張慶如，劉士萌，周佳雪，郝鎰涵，鄭金環(huán)，周曙光，許利軍★，王學(xué)靜，陳立功,4★，劉聚祥，4

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河北保定 071001；2.保定市畜牧工作站，河北保定 071051；3.河北省畜牧獸醫(yī)研究所，河北保定 071000；4.河北省太行雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院，河北贊皇 051230）

大腸桿菌呈全球性分布，存在于多種哺乳動(dòng)物和禽類，是人和動(dòng)物腸道內(nèi)的定居菌群，正常的雛雞體內(nèi)，腸道中10%～15%的大腸桿菌屬于潛在致病菌。銅綠假單胞菌又稱綠膿桿菌，常分布于潮濕環(huán)境中，也可存在于人和動(dòng)物的皮膚、呼吸道和腸道等部位，是引起創(chuàng)傷感染最常見(jiàn)的病原。據(jù)報(bào)道，銅綠假單胞菌與雞和火雞的多病因呼吸道病有關(guān)。變形桿菌屬的奇異變形桿菌可引起感染雞表現(xiàn)呼吸道癥狀、腹瀉、癱瘓、蜂窩織炎甚至死亡。表現(xiàn)為食欲減退、嘔吐和腹瀉等。2021年9月，河北保定某雞場(chǎng)飼養(yǎng)的太行雞發(fā)病，主要表現(xiàn)為呼吸道癥狀及面部腫脹。根據(jù)病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，初步判定該場(chǎng)雞發(fā)生了大腸桿菌、銅綠假單胞菌和奇異變形桿菌的混合感染，并根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果對(duì)該雞群疾病進(jìn)行了治療。本文對(duì)太行雞大腸桿菌、銅綠假單胞菌和奇異變形桿菌混合感染的發(fā)病情況、病理變化、實(shí)驗(yàn)室診斷及防治措施進(jìn)行了介紹，以為相關(guān)從業(yè)人員提供參考。

1 發(fā)病情況

2021年9月，保定某養(yǎng)殖場(chǎng)飼養(yǎng)的72日齡太行雞發(fā)病，據(jù)養(yǎng)殖場(chǎng)負(fù)責(zé)人描述，病雞最先出現(xiàn)打噴嚏、呼嚕、咳嗽等呼吸道癥狀，鼻腔流出少量水樣黏液，發(fā)病3天后有的病雞面部腫脹，眶下竇尤為明顯，雞群呼吸道癥狀加重，夜間尤為明顯，并開(kāi)始零星死亡，每天死亡雞只10只左右。

2 剖檢病變

對(duì)病死雞進(jìn)行病理剖檢，可見(jiàn)鼻腔積有黏液或少許干酪物（2/6）；病雞面部腫脹（3/6）：腦部皮下、頸部皮下或眶下竇呈膠凍樣浸潤(rùn)或呈黃色干酪樣（5/6）。心外膜附有黃色或白色纖維素樣分泌物（4/6）；局部肺臟呈灰綠或暗紅色（2/6）；肝臟附有黃色或白色纖維素樣分泌物（3/6）；氣囊附有泡沫樣分泌物或黃白色干酪物（6/6）；氣管黏膜附有黏液或干酪物（2/6）；脾臟瘀血、輕度腫脹（2/6）；腎臟瘀血、輕度腫脹（2/6）；十二指腸和空腸黏膜出血（1/6）。其余臟器未見(jiàn)肉眼病變。

3 實(shí)驗(yàn)室診斷

3.1 病毒分子生物學(xué)診斷

按有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道方法進(jìn)行病料的研磨、除菌、RNA提取及RT-PCR檢測(cè)，瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明病料均呈禽偏肺病毒、傳染性支氣管炎病毒、禽流感病毒和新城疫病毒陰性。

3.2 細(xì)菌分離鑒定

無(wú)菌操作取病雞皮下分泌物、肝臟、氣囊等病料，分別接種于TSA平板、麥康凱瓊脂平板和十六烷基三甲基溴化銨瓊脂平板上，按常規(guī)進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)與純化。結(jié)果表明自收集病料共純化到3種細(xì)菌。第一種純化細(xì)菌接種在麥康凱瓊脂平板上呈邊緣整齊、稍隆起、表面光滑濕潤(rùn)，圓形、紅色菌落；第二種純化細(xì)菌在十六烷三甲基溴化銨瓊脂上呈扁平無(wú)定型，向周邊擴(kuò)散或略有蔓延趨勢(shì)，呈灰白色，周圍有水溶性色素菌落；第三種純化細(xì)菌在TSA平板上呈同心環(huán)均勻擴(kuò)展的薄膜狀生長(zhǎng)，形成以細(xì)菌接種部位為中心的厚薄交替、同心圓型的層層波狀菌苔。選取3種純化細(xì)菌的單菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢，結(jié)果顯示：3種細(xì)菌均為革蘭氏陰性、無(wú)芽孢桿菌。

