宋新然 李艷秋 白 偉 楚善合 趙吉月 王德眾 戰(zhàn)立聰

(大連圣亞旅游控股股份有限公司，大連，116023)

白肌病(white myopathy)又稱肌肉營養(yǎng)不良(muscular dystrophy)或肌透明變性，目前認(rèn)為是由于維生素E和硒的缺乏引起的一種急性、亞急性或慢性營養(yǎng)代謝障礙性疾病，該病的主要發(fā)病群體為各類動(dòng)物的未成年個(gè)體[1]。動(dòng)物患病后主要表現(xiàn)為精神沉郁、食欲下降、共濟(jì)失調(diào)等[2-3]。禽類還表現(xiàn)為打噴嚏、甩鼻、頭部和眼周水腫、結(jié)膜潮紅、腹瀉消瘦、后肢無力等癥狀，部分病禽出現(xiàn)頭頸及腹下部腫大[2，4-5]。該病的病理變化主要包括全身骨骼肌廣泛的對稱性肌營養(yǎng)不良[6]，心肌擴(kuò)張變薄、心包積液、心肌松弛[3-5]，滲出性素質(zhì)[4]，腎實(shí)質(zhì)有出血點(diǎn)和灰色的斑狀灶等[3，7]。因該病多為群體發(fā)病，且發(fā)病急，病程短，死亡率高，給畜禽養(yǎng)殖及繁育工作帶來較大的影響[3-4]。目前相關(guān)的報(bào)道主要集中在幼齡畜、禽，包括羔羊、犢牛、仔豬、馬駒、雛雞和雛鴨等，對于企鵝(Pygoscelisspp.)白肌病的研究相對較少[2-3，6]。

巴布亞企鵝(Pygoscelispapua)又稱白眉企鵝、金圖企鵝、紳士企鵝，屬鳥綱(Aves)，楔翼總目(Impennes)，企鵝科(Spheniscidae)，阿德利企鵝屬，主要分布在南極大陸及亞南極圈的眾多海島，以南極磷蝦和魚類等水生動(dòng)物為食[8]。巴布亞企鵝分布相對較廣，數(shù)量眾多，且因其外觀憨態(tài)可掬，十分惹人喜愛，成為國內(nèi)海洋館和動(dòng)物園中極地動(dòng)物的代表之一。

目前，大連圣亞海洋世界場館內(nèi)企鵝的人工飼養(yǎng)溫度保持在(0±2)℃，陸區(qū)面積140多m2，使用的飼料主要是冰鮮的魚類和南極磷蝦，因?yàn)槔鋬霰４孢^程中，維生素會(huì)有一定地流失，因此館內(nèi)飼養(yǎng)的巴布亞企鵝每日混飼馬祖瑞5M25 3～4粒進(jìn)行相應(yīng)補(bǔ)充。

自2018年起，繁育的企鵝幼雛開始出現(xiàn)發(fā)病和死亡的情況。因其屬于晚成鳥類，幼雛需親鳥從胃內(nèi)反芻食物進(jìn)行飼喂，給觀察和治療工作帶來了一定的難度。研究發(fā)現(xiàn)，該病主要發(fā)生在40日齡以內(nèi)的幼企鵝，且發(fā)病企鵝巢多在蒸發(fā)器下方。發(fā)病前無任何異常表現(xiàn)，初期可見口吐透明、略黏稠的液體，生長減緩較明顯，正常40日齡幼雛每日體重增長量一般為120 g左右，患病企鵝則表現(xiàn)為體重不增或下降，死亡前2～4 d開始出現(xiàn)頭頸無力，呼吸急促，病程3～5 d，多取死亡轉(zhuǎn)歸。據(jù)統(tǒng)計(jì)，該病在新生企鵝中的發(fā)病率約為25%，病死率可達(dá)90%，對場館內(nèi)巴布亞企鵝的保育工作產(chǎn)生了嚴(yán)重影響，因此，對該病進(jìn)行了進(jìn)一步的鑒別診斷及治療方法的探究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

