條聯(lián)用技術(shù)，檢測蜂蜜中氯霉素殘留，檢出限為0.2 ng·g-1，不但降低了檢測成本，還具有操作簡便、快捷等特點(diǎn)，具有良好的應(yīng)用前景。

陳小雪等[12]用放射免疫分析法檢測食品中氯霉素殘留量，最低檢測限為0.15 μg·kg-1，方法準(zhǔn)確、選擇性高。但因其具有明顯的放射性污染源，會(huì)對(duì)周圍的人員和環(huán)境造成危害，使用較為局限。

2.3 色譜法和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

色譜法和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法是利用不同的色譜柱，對(duì)樣品中的氯霉素殘留先分離后檢測的一種檢測方法，常見的有高效液相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法。

高效液相色譜法是以液體為流動(dòng)相，利用高壓輸液系統(tǒng)，使樣品在色譜柱中進(jìn)行分離后檢測的一種分析方法，具有靈敏度高、分離速度快、可靠性高等特點(diǎn)。徐麗艷[13]等用Oasis HLB固相萃取柱凈化，乙酸乙酯提取的方法，采用高效液相色譜法檢測蜂蜜中氯霉素殘留，檢測限為0.1 mg·kg-1。肖婉娜[14]等建立了高效液相色譜法檢測蜂蜜中氯霉素的方法，檢出限為0.625 μg·kg-1，在0.10～10.00 μg·mL-1線性關(guān)系良好。

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法是以氣相色譜作為進(jìn)樣和分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)的一種分析方法，既具有氣相色譜法快速高效的特點(diǎn)，又能利用質(zhì)譜檢測器進(jìn)行定性鑒定和結(jié)構(gòu)分析，是一種比較成熟的分析方法。主要采用EI源（電子轟擊源）和NCI源（負(fù)離子化學(xué)源），其中NCI源氣相色譜質(zhì)譜法的檢出限可以達(dá)到0.1 μg·kg-1[15]。有研究表明，采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法檢測蜂蜜中氯霉素，回收率可達(dá)83%～104%，檢出限為0.05 μg·kg-1，定量限為0.2 μg·kg-1[16]。

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法是以液相色譜為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)的蜂蜜中氯霉素殘留常見的檢測方法，也是食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18932.19—2003、GB 31658.2—2021等規(guī)定的蜂蜜、動(dòng)物性食品中氯霉素殘留法定的檢測方法，具有準(zhǔn)確度高、靈敏度高、選擇性強(qiáng)等特點(diǎn)，常與固相萃取、分子印跡、QuEChERS等凈化方法聯(lián)用，以去除蜂蜜中的基質(zhì)干擾，提高檢測效率。于浩洋等[17]采用MCX固相萃取柱凈化，建立超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定蜂蜜中氯霉素殘留，檢出限為0.08 μg·L-1，回收率可達(dá)102.7%～105.6%。趙軍溪等[18]采用全自動(dòng)固相萃取超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定蜂蜜中氯霉素殘留，檢出限可達(dá)0.05 μg·kg-1。李正元等[19]建立了QuEChERS提取與高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定蜂蜜中氯霉素殘留，解決了固相萃取法前處理過程中固相萃取柱堵塞的問題，在0.5～200.0 μg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回收率可達(dá)81%～120%，簡便快捷，靈敏度高。

2.4 其他新技術(shù)

表面增強(qiáng)拉曼散射法是一種新型的氯霉素檢測方法，其原理是利用吸附在粗糙金屬表面分子的拉曼散射信號(hào)可被放大這一特性，以金、銀、銅納米粒子等作為基底，檢測食品中的氯霉素殘留。孫文等[20]利用自聚合法合成的金納米粒子，將氯霉素分子通過氫鍵吸附在其基底上，優(yōu)化激發(fā)光波長，實(shí)現(xiàn)了對(duì)蜂蜜中氯霉素分子的高靈敏度檢測，檢測限可達(dá)10-10mol·L-1，回收率在88.00%～101.12%，方法快速簡便，準(zhǔn)確率高。

生物傳感器法又稱生物芯片法，是利用生物分子之間的相互反應(yīng)將其轉(zhuǎn)化為光信號(hào)、電信號(hào)等進(jìn)行檢測的一種方法。FERGUSON等[21]采用表面等離子共振生物傳感器法檢測蜂蜜中氯霉素殘留，檢出限為0.02 g·kg-1。

毛細(xì)管電泳法是利用帶電組分在高壓電場中遷移效率不同而進(jìn)行分離的檢測方法。分離速度快，分析成本低，但測定低限較高，陳天豹等[22]采用毛細(xì)管電泳法結(jié)合紫外檢測器檢測蜂蜜中氯霉素殘留，回收率大于89.6%，但檢測限僅為10 μg·L-1，靈敏度較差，無法滿足低濃度氯霉素殘留的檢測。

3 結(jié)語

從近幾年對(duì)蜂蜜中氯霉素殘留檢測情況來看，盡管我國早已禁止在食用性動(dòng)物中使用氯霉素，但是仍在陜西、云南、深圳[23]等地蜂蜜中檢出氯霉素超標(biāo)，說明蜜蜂養(yǎng)殖業(yè)依然存在非法使用氯霉素的現(xiàn)象。目前隨著科技的進(jìn)步和檢測水平的提高，在蜂蜜和其他食品中氯霉素的檢測方法有很多，其中酶聯(lián)免疫法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法是比較常見的幾種分析方法，也是食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的法定檢測方法，具有靈敏度高，準(zhǔn)確度好和回收率高等特點(diǎn)。但同時(shí)也存在一些不足，如酶聯(lián)免疫法容易出現(xiàn)假陽性，色譜質(zhì)譜聯(lián)用法前處理較為煩瑣，所需儀器成本較高。因此，在今后的研究中，應(yīng)重點(diǎn)克服和解決酶聯(lián)免疫法和色譜質(zhì)譜聯(lián)用法中存在的問題，以期建立一種簡便高效、靈敏度高、使用成本較低的蜂蜜中氯霉素檢測方法。