參照細(xì)菌基因組DNA小量純化試劑盒說(shuō)明書提取3種分離細(xì)菌代表菌株的基因組DNA。按文獻(xiàn)方法進(jìn)行細(xì)菌的16S rRNA基因PCR檢測(cè)，陽(yáng)性PCR產(chǎn)物送生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行雙向測(cè)序。測(cè)序結(jié)果經(jīng)拼接后分別經(jīng)BLAST比對(duì)，結(jié)果顯示，3種分離細(xì)菌代表菌株的16S rRNA基因分別與大腸桿菌、銅綠假單胞菌和奇異變形桿菌的同源性最高。根據(jù)上述結(jié)果，初步判斷上述3種細(xì)菌分別為大腸桿菌、銅綠假單胞菌和奇異變形桿菌。

3.3 藥敏試驗(yàn)

采用紙片擴(kuò)散（K-B）法檢測(cè)3.2中3種細(xì)菌對(duì)阿莫西林、林可霉素、阿米卡星、四環(huán)素、頭孢噻肟、強(qiáng)力霉素、多粘菌素、恩諾沙星和諾氟沙星等9種抗菌藥物的敏感性。結(jié)果表明，大腸桿菌對(duì)頭孢噻肟、阿米卡星、諾氟沙星和恩諾沙星極敏，對(duì)其他5種藥物均耐藥；銅綠假單胞菌對(duì)頭孢噻肟、阿米卡星、諾氟沙星和恩諾沙星均極敏，對(duì)四環(huán)素和強(qiáng)力霉素均低敏，對(duì)其余3種藥物均耐藥；變形桿菌對(duì)頭孢噻肟和諾氟沙星均極敏，對(duì)阿米卡星和恩諾沙星均高敏，對(duì)阿莫西林低敏，對(duì)其余4種均耐藥。

4 防治

根據(jù)發(fā)病雞的臨床癥狀觀察、病理學(xué)剖檢、腫頭綜合征相關(guān)病毒分子生物學(xué)檢測(cè)和細(xì)菌學(xué)診斷結(jié)果，初步判定該雞場(chǎng)太行雞發(fā)生了3種細(xì)菌的混合感染。建議采取措施如下：

4.1 加強(qiáng)雞群飼養(yǎng)管理

管理上應(yīng)注意雞只飼養(yǎng)密度，避免擁擠。注意環(huán)境溫度和濕度，避免過(guò)冷、過(guò)熱、過(guò)于干燥或過(guò)于潮濕。夜晚做好雞只棲息環(huán)境的通風(fēng)換氣，減少有害氣體帶來(lái)的不良應(yīng)激。雞只放養(yǎng)后，及時(shí)徹底清除棲息環(huán)境中糞便，并做好環(huán)境、用具的消毒工作，減少雞場(chǎng)細(xì)菌的載量。

4.2 治療方法

發(fā)病早期，盡早進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，根據(jù)藥敏結(jié)果選用表現(xiàn)為高敏及以上的抗菌藥物進(jìn)行治療。同時(shí)添加適量維生素C，增強(qiáng)雞只的抗病力。

4.3 及時(shí)總結(jié)發(fā)病原因

雞只抵抗力強(qiáng)時(shí)，自身攜帶的條件致病菌可能不引發(fā)疾??；但在各種應(yīng)激因素刺激下，細(xì)菌可以通過(guò)黏膜定植或皮膚傷口進(jìn)入宿主體內(nèi)，從而誘發(fā)疾病。據(jù)調(diào)查，雞群發(fā)病前1周曾注射過(guò)新流腺疫苗，免疫接種過(guò)程中使用少數(shù)針頭，棲息環(huán)境中雞只密度過(guò)大。因此該場(chǎng)雞細(xì)菌混感的發(fā)生可能與免疫應(yīng)激、密度過(guò)大及免疫過(guò)程中不勤換針頭有關(guān)。為了防止接種疫苗時(shí)造成細(xì)菌的擴(kuò)散污染，建議管理人員嚴(yán)格規(guī)范接種操作，對(duì)注射器、針頭和注射部位要進(jìn)行充分消毒，并勤換針頭。