2018—2020年飼養(yǎng)期內(nèi)，在大連圣亞海洋世界場館內(nèi)對其自行繁育的巴布亞企鵝幼雛的體重、精神狀態(tài)、攝食及排便等情況進(jìn)行觀察和記錄。

1.2 大體剖檢及病理組織學(xué)檢查

當(dāng)有企鵝患病并確認(rèn)死亡后，立即進(jìn)行解剖，詳細(xì)檢查各臟器的病理變化，并將發(fā)生病變的心、肺、肝、胰、腎等器官固定于體積分?jǐn)?shù)10%的中性福爾馬林溶液中，送往第三方進(jìn)行病理組織學(xué)鑒定。

1.3 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

按照無菌操作程序，使用拭子從肌肉、肺、心臟、心包積液、肝臟、胰腺等器官提取病料，接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基和普通瓊脂培養(yǎng)基，分別以25、37 ℃培養(yǎng)48、24 h后觀察微生物生長情況并記錄。

2 結(jié) 果

2.1 大體剖檢

正常的巴布亞企鵝成體胸大肌為深紅色，質(zhì)地相對堅(jiān)實(shí)(圖1A)，病死企鵝幼雛的肌肉為淡粉色，質(zhì)地松軟(圖1B)。對病死企鵝內(nèi)臟器官剖檢可見其心臟表面出血，心臟質(zhì)地相對松軟，顏色粉白(圖1D)。病變的心包如圖1C所示，其中存在大量淡黃色、半透明的液體。病死企鵝脾臟被膜局部呈灰黃色，有出血和淤血，病變的胰臟(圖1E)可見明顯的組織出血和凝固性壞死。病死企鵝的肺臟表面粗糙，如圖1F所示，肺臟表面正常組織為淡粉色，伴有大面積的暗紅色出血斑。將肺臟切開后，切面為灰紅色，質(zhì)地松軟如海綿樣，血管內(nèi)可見有血栓形成。肝臟剖檢發(fā)現(xiàn)局部被膜灰黃，質(zhì)地相對松軟(圖1G)。

2.2 病理鏡檢

病理學(xué)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)病死企鵝的心、肝、肺、胰等多個(gè)器官均有不同程度的病變。在光鏡下，病死企鵝肺部表現(xiàn)為單/雙側(cè)肺細(xì)支氣管腔、肺泡腔內(nèi)存在大量紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞，伴有出血和淤血，部分組織出血性梗死，臟層胸膜見少量中性粒細(xì)胞浸潤，鄰近的食管未見病變(圖2A)。心臟剖檢發(fā)現(xiàn)其表面出血，剖開后在心房心室交界處有灰白帶。光鏡下可見其心肌間質(zhì)水腫，小血管充血，心臟及心外膜見灶狀中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤(圖2B)。個(gè)別病死企鵝還表現(xiàn)有左右心房擴(kuò)張的情況。腎臟表面光滑，呈灰黃色，伴有淤血和間質(zhì)水腫，腎間質(zhì)及被膜見少量中性粒細(xì)胞浸潤，腎小管上皮細(xì)胞部分壞死。肝臟局部被膜灰黃，有淤血和細(xì)胞灶狀水腫變性及壞死(圖2C)，或有少量的局部水腫和變性壞死。圖2D為病死的38日齡雌性幼年巴布亞企鵝肝臟的病理送檢結(jié)果，肝組織為灰黃色，內(nèi)見一擴(kuò)張囊腔，囊壁未見內(nèi)襯上皮，局灶肝細(xì)胞空泡變性，間質(zhì)內(nèi)可見少許炎性細(xì)胞浸潤。肌肉病理送檢結(jié)果顯示多個(gè)動(dòng)脈有血栓形成。脾臟被膜局部呈灰黃色，有出血和淤血。胰臟外觀無異常，病理檢查發(fā)現(xiàn)存在淤血。

2.3 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

對病死企鵝的肌肉、肺、心臟、心包積液、肝臟、胰腺這些肉眼可見的病變臟器進(jìn)行細(xì)菌和真菌培養(yǎng)后，均未觀察到有菌落生長。

3 治療與預(yù)防

對場館內(nèi)巴布亞企鵝投喂的飼料多為冷凍保存，易造成包括維生素E等不穩(wěn)定的營養(yǎng)成分流失，由此分析幼雛的白肌病主要是由于維生素E缺乏導(dǎo)致的，并采取了相應(yīng)的治療性診斷措施。

因幼企鵝只能進(jìn)食親企鵝反芻的食物，不能主動(dòng)進(jìn)食，大連圣亞海洋世界館于2019年開始，嘗試在疑似發(fā)病幼雛的親企鵝每日飼料中添加維生素E 30 mg，并每日監(jiān)測這些幼雛的體重及精神狀態(tài)。治療性診斷結(jié)果顯示，發(fā)病幼雛普遍在其親企鵝用藥3 d左右，體重開始上升，精神狀態(tài)也恢復(fù)正常。病情好轉(zhuǎn)之后，繼續(xù)以每日30 mg的劑量，連續(xù)給藥補(bǔ)7 d后結(jié)束治療，未見復(fù)發(fā)。結(jié)合往年的治療經(jīng)驗(yàn)，于2020年對繁育親企鵝飼料中集體添加維生素E 70 mg/d，待幼企鵝獨(dú)立攝食后，繼續(xù)在其飼料中單獨(dú)添加維生素E 70 mg/d，未出現(xiàn)發(fā)病情況。

4 討 論

4.1 臨床表現(xiàn)

與其他禽類和哺乳動(dòng)物相似，該病主要發(fā)生于幼企鵝，這可能是因?yàn)橛g動(dòng)物的代謝更加旺盛，對維生素E和硒的需求也相對較大[9]。企鵝發(fā)病的表現(xiàn)與其他禽類也較為相似，發(fā)病通常比較突然、病程短、死亡率高。所不同的是，患病企鵝運(yùn)動(dòng)狀態(tài)和行為習(xí)慣的變化并不明顯，僅表現(xiàn)為頭頸無力，后期可能出現(xiàn)呼吸急促的癥狀，這可能是由于幼企鵝多趴伏在親企鵝腹下以保持體溫，運(yùn)動(dòng)量也較小，不易觀察到其行走狀態(tài)。因此，與其他禽類相比，不易察覺病情。

4.2 剖檢病理

剖檢發(fā)現(xiàn)企鵝骨骼肌較其他陸生禽類相比顏色更加深紅，這可能是因?yàn)槠簌Z主要在水中覓食，需要增加肌肉中肌紅蛋白的含量以增強(qiáng)其儲(chǔ)氧量從而提高屏息潛水能力[10-11]?；疾∑簌Z的肌肉和臟器病變與其他哺乳動(dòng)物和禽類較為相似，特征較為明顯，不同的是，在剖檢過程中未發(fā)現(xiàn)滲出性素質(zhì)。關(guān)于這一點(diǎn)，有研究發(fā)現(xiàn)維生素E和硒的共同缺乏會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物毛細(xì)血管基底膜變薄，從而改變毛細(xì)血管通透性，重者還會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞破裂，引起出血。繁育企鵝投喂的全魚飼料在冷凍保存過程中可能造成維生素E的流失，但硒的含量不會(huì)受到影響，可能對病死企鵝毛細(xì)血管通透性未造成明顯改變，從而未出現(xiàn)如其他禽類所表現(xiàn)的滲出性素質(zhì)[12-13]。另外，由于缺乏正常巴布亞企鵝幼雛的肌肉樣本做對照，也不能斷定病死雛企鵝肌肉顏色較淺完全是由于維生素E缺乏所致。

病理學(xué)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)心、肝、肺、胰等多個(gè)器官均有不同程度的病變，其主要表現(xiàn)有組織出血、淤血、水腫、炎性細(xì)胞浸潤等特征，這可能是因?yàn)榫S生素E在體內(nèi)多以α生育酚的形式存在，可有效清除體內(nèi)自由基、活性氧氮等有害物質(zhì)，還可以增強(qiáng)動(dòng)物組織細(xì)胞多種抗氧化酶的作用，維生素E的缺乏則會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物機(jī)體抗氧化環(huán)境的破壞，引起一系列的病理變化[14-15]。

4.3 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

對病死企鵝的多個(gè)病變臟器進(jìn)行細(xì)菌和真菌培養(yǎng)后，均未觀察到有菌落生長，但病理檢查結(jié)果顯示肝、肺等臟器均存在炎性細(xì)胞浸潤，這可能是因?yàn)?，維生素E的缺乏導(dǎo)致細(xì)胞的變性壞死，引發(fā)無菌性炎癥[14]。

4.4 治療與預(yù)防

該病的主要治療方法是增加患病動(dòng)物對硒和維生素E的攝入。一般根據(jù)動(dòng)物種類的不同及發(fā)病情況在飼料中添加適量的亞硒酸鈉和維生素E即可獲得顯著效果，也可將亞硒酸鈉溶于水中飼喂，更易均勻混合，但需注意防止飼喂過量引起中毒[4-5]。家禽一般在用藥后1 d即可好轉(zhuǎn)，繼續(xù)用藥1周可基本恢復(fù)正常，對于危重的患病動(dòng)物可根據(jù)體重以適量的亞硒酸鈉生理鹽水溶液肌注進(jìn)行急救[2，5]。

通過對場館內(nèi)幼企鵝的頻繁發(fā)病進(jìn)行治療性診斷，進(jìn)一步證實(shí)該病是由于維生素E缺乏所致。在巴布亞企鵝幼雛群體中，白肌病表現(xiàn)為泛發(fā)，發(fā)病急，病程短，又因其癥狀表現(xiàn)相對較晚且不太典型，一旦發(fā)病，留給治療的時(shí)間往往不夠充分，死亡率較高。因此，對于此病應(yīng)提前做好預(yù)防，在繁育期企鵝的日糧中添加適量的維生素E即可有效預(yù)防此病的發(fā)生，避免不必要的損失。

觀察發(fā)現(xiàn)，發(fā)病企鵝巢體多在蒸發(fā)器下，噪音相對較大，雖然已有研究認(rèn)為噪音對企鵝的影響較小[16]，但對于繁殖期企鵝或企鵝幼雛影響的相關(guān)研究還比較少，有待于進(jìn)一步的探究。另外，蒸發(fā)器下溫度相對較高，可能會(huì)對幼企鵝的新陳代謝產(chǎn)生一定的促進(jìn)作用，加快營養(yǎng)物質(zhì)包括維生素E的消耗。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)維生素E的抗氧化性能可有效降低熱應(yīng)激造成的自由基損傷，從而影響動(dòng)物的環(huán)境適應(yīng)能力[17]。因此，提供更為適宜的溫度和相對安靜的環(huán)境對于幼企鵝白肌病的預(yù)防可能具有積極作用。

另有研究發(fā)現(xiàn)，自然環(huán)境下維生素E會(huì)在野生企鵝的卵黃內(nèi)大量富集，其濃度可達(dá)到食物中濃度的1.5～4.5倍[18]，這足以證明維生素E在企鵝幼雛生長和發(fā)育過程中的重要作用，因此，在企鵝繁育期開始前就進(jìn)行維生素E的投喂，可能會(huì)更有效地避免幼企鵝出生后維生素E的攝入或吸收不足。但由于企鵝是反芻鳥類，幼企鵝所攝食的魚糜會(huì)提前在親企鵝的胃內(nèi)與胃酸融合并進(jìn)行一定程度的消化，而這個(gè)消化過程對于維生素E的保留程度還不明確，因此，對于維生素E在飼料中的添加時(shí)機(jī)和添加劑量還有待于進(jìn)一步的研